新型贝莱斯芽胞杆菌菌株及其应用的制作方法

本技术要求于2020年9月7日提交的韩国专利申请10-2020-0114169的优先权，其全部内容为本技术所引用。本发明涉及新型贝莱斯芽胞杆菌菌株id-a01、id-a02、id-a03和id-a04及其应用；更具体地，涉及用于治疗龋齿、牙周病或口臭的药物组合物，其含有具有治疗龋齿和牙周疾病以及改善口臭效果的新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、或者所述贝莱斯芽胞杆菌菌株的培养基或其培养上清液作为活性成分；以及医药部外品组合物；以及用于预防或改善龋齿、牙周病或口臭的保健功能性食品组合物和食品组合物，所述保健功能性食品组合物和食品组合物含有所述贝莱斯芽胞杆菌菌株、包含其的培养基或其培养上清液作为活性成分。

背景技术：

1、最近，由于不正确的饮食习惯和衰老、免疫力降低、营养和代谢紊乱增加，导致患牙周病的患者数量增加。牙周病的直接原因是在牙齿中不断形成的称为牙菌斑的菌膜，以及在不去除牙菌斑的情况下变硬的牙石。当牙菌斑和牙石沉积时，牙龈从牙齿上脱落，导致牙齿和牙龈之间发炎。

2、当牙槽骨等随着年龄的增长而先天性和获得性降解时，就会发生牙周病，代表性的牙周病包括牙龈炎和牙周炎症。牙龈炎是一种初期牙周病，其牙龈软组织发生炎症，症状相对较轻，恢复处于可逆状态。当牙周炎症和牙龈炎未得到治疗且炎症发展在牙龈和耻骨周围时，慢性炎症反应通过细菌毒素发展，隔离和感染的牙周袋在牙龈和牙齿之间形成。随着牙周炎变严重，牙周袋深度加深，最终由牙周膜引起炎症，导致骨质流失。

3、在牙周病中，通过改善患者的口腔卫生状况预防是最重要的，且在临床上，主要通过非手术或外科除垢、牙根规划、皮瓣手术以及应用新附着体的牙周组织再生等进行外科治疗。然而，在这些外科治疗方法中，大多数情况下，治疗很麻烦，有效治疗很困难，治疗仅限于疾病进展到一定程度时的治疗，而非预防疾病，如果不进行治疗，疾病就会慢性发展。此外，作为辅助治疗，使用全身性抗生素和局部缓释剂甚至会在不必要的部位过量释放药物，导致副作用。最近，据报道表现出抗生素耐药性的牙周病细菌会导致严重的问题。

4、龋齿是指蛀牙，和牙齿硬组织被侵蚀和丢失的症状，称为牙科龋齿。龋齿是一种感染性细菌疾病，其会引起疼痛，牙齿的一部分硬钙化组织溶解和破坏导致牙齿脱落，占牙科疾病的最大部分，且发病率呈上升趋势。根据韩国牙科协会的报告，90％以上的儿童患有龋齿，80％以上的成年人患有牙龈疾病。这些疾病的主要原因是口腔内作为微生物感染的细菌、食物和唾液的相互作用。

5、同时，口臭指的是来自口腔和邻近器官的气味，许多人称口臭给日常生活带来不便。85％至90％的口臭来自口腔，尤其是舌头后部。口臭的主要成分是挥发性硫化物，但挥发性硫化物总量的90％由半胱氨酸产生的硫化氢和蛋氨酸产生的甲硫醇组成。这些成分是由厌氧细菌产生的，舌头的后部成为细菌最重要的栖息地。这一部位没有被唾液很好地清理干净，且有许多小洼地，细菌经常在此生存。厌氧细菌产生的挥发性硫化物是导致口臭的最重要原因，其他口腔疾病例如龋齿和牙周炎也会导致口臭。

6、口臭患者口腔中常见的细菌有具核梭杆菌(fusobacterium nucleatum)、中间普氏杆菌(prevotella intermedia)和牙龈卟啉单胞菌(porphyromonas gingivalis)。在相关技术中，拟杆菌和卟啉单胞菌很可能被认为是与普氏杆菌相同属的细菌。引起口臭的厌氧菌种类很多，但引起口臭的代表性细菌是具核梭杆菌和牙龈卟啉单胞菌。

7、近年来，有人试图在试管中用乳酸菌抑制厌氧菌的增殖。乳酸菌是通过碳水化合物发酵产生乳酸作为最终代谢产物的细菌，乳酸菌存在于人类和动物的口腔和消化道中，通常用于发酵食品(如泡菜或酸奶)的制造过程。然而，当将乳酸菌像金属盐或消毒剂一样通过唾液稀释到口腔中时，乳酸菌被立即吞咽，因此有乳酸菌难以留在口腔中的问题。此外，试管中嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)和干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)等乳酸菌产生强酸，以抑制厌氧菌的增殖，但在正常人的口腔中，乳酸菌产生的强酸通过唾液的缓冲作用被中和，因此，其很难抑制其他细菌的增殖。此外，由于强酸会导致牙科龋齿，当这些细菌在口腔中长期使用时，存在不利于口腔卫生的问题。

8、另一方面，在相关技术中有菌株具有改善龋齿、改善牙周病和改善口臭的功能之一，但几乎没有具有改善龋齿、牙周病和口臭的所有功能的菌株。

9、现有技术

10、专利文件

11、(专利文件1)韩国专利注册号10-1956759

12、(专利文件2)韩国专利注册号10-1629551

13、公开内容

14、技术问题

15、因此，本发明人在努力寻找在治疗牙周病上具有优异效果的菌株时发现一种特定的贝莱斯芽胞杆菌菌株在治疗或预防龋齿和牙周病、以及改善口臭方面具有优异的效果，从而完成本发明。

16、因此，本发明的一个目的是提供一种新型贝莱斯芽胞杆菌菌株。

17、本发明的另一个目的是提供一种所述新型贝莱斯芽胞杆菌菌株的培养基。

18、本发明的再一个目的是提供一种所述新型贝莱斯芽胞杆菌菌株的培养上清液。

19、此外，本发明的另一个目的是提供一种治疗龋齿、牙周病或口臭的药物组合物，其含有新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液作为活性成分。

20、此外，本发明的另一个目的是提供一种治疗龋齿、牙周病或口臭的药物组合物，其由新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液组成。

21、此外，本发明的另一个目的是提供一种治疗龋齿、牙周病或口臭的药物组合物，其基本上由新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液组成。

22、本发明的再一个目的是提供一种预防或改善龋齿、牙周病或口臭的医药部外品组合物，其含有新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液作为活性成分。

23、此外，本发明的再一个目的是提供一种预防或改善龋齿、牙周病或口臭的医药部外品组合物，其由新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液组成。

24、此外，本发明的再一个目的是提供一种预防或改善龋齿、牙周病或口臭的医药部外品组合物，其主要由新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液组成。

25、本发明的再另一个目的是提供一种预防或改善龋齿、牙周病或口臭的保健功能性食品组合物，其含有新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液作为活性成分。

26、此外，本发明的再另一个目的是提供一种预防或改善龋齿、牙周病或口臭的保健功能性食品组合物，其由新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液组成。

27、此外，本发明的另一个目的是提供一种预防或改善龋齿、牙周病或口臭的保健功能性食品组合物，其主要由新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液组成。

28、本发明的再另一个目的是提供一种预防或改善龋齿、牙周病或口臭的食品组合物，其含有新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液作为活性成分。

29、此外，本发明的再另一个目的是提供一种预防或改善龋齿、牙周病或口臭的食品组合物，其由新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液组成。

30、此外，本发明的再另一个目的是提供一种用于预防或改善龋齿、牙周病或口臭的食品组合物，其主要由新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液组成。

31、本发明的再另一个目的是提供一种预防或改善龋齿、牙周病或口臭的牙膏组合物，其含有新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液作为活性成分。

32、此外，本发明的再另一个目的是提供一种用于预防或改善龋齿、牙周病或口臭的牙膏组合物，其由新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液组成。

33、此外，本发明的再另一个目的是提供一种预防或改善龋齿、牙周病或口臭的牙膏组合物，其主要由新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液组成。

34、本发明的再另一个目的是提供一种用于预防或改善龋齿、牙周病或口臭的口腔清洗剂组合物，其含有新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液作为活性成分。

35、此外，本发明的再另一个目的是提供一种用于预防或改善龋齿、牙周病或口臭的口腔清洗剂组合物，其由新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液组成。

36、此外，本发明的再另一个目的是提供一种用于预防或改善龋齿、牙周病或口臭的口腔清洗剂组合物，其主要由新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液组成。

37、本发明的再另一个目的是提供一种预防或改善龋齿、牙周病或口臭的漱口剂组合物，其含有新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液作为活性成分。

38、此外，本发明的再另一个目的是提供一种预防或改善龋齿、牙周病或口臭的漱口剂组合物，其由新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液组成。

39、此外，本发明的再另一个目的是提供一种预防或改善龋齿、牙周病或口臭的漱口剂组合物，其主要由新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液组成。

40、本发明的再另一个目的是提供一种新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液在制备用于治疗龋齿、牙周病或口臭的试剂中的应用。

41、本发明的另一个目的是提供一种治疗龋齿、牙周病或口臭的方法，包括向有需要的受试者施用有效量的含有新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液的组合物。

42、技术方案

43、为了实现所述目的，本发明提供了一种新型贝莱斯芽胞杆菌菌株。

44、为了实现本发明的另一个目的，本发明提供了一种所述新型贝莱斯芽胞杆菌菌株的培养基。

45、为了实现本发明的再一个目的，本发明提供了一种所述新型贝莱斯芽胞杆菌菌株的培养上清液。

46、为了实现本发明的另一个目的，本发明提供了一种治疗龋齿、牙周病或口臭的药物组合物，其含有新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液作为活性成分。

47、此外，本发明提供了一种治疗龋齿、牙周病或口臭的药物组合物，其由新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液组成。

48、此外，本发明提供一种用于治疗龋齿、牙周病或口臭的药物组合物，其主要由新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液组成。

49、为了实现本发明的再一个目的，本发明提供了一种预防或改善龋齿、牙周病或口臭的医药部外品组合物，其含有新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液作为活性成分。

50、此外，本发明提供了一种用于预防或改善龋齿、牙周病或口臭的医药部外品组合物，其由新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液组成。

51、此外，本发明提供一种用于预防或改善龋齿、牙周病或口臭的医药部外品组合物，其主要由新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液组成。

52、为了实现本发明的另一个目的，本发明提供了一种预防或改善龋齿、牙周病或口臭的保健功能性食品组合物，其含有新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液作为活性成分。

53、此外，本发明提供了一种预防或改善龋齿、牙周病或口臭的保健功能性食品组合物，其由新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液组成。

54、此外，本发明提供了一种预防或改善龋齿、牙周病或口臭的保健功能性食品组合物，其主要由新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液组成。

55、为了实现本发明的再另一个目的，本发明提供了一种预防或改善龋齿、牙周病或口臭的食品组合物，其含有新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液作为活性成分。

56、此外，本发明提供了一种预防或改善龋齿、牙周病或口臭的食品组合物，其由新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液组成。

57、此外，本发明提供了一种用于预防或改善龋齿、牙周病或口臭的食品组合物，其基本上由新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液组成。

58、为了实现本发明的再另一个目的，本发明提供了一种预防或改善龋齿、牙周病或口臭的牙膏组合物，其含有新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液作为活性成分。

59、此外，本发明提供了一种预防或改善龋齿、牙周病或口臭的牙膏组合物，其由新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液组成。

60、此外，本发明提供了一种预防或改善龋齿、牙周病或口臭的牙膏组合物，其主要由新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液组成。

61、为了实现本发明的另一个目的，本发明提供了一种预防或改善龋齿、牙周病或口臭的口腔清洗剂组合物，其含有新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液作为活性成分。

62、此外，本发明提供了一种预防或改善龋齿、牙周病或口臭的口腔清洗剂组合物，其由新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液组成。

63、此外，本发明提供一种预防或改善龋齿、牙周病或口臭的口腔清洗剂组合物，其主要由新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液组成。

64、为了实现本发明的另一个目的，本发明提供了一种预防或改善龋齿、牙周病或口臭的漱口剂组合物，其含有新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液作为活性成分。

65、此外，本发明提供了一种预防或改善龋齿、牙周病或口臭的漱口剂组合物，其由新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液组成。

66、此外，本发明提供一种预防或改善龋齿、牙周病或口臭的漱口剂组合物，其主要由新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液组成。

67、为了实现本发明的另一个目的，本发明提供了一种新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液在制备用于治疗龋齿、牙周病或口臭的试剂中的应用。

68、为了实现本发明的再另一个目的，本发明提供了一种治疗龋齿、牙周病或口臭的方法，包括向有需要的受试者施用有效量的含有新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液的组合物。

69、除非另有定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语具有本领域技术人员通常理解的相同含义。以下参考文献提供了本发明说明书中使用的各种术语的一般定义：singleton et al.,dictionary of microbiology and molecular biology(2thed.1994)；the cambridge dictionary of science and technology(walkered.,1988)；和hale&marham,the harper collins dictionary of biology。

70、在下文中，将详细描述本发明。

71、本发明提供了一种新型贝莱斯芽胞杆菌菌株。

72、所述菌株可以是由菌株本身、菌株裂解物、菌株浓缩物、菌株提取物和菌株干燥产物组成的组中选择的至少一种。

73、在本发明中，术语“芽胞杆菌”是在自然界广泛分布的需氧或兼性厌氧革兰氏阳性芽胞杆菌，属于该芽胞杆菌的微生物包括贝莱斯芽胞杆菌(bacillus velezensis)、枯草芽胞杆菌(bacillus subtilis)等。本发明人将一种属于贝莱斯芽胞杆菌的新菌株鉴定为芽胞杆菌，其具有如下治疗或预防龋齿和牙周病的效果。

74、本发明的贝莱斯芽胞杆菌菌株id-a01(保藏编号：kctc14180bp)、id-a02(保藏编号：kctc14181bp)、id-a03(保藏编号：kctc14182bp)和id-a04(保藏编号：kctc14183bp)是源自发酵食品的新型贝莱斯芽胞杆菌菌株，该菌株于2020年5月11日保藏在kribb生物资源中心。

75、本发明的贝莱斯芽胞杆菌菌株id-a01、id-a02、id-a03和id-a04的培养上清液的特征在于，不仅对牙周病的致病细菌具有抗菌作用，还具有炎性细胞因子分泌抑制作用和生物膜生成抑制作用，还对口臭主要原因的挥发性硫化物(vsc)有抑制作用。

76、这在本发明的实施方案中得到了很好的展现。

77、在本发明的一个实施方案中，分别在tyb培养基和rcb培养基中接种和培养从发酵食品中分离的贝莱斯芽胞杆菌菌株id-a01、id-a02、id-a03和id-a04，以及牙周病代表性致病菌(牙龈卟啉单胞菌(porphyromonas gingivalis，pgi)和具核梭杆菌(fusobacteriumnucleatum，fnu))，然后测定吸光度。结果证明贝莱斯芽胞杆菌菌株id-a01、id-a02、id-a03和id-a04的培养上清液对pgi和fnu具有极好的抗菌效果(参见实施例5)。

78、此外，在本发明的另一个实施方案中，为了确认莱斯芽胞杆菌菌株的培养上清液的生物膜抑制效果，将培养基分配到涂有唾液的96孔板中(4hr，37℃)然后分别以25％和0.5％的浓度接种牙龈卟啉单胞菌(porphyromonas gingivalis，pgi)和具核梭杆菌(fusobacterium nucleatum，fnu)，并在37℃下同时处理和厌氧培养样品4天，确认结果。结果证明贝莱斯芽胞杆菌菌株id-a01、id-a02、id-a03和id-a04的培养上清液具有优异的生物膜抑制效果(参见实施例6和7)。

79、此外，在本发明的另一个实施方案中，为了确认莱斯芽胞杆菌菌株的培养上清液的炎性细胞因子分泌抑制作用，以1×104细胞/孔在96孔板上接种hgf-1细胞培养24小时，候选组处理24小时，然后用50μg/ml牙龈卟啉单胞菌-lps培养24小时，收集上清液并进行分析。结果证明贝莱斯芽胞杆菌菌株id-a01、id-a02、id-a03和id-a04的培养上清液抑制炎症细胞因子的分泌(参见实施例9)。

80、本发明的术语“培养基”是指培养本发明的贝莱斯芽胞杆菌菌株id-a01、id-a02、id-a03和id-a04的液体培养基，包括含有菌株的胰蛋白酶大豆肉汤(tryptic soy broth，tsb)。

81、“液体培养基”是一种不含琼脂的液体培养基，用于微生物增殖和检测细菌的生化试验、增殖和代谢产物。

82、使用震荡培养法培养分离的贝莱斯芽胞杆菌菌株。震荡培养法是一种通过持续摇动固定在往复摇动器或旋转摇动器上的三角瓶等来有效通风和搅拌的方法。在震荡培养的情况下，菌株培养在含有胰蛋白胨17g/l、大豆胨3g/l、葡萄糖2.5g/l、氯化钠5g/l和磷酸二钾2.5g/l的tsb培养基(mb细胞)中、在37℃、200rpm条件下培养40小时。培养完成后，培养基以13,000rpm离心20分钟，以去除细胞并获得培养物上清液。使用8.25％盐酸将所述培养物上清液的ph值校正为6.5，然后使用0.22μm过滤器对所述培养物上清液进行抗菌化以完全去除细胞。

83、本发明提供了一种所述新型贝莱斯芽胞杆菌菌株的培养上清液。

84、本发明的术语“培养上清液”指培养本发明的贝莱斯芽胞杆菌菌株id-a01、id-a02、id-a03和id-a04，然后去除细胞的液体培养基，并且包括不含细胞的胰蛋白酶大豆肉汤(tsb)。

85、本发明的贝莱斯芽胞杆菌菌株的培养上清液具有治疗或预防龋齿和牙周病的作用。因此，本发明提供了一种治疗龋齿、牙周病或口臭的药物组合物，其包含新型莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液。

86、本发明的术语“治疗”是指获得有益或更好的临床结果的方法。就本发明的目的而言，有益或更好的临床结果包括无限制地减轻症状、减小疾病范围、稳定(即，不退化)疾病状况、延迟或降低疾病进展速度、改善或暂时缓解和减轻疾病状况(部分或全部)，以及是否可检测；此外，“治疗”指治疗性治疗和预防方法。上述治疗不仅包括预防性疾病，还包括已经发生的疾病所需的治疗。

87、本发明的术语“龋齿”是指保护牙齿牙质的牙釉质被栖息在口腔中的细菌分解糖、淀粉等产生的酸破坏。

88、本发明的术语“牙周病”可以选自，但不限于由牙龈炎、牙周炎、牙龈出血、牙龈收缩、牙周袋、冠周炎和牙周脓肿组成的组中的至少一种，优选牙龈炎。

89、本发明的术语“生物膜”是指多种微生物(包括牙菌斑中的细菌)相互聚集的现象，当生物膜未被去除而变厚，且其中的病理细菌数量增加到我们的身体无法抵御时，口腔疾病就会发生。

90、根据本发明，所述药物组合物可以配制成适当的形式，以单独包括新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液或与药学上可接受的载体组合，并且可以进一步包含赋形剂或稀释剂。“药学上可接受的”指当给药于人类时生理上可接受且不会引起过敏反应(如胃肠道紊乱、头晕等)或类似反应的无毒成分。

91、药学上可接受的载体可进一步包括例如用于口服给药的载体或用于肠外给药的载体。用于口服给药的载体可包括乳糖、淀粉、纤维素衍生物、硬脂酸镁、硬脂酸等。此外，用于口服给药的载体可包括用于对肽制剂进行口服给药的各种药物递送材料。此外，用于肠外给药的载体可包括水、合适的油、盐水、含水葡萄糖、乙二醇等，并可进一步包括稳定剂和防腐剂。合适的稳定剂包括抗氧化剂，例如氢化钠亚硫酸钠、亚硫酸钠或抗坏血酸。合适的防腐剂包括苯扎氯铵、对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯丙酯和氯丁醇。本发明的药物组合物还可包括润滑剂、润湿剂、甜味剂、调味剂、乳化剂、悬浮剂等除上述成分外的其他成分。其他药学上可接受的载体和试剂可指本领域已知的载体和试剂。

92、本发明的组合物甚至可通过任何方法对包括人类在内的哺乳动物给药。例如，本发明的组合物可以口服或肠外给药。肠外给药方法可以是，但不限于静脉内、肌肉内、动脉内、髓内、鞘膜内、心内、经皮、皮下、腹腔内、鼻内、肠道内、局部、舌下或直肠内给药。

93、根据如上所述的给药途径，本发明的药物组合物可配制为口服给药或肠外给药的制剂。

94、在用于口服给药的制剂的情况下，本发明的组合物可以使用本领域已知的方法与口腔崩解膜剂、粉末、颗粒、片剂、药丸、糖衣片、胶囊、液体、凝胶、糖浆剂、浆体、悬浮液等配制。例如，口服制剂可通过将活性成分与固体赋形剂混合，粉碎混合物，添加合适的佐剂，然后将混合物加工成颗粒混合物而获得片剂或糖衣片。合适赋形剂的实例可包括填料，例如包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、木糖醇、赤藓糖醇和麦芽糖醇等的糖，包括玉米淀粉、小麦淀粉、大米淀粉、马铃薯淀粉等的淀粉，包括纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠的纤维素，羟丙基甲基纤维素等、明胶、聚乙烯吡咯烷酮等。在某些情况下，可添加交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂、海藻酸或海藻酸钠作为崩解剂。此外，本发明的药物组合物还可包括抗凝剂、润滑剂、润湿剂、调味剂、乳化剂、防腐剂等。

95、用于胃肠外给药的制剂可以以贴片剂、注射剂、乳膏剂、洗剂、外用软膏剂、油剂、润湿剂、凝胶剂、气溶胶和鼻吸入剂的形式通过本领域已知的方法配制。这些制剂在药物化学中通常已知的所有处方中均有描述。

96、为了实现本发明的再一个目的，本发明提供了一种用于预防或改善龋齿、牙周病或口臭的医药部外品组合物，其含有新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液作为活性成分。

97、在本发明的一个实施方案中，为了确认从发酵食品中分离的贝莱斯芽胞杆菌菌株id-a01、id-a02、id-a03和id-a04的培养上清液对口臭的影响，测试了作为口臭主要原因的挥发性硫化合物(volatile sulfur compound，vsc)的生成抑制活性。结果证明贝莱斯芽胞杆菌菌株id-a01、id-a02、id-a03和id-a04的培养上清液具有优异的vsc生成抑制效果(参见实施例10)。

98、本发明的术语“口臭”是一种来自口腔和邻近器官的气味，通常会引起他人或自己的不快。口臭的主要原因是挥发性含硫化合物(vsc)，其由口腔中存在的细菌降解食物残渣、唾液、血液、口腔粘膜细胞等中所含的氨基酸和蛋白质而产生。分析挥发性化合物时，甲硫醇(ch3sh)和硫化氢(h2s)占90％，其具有臭鸡蛋和腐烂洋葱的气味。

99、本发明的“改善”是指至少降低与缓解或治疗条件相关的参数(例如，症状程度)的所有行动。

100、本发明的术语“医药部外品”包括与用于治疗、迁移、治愈或预防人类或动物疾病的纤维、橡胶制品或类似制品中的一种相对应的产品，它们对人体作用较弱或不直接作用于人体，且不是机械或机器及其类似物，以及用于灭菌、除虫和类似目的的用于预防传染病的制剂。

101、在本发明中，所述医药部外品可以，但不限于选自由口腔清洗剂、漱口剂、抗液体剂、牙膏、卫生垫、一次性衬垫、口罩、眼绷带、绷带、弹性绷带、石膏绷带、圆柱形弹性绷带、纱布、药棉、创可贴、除臭剂、软膏和巴布剂组成的组。

102、为了实现本发明的再一个目的，本发明提供了一种预防或改善龋齿、牙周病或口臭的保健功能性食品组合物，其含有新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液作为活性成分。

103、本发明的术语“保健功能食品”包括食品组，其赋予食品附加值，以便使用物理、生物化学、生物技术方法为特定目的作用和表达相应食品的功能，或设计和加工以充分表达食品组合物的生物防御节律调节、疾病预防和恢复等内部调节功能的食品。

104、本发明的保健功能性食品组合物可用于治疗或预防龋齿和牙周病或改善口臭。

105、在本发明中，保健功能性食品组合物可以，但不限于是由片剂、胶囊、丸剂和颗粒组成的制剂中选择的至少一种制剂。

106、此外，所述组合物可以按照各一般方法以口服制剂的形式配制和使用，例如粉末、颗粒、片剂、胶囊、悬浮液、乳剂、糖浆、气雾剂等、外部制剂、栓剂和无菌注射溶液。可包含在含有化合物的组合物中的载体、赋形剂和稀释剂可包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯胶、海藻酸钠、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁和矿物油。在制剂时，所述制剂可通过使用稀释剂或赋形剂制备，例如通常使用的填料、填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂和表面活性剂。用于口服的固体制剂包括片剂、丸剂、粉末、颗粒、胶囊等，并且固体制剂可通过将至少一种赋形剂(例如淀粉、碳酸钙、蔗糖或乳糖、明胶等)与提取物混合来制备。此外，除简单的赋形剂外，还可使用硬脂酸镁、滑石粉等润滑剂。对应于悬浮液、口服液、乳液、糖浆等用于口服的液体制剂，除了通常使用的简单稀释剂水和液体石蜡之外，还可以包括各种赋形剂，例如润湿剂、甜味剂、芳香剂、防腐剂等。用于肠外给药的制剂包括无菌水溶液、非水溶液、悬浮液、乳液、冻干剂和栓剂。作为非水溶液和悬浮液，可使用丙二醇、聚乙二醇、植物油(例如橄榄油)、可注射酯(例如油酸乙酯)等。可使用维替普索、聚乙二醇、吐温61、可可脂、月桂酸、甘油明胶等作为栓剂的基质。

107、为了实现本发明的再另一个目的，本发明提供了一种预防或改善龋齿、牙周病或口臭的食品组合物，其含有新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液作为活性成分。

108、本发明所述的食品组合物可以以组合物形式与已知活性成分组合制备，已知活性成分对龋齿、牙周病或口臭有效，并包括其所有形式，例如营养补充剂、保健食品、食品添加剂等。可根据本领域已知的一般方法以各种形式制备所述类型的食品组合物。例如，保健食品可以以含有本发明食品组合物的茶、果汁和饮料的形式制备，并且可以通过将含有新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液作为活性成分的食品组合物造粒、包封或粉化来获得。

109、此外，保健功能食品可通过将本发明的食品组合物添加到如下食品中来制备：饮料(包括酒精饮料)、水果及其加工食品(例如罐装水果、瓶装食品、果酱、柠檬酱等)、鱼、肉及其加工食品(例如火腿、香肠、腌牛肉等)、面包和面条(如乌冬、荞麦面、拉面、意大利面、通心粉等)、果汁、各种饮料、饼干、糖果、乳制品(如黄油、奶酪等)、食用植物油、人造黄油、植物蛋白、袋装食品、冷冻食品、各种调味品(如豆瓣酱、大豆酱油、酱汁等)等。

110、在本发明的食品组合物中，除了贝莱斯芽胞杆菌菌株或其培养基或其培养上清液外，辅助成分可以为含有矿物质的化合物，例如维生素b、c和e、β-胡萝卜素、ca、mg和zn，以及化合物，例如磷脂(例如卵磷脂)或麦芽酚、低聚糖、氨基酸等。其中，更优选的是，通过混合和使用维生素c和e、β-胡萝卜素、麦芽醇等2至3种成分，因为可能增强生物活性效果。

111、此外，除了所述成分外，为了吸引人，可混合已知添加剂：天然香料或天然果汁(如李子味、柠檬味、菠萝味或香草味)、天然色素(如叶绿素和黄酮)、甜味成分果糖、蜂蜜、糖醇和糖以及酸化剂(如柠檬酸、柠檬酸钠)。

112、在本发明的食品组合物中，贝莱斯芽胞杆菌菌株或其培养基或其培养上清液的优选含量可为相对于食品总重量的约0.01-10wt％。优选地，当食品组合物以0.1mg/kg/天-200mg/kg/天的量摄取时，可以展现出预防或改善龋齿、牙周病或口臭的效果。

113、本发明提供了一种新型贝莱斯芽胞杆菌菌株或其培养基或其培养上清液在制备用于治疗龋齿、牙周病或口臭的试剂中的应用。

114、本发明提供一种治疗龋齿、牙周病或口臭的方法，包括向有需要的受试者施用有效量的包含新型贝莱斯芽胞杆菌菌株、其培养基或其培养上清液的组合物。

115、本发明的术语“有效量”是指当给药受试者时，表现出改善、治疗、预防、检测和诊断龋齿、牙周病或口臭的效果，或抑制或减少龋齿、牙周病或口臭的量。“受试者”可以为动物，优选为哺乳动物，尤其为包括人类在内的动物，也可以是来自动物的细胞、组织和器官。受试者可能为需要这些效果的患者。

116、本发明术语“治疗”全部指，但不限于改善龋齿、牙周疾病或口臭或这些疾病的症状，可包括治疗或充分地预防这些疾病或改善其状况，并包括缓解、治疗或预防由疾病引起的症状或大部分症状。

117、本文中术语“包含”的含义与“包括”或“其特征在于”相同，且不排除根据本发明的组合物或方法中未具体提及的方法的附加成分或步骤。除非另有说明，否则术语“包括”指不包括附加元素、步骤或成分等。术语“主要由……组成”是指除所述物质或步骤外，在组合物或方法范围内，还包括基本上不影响其基本性质的物质或步骤。

118、有益效果

119、根据本发明，贝莱斯芽胞杆菌菌株id-a01、id-a02、id-a03和id-a04或其培养基或其培养上清液表现出抗菌、抗炎，对龋齿和牙周病的致病菌有生物膜抑制作用，对预防或治疗龋齿和牙周病或改善口臭有优异的效果。

技术实现思路