蛋白质组合物以及其产生和使用方法与流程

背景技术：

1、抗体，如单克隆抗体(mab)，是制药行业中的重要一类治疗性药物。抗体治疗剂已被开发用于治疗许多疾病，如癌症、炎症和自身免疫障碍。

2、用于药物应用的蛋白质(如单克隆抗体)的产生通常涉及上游过程技术(例如细胞培养)和下游过程技术(例如蛋白质纯化)的使用。通常，抗体在哺乳动物细胞培养物中作为重组蛋白产生，以确保适当的折叠和翻译后修饰。由细胞培养物产生的单克隆抗体需要从宿主细胞蛋白和其它杂质中纯化，以便被有效利用，例如，以改善安全性配置。

3、表现出不同水平的变体和杂质的蛋白质可以通过上游和下游过程产生。此类蛋白质变体和杂质包含但不限于：产物相关物质，例如蛋白质聚集体、片段或带电物种，例如酸性或碱性物种；和/或过程相关杂质，例如宿主细胞蛋白、核酸和残余介质组分。

技术实现思路

1、本发明基于用于蛋白质产生，例如，抗体或其抗原结合部分的产生的上游和下游过程技术的鉴定和优化，由此导致具有低水平的变体和/或杂质的组合物，所述低水平的变体和/或杂质例如低水平的产物相关物质，例如产物聚集体、片段或带电物种，例如酸性或碱性物种；和/或低水平的过程相关杂质，例如宿主细胞蛋白。

2、因此，一方面，本发明提供了一种产生具有水平降低的半抗体的包含所关注的蛋白质的制剂的方法，所述方法包含使包含所述所关注的蛋白质以及半抗体的样品经受阳离子交换色谱树脂或混合模式色谱树脂，由此产生具有水平降低的半抗体的包含所述所关注的蛋白质的所述制剂。

3、另一方面，本发明提供了一种降低包含所关注的蛋白质的制剂中的半抗体的水平的方法，所述方法包含使包含所关注的蛋白质以及半抗体的样品经受阳离子交换色谱树脂或混合模式色谱树脂，由此降低包含所述所关注的蛋白质的所述制剂中的半抗体的水平。

4、在一些实施例中，所述所关注的蛋白质是抗体或其抗原结合部分。在一些实施例中，所述抗体或其抗原结合部分是抗gm-csfrα抗体或其抗原结合部分。在一些实施例中，所述抗gm-csfrα抗体或其抗原结合部分是玛弗利木单抗(mavrilimumab)。

5、在一些实施例中，所述样品经受阳离子交换色谱树脂。在一些实施例中，所述阳离子交换色谱树脂包含选自由以下组成的组的官能团：巯基、磺酸酯、硫酸酯、羧甲基、磺乙基、磺丙基、磷酸酯和磺酸酯。在一些实施例中，所述阳离子交换色谱树脂选自由以下组成的组：porostmxs cex、captotmsimpact、totopearltmgigagap cm 650m和toyopealtm硫酸酯650f。在一些实施例中，所述阳离子交换色谱树脂以结合洗脱模式运行。

6、在一些实施例中，所述样品经受混合模式色谱树脂。在一些实施例中，所述混合模式色谱树脂包含选自由以下组成的组的官能团：羧基、羟基、n-苄基-n-甲基乙醇胺、苯基丙胺和己胺。在一些实施例中，所述混合模式色谱树脂选自由capttmmmc impres和captotmadhere impres组成的组。

7、在一些实施例中，所述制剂包含小于约20％、约19％、约18％、约17％、约16％、约15％、约14％、约13％、约12％、约11％、约10％、约9％、约8％、约7％、约6％、约5％、约4％、约3％、约2.8％、约2％、约1％或约0.5％的半抗体。

8、在一些实施例中，所述制剂包含小于约2.8％的半抗体。

9、在一些实施例中，所述制剂包含约0.1-20％、约0.1-10％、约0.1-9％、约0.1-8％、约0.1-7％、约0.1-6％、约0.1-5％、约0.1-4％、约0.1％-3％、约0.1％-2.8％、约0.5％-2.5％、约0.5％-1.5％、约0.6-1.7％、约0.6-18％或约1-17％的半抗体。

10、在一些实施例中，所述制剂包含约0.6-1.7％的半抗体。

11、在一些实施例中，与所述样品中的半抗体的水平相比，所述制剂中的半抗体的水平降低了至少约90％、约80％、约70％、约60％、约50％、约40％、约30％、约20％或约10％。

12、在一些实施例中，所述方法进一步包含使用洗脱缓冲液收集洗脱液级分。

13、在一些实施例中，所述洗脱液级分包含小于约20％、约19％、约18％、约17％、约16％、约15％、约14％、约13％、约12％、约11％、约10％、约9％、约8％、约7％、约6％、约5％、约4％、约3％、约2.8％、约2％、约1％或约0.5％的半抗体。

14、在一些实施例中，所述洗脱液级分包含约0.1-20％、约0.1-10％、约0.1-9％、约0.1-8％、约0.1-7％、约0.1-6％、约0.1-5％、约0.1-4％、约0.1％-3％、约0.1％-2.8％、约0.5％-2.5％、约0.5％-1.5％、约0.6-1.7％、约0.6-18％或约1-17％的半抗体。

15、在一些实施例中，所述洗脱液级分从阳离子交换色谱树脂收集。在一些实施例中，从阳离子交换色谱树脂收集的所述洗脱液级分包含约0.6-18％的半抗体。

16、在一些实施例中，所述洗脱液级分从混合模式色谱树脂收集。在一些实施例中，所述洗脱液级分从混合模式色谱树脂收集，并且包含约1-17％的半抗体。

17、在一些实施例中，与所述样品中的半抗体的水平相比，所述洗脱液级分中的半抗体的水平降低了至少约90％、约80％、约70％、约60％、约50％、约40％、约30％、约20％或约10％。

18、在一些实施例中，所述洗脱缓冲液包含约1-500mm、约10-250mm、约10-150mm、约10-100mm、约20-90mm、约30-80mm、约40-70mm或约50-60mm的乙酸钠。在一些实施例中，其中所述洗脱缓冲液包含约40-60mm的乙酸钠。

19、在一些实施例中，所述洗脱缓冲液包含约1-500mm、约10-250mm、约10-150mm、约10-100mm、约20-90mm、约30-80mm、约40-70mm或约50-60mm的氯化钠。在一些实施例中，所述洗脱缓冲液包含约40-60mm的氯化钠。

20、在一些实施例中，所述洗脱缓冲液包含约4-7、约5-6、约5-5.5的ph。在一些实施例中，所述洗脱缓冲液包含约5-5.5的ph。

21、在一些实施例中，所述洗脱缓冲液包含约50mm的乙酸钠、约55mm的氯化钠以及约5.35的ph。

22、在一些实施例中，所述所关注的蛋白质以约10-100g/l、约20-90g/l、约30-80g/l、约40-70g/l或约50-60g/l的水平上样到所述阳离子交换色谱树脂或所述混合模式色谱树脂上。在一些实施例中，所述所关注的蛋白质以约30-60g/l的水平上样到所述阳离子交换色谱树脂或所述混合模式色谱树脂上。

23、在一些实施例中，半抗体的水平是通过非还原ce-sds(用十二烷基硫酸钠进行的毛细管电泳)确定的。

24、一方面，本发明提供了一种组合物，其包含抗gm-csfrα抗体或其抗原结合部分，所述组合物包含小于约20％、约19％、约18％、约17％、约16％、约15％、约14％、约13％、约12％、约11％、约10％、约9％、约8％、约7％、约6％、约5％、约4％、约3％、约2.8％、约2％、约1％或约0.5％的半抗体。

25、在一些实施例中，所述组合物包含小于约2.8％的半抗体。

26、在一些实施例中，所述组合物包含约0.1-20％、约0.1-10％、约0.1-9％、约0.1-8％、约0.1-7％、约0.1-6％、约0.1-5％、约0.1-4％、约0.1％-3％、约0.1％-2.8％、约0.5％-2.5％、约0.5％-1.5％、约0.6-1.7％、约0.6-18％或约1-17％的半抗体。在一些实施例中，所述组合物包含约0.6-1.7％的半抗体。

27、一方面，本发明提供了一种组合物，其包含抗gm-csfrα抗体或其抗原结合部分，其中所述组合物包含从阳离子交换色谱树脂或混合模式色谱树脂收集的洗脱液级分，并且其中所述洗脱液级分包含小于约20％、约19％、约18％、约17％、约16％、约15％、约14％、约13％、约12％、约11％、约10％、约9％、约8％、约7％、约6％、约5％、约4％、约3％、约2.8％、约2％、约1％或约0.5％的半抗体。

28、在一些实施例中，所述洗脱液级分包含约0.1-20％、约0.1-10％、约0.1-9％、约0.1-8％、约0.1-7％、约0.1-6％、约0.1-5％、约0.1-4％、约0.1％-3％、约0.1％-2.8％、约0.5％-2.5％、约0.5％-1.5％、约0.6-1.7％、约0.6-18％或约1-17％的半抗体。

29、在一些实施例中，所述洗脱液级分从阳离子交换树脂收集并且包含约0.6-18％的半抗体。

30、在一些实施例中，所述洗脱液级分从混合模式树脂收集并且包含约1-17％的半抗体。

31、另一方面，本发明提供了一种组合物，其包含抗gm-csfrα抗体或其抗原结合部分，其中所述组合物包含从阳离子交换色谱树脂收集的流通和/或洗涤级分，并且其中所述流通和/或洗涤级分包含小于约20％、约19％、约18％、约17％、约16％、约15％、约14％、约13％、约12％、约11％、约10％、约9％、约8％、约7％、约6％、约5％、约4％、约3％、约2％或约1％的半抗体。

32、在一些实施例中，所述流通和/或洗涤级分包含小于约6％的半抗体。

33、在一些实施例中，半抗体的水平是通过非还原ce-sds(用十二烷基硫酸钠进行的毛细管电泳)确定的。

34、在一些实施例中，所述抗gm-csfrα抗体或其抗原结合部分是玛弗利木单抗。

35、一方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含本文所述的组合物中的任一种以及药学上可接受的载体。

36、一方面，本发明提供了一种产生具有水平降低的酸性物种的包含抗gm-csfrα抗体或其抗原结合部分的制剂的方法，所述方法包含使包含所述抗gm-csfrα抗体或其抗原结合部分以及酸性物种的样品经受阴离子交换色谱树脂或混合模式色谱树脂，由此产生具有水平降低的酸性物种的包含抗gm-csfrα抗体或其抗原结合部分的所述制剂。

37、另一方面，本发明提供了一种降低包含抗gm-csfrα抗体或其抗原结合部分的制剂中的酸性物种的水平的方法，所述方法包含使包含所述抗gm-csfrα抗体或其抗原结合部分以及酸性物种的样品经受阴离子交换色谱树脂或混合模式色谱树脂，由此降低包含所述抗gm-csfrα抗体或其抗原结合部分的所述制剂中的酸性物种的水平。

38、在一些实施例中，所述抗gm-csfrα抗体或其抗原结合部分是玛弗利木单抗。

39、在一些实施例中，所述样品经受阴离子交换色谱树脂。在一些实施例中，所述阴离子交换色谱树脂包含选自由以下组成的组的官能团：二乙基氨基乙基、四氨基乙基和季铵。在一些实施例中，所述阴离子交换色谱树脂选自由porostmxq aex和captotmq impres组成的组。在一些实施例中，所述阴离子交换色谱树脂以结合洗脱模式运行。

40、在一些实施例中，所述样品经受混合模式色谱树脂。在一些实施例中，所述混合模式色谱树脂包含选自由以下组成的组的官能团：羧基、羟基、n-苄基-n-甲基乙醇胺、苯基丙胺和己胺。在一些实施例中，所述混合模式色谱树脂是captotmadhere impres。

41、在一些实施例中，所述制剂包含小于约40％、约35％、约30％、约25％、约24％、约23％、约22％、约21％、约20％、约19％、约18％、约17％、约16％、约15％、约10％或约5％的酸性物种。

42、在一些实施例中，所述制剂包含约1-40％、约1-35％、约1-30％、约1-28％、约1-25％、约2-20％、约3-15％、约5-25％、约5-28％、约5-30％、约10-28％、约10-30％、约10-40％、约9-18％、约11-22％、约11-38％、约12-20％、约12-38％、约15-30％、约14-28％或约18-40％的酸性物种。

43、在一些实施例中，所述制剂包含约11-22％的酸性物种。在一些实施例中，所述制剂包含约11-38％的酸性物种。在一些实施例中，所述制剂包含约9-18％的酸性物种。在一些实施例中，所述制剂包含约11-38％的酸性物种以及小于约24％的碱性物种。在一些实施例中，所述制剂包含约11-38％的酸性物种以及(i)约58-62％的主要物种或(ii)大于约64％的主要物种。

44、在一些实施例中，所述方法进一步包含使用洗脱缓冲液收集洗脱液级分。

45、在一些实施例中，所述洗脱液级分包含小于约40％、约35％、约30％、约25％、约24％、约23％、约22％、约21％、约20％、约19％、约18％、约17％、约16％、约15％、约10％或约5％的酸性物种。

46、在一些实施例中，所述洗脱液级分包含约1-40％、约1-35％、约1-30％、约1-28％、约1-25％、约2-20％、约3-15％、约5-25％、约5-28％、约5-30％、约10-28％、约10-30％、约10-40％、约9-18％、约11-22％、约11-38％、约12-20％、约12-38％、约15-30％、约14-28％或约18-40％的酸性物种。

47、在一些实施例中，所述洗脱液级分从阴离子交换色谱树脂收集。在一些实施例中，从阴离子交换色谱树脂收集的所述洗脱液级分包含约11-22％的酸性物种。

48、在一些实施例中，所述洗脱液级分从混合模式色谱树脂收集。在一些实施例中，从混合模式色谱树脂收集的所述洗脱液级分包含约12-38％的酸性物种。

49、在一些实施例中，与所述样品中的酸性物种的水平相比，所述制剂或所述洗脱液级分中的酸性物种的水平降低了至少约90％、约80％、约70％、约60％、约50％、约40％、约30％、约20％或约10％。

50、在一些实施例中，所述洗脱缓冲液包含约1-500mm、约10-250mm、约50-200mm、约70-150mm、约90-130mm或约100-110mm的氯化钠。在一些实施例中，所述洗脱缓冲液包含约100-110mm的氯化钠。

51、在一些实施例中，所述洗脱缓冲液包含约1-500mm、约10-250mm、约20-150mm、约30-100mm、约20-90mm、约30-80mm、约40-70mm或约50-60mm的组氨酸。在一些实施例中，所述洗脱缓冲液包含约40-60mm的组氨酸。

52、在一些实施例中，所述洗脱缓冲液包含约1-500mm、约10-250mm、约10-150mm、约10-100mm、约20-90mm、约30-80mm、约40-70mm或约50-60mm的乙酸盐。在一些实施例中，所述洗脱缓冲液包含约40-60mm的乙酸盐。

53、在一些实施例中，所述洗脱缓冲液包含约1-500mm、约10-250mm、约10-150mm、约10-100mm、约20-90mm、约30-80mm、约40-70mm或约50-60mm的bis-tris。在一些实施例中，所述洗脱缓冲液包含约40-60mm的bis-tris。

54、在一些实施例中，所述洗脱缓冲液包含约5-7或约5.5-6.5的ph。在一些实施例中，所述洗脱缓冲液包含约5.5-6.5的ph。

55、在一些实施例中，所述洗脱缓冲液包含约50mm的组氨酸、约105mm的nacl，并且具有约6.0的ph。

56、在一些实施例中，所述所关注的蛋白质以约10-100g/l、约20-90g/l、约30-80g/l或约40-70g/l的水平上样到所述阴离子交换色谱树脂或所述混合模式色谱树脂上。在一些实施例中，所述所关注的蛋白质以约50-60g/l的水平上样到所述阴离子交换色谱树脂或所述混合模式色谱树脂上。

57、在一些实施例中，酸性物种的水平是通过离子交换色谱确定的。

58、在一些实施例中，在使所述样品经受阴离子交换色谱树脂或混合模式色谱树脂之前，使样品经受阳离子交换色谱树脂或混合模式色谱树脂。

59、一方面，本发明提供了一种组合物，其包含抗gm-csfrα抗体或其抗原结合部分，其中所述组合物包含所述抗体的小于约40％、约35％、约30％、约25％、约24％、约23％、约22％、约21％、约20％、约19％、约18％、约17％、约16％、约15％、约10％或约5％的酸性物种。

60、另一方面，本发明提供了一种组合物，其包含抗gm-csfrα抗体或其抗原结合部分，其中所述组合物包含约1-40％、约1-35％、约1-30％、约1-28％、约1-25％、约2-20％、约3-15％、约5-25％、约5-28％、约5-30％、约10-28％、约10-30％、约10-40％、约9-18％、约11-22％、约11-38％、约12-20％、约12-38％、约15-30％、约14-28％或约18-40％的酸性物种。

61、在一些实施例中，所述组合物包含约11-22％的酸性物种。在一些实施例中，所述组合物包含约9-18％的酸性物种。

62、一方面，本发明提供了一种组合物，其包含抗gm-csfrα抗体或其抗原结合部分，其中所述组合物包含所述抗体的小于约45％、约40％、约35％、约30％、约25％、约24％、约23％、约22％、约21％、约20％、约19％、约18％、约17％、约16％、约15％、约10％或约5％的碱性物种。在一些实施例中，所述组合物包含小于约24％的碱性物种。

63、另一方面，本发明提供了一种组合物，其包含抗gm-csfrα抗体或其抗原结合部分，其中所述组合物包含约1-45％、约1-40％、约1-35％、约1-25％、约5-35％、约10-35％、约15-35％、约1-30％、约1-25％、约1-24％、约5-25％、约5-30％、约5-45％、约10-25％、约10-30％、约10-40％、约15-25％、约15-30％、约15-35％、约15-25％、约17-26％、约9-29％、约9-41％或约16-41％的碱性物种。

64、在一些实施例中，所述组合物包含约16-41％的碱性物种。

65、一方面，本发明提供了一种组合物，其包含抗gm-csfrα抗体或其抗原结合部分，其中所述组合物包含所述抗体的大于约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约61％、约62％、约63％、约64％、约65％、约66％、约67％、约68％、约69％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％或约99％的主要物种。

66、在一些实施例中，所述组合物包含大于约64％的主要物种。

67、另一方面，本发明提供了一种组合物，其包含抗gm-csfrα抗体或其抗原结合部分，其中所述组合物包含约40-99％、约45-99％、约50-99％、约55-99％、约50-90％、约55-90％、约50-80％、约55-80％、约50-70％、约55-70％、约50-65％、约46-67％、约55-65％、约58-62％、约58-63％、约58-67％、约53-61％或约46-66％的主要物种。

68、在一些实施例中，所述组合物包含约46-67％的主要物种。

69、在一些实施例中，所述组合物包含约58-62％的主要物种。

70、在一些实施例中，所述组合物包含约11-38％的酸性物种以及小于约24％的碱性物种。在一些实施例中，所述组合物包含约11-38％的酸性物种以及大于约64％的主要物种。在一些实施例中，所述组合物包含约11-38％的酸性物种以及约58-62％的主要物种。在一些实施例中，所述组合物包含约9-41％的碱性物种以及约9-18％的酸性物种。在一些实施例中，所述组合物包含约9-41％的碱性物种和大于约64％的主要物种。在一些实施例中，所述组合物包含约16-41％的碱性物种以及约58-62％的主要物种。在一些实施例中，所述组合物包含约46-67％的主要物种以及约9-18％的酸性物种。在一些实施例中，所述组合物包含约46-67％的主要物种以及小于24％的碱性物种。

71、一方面，本发明提供了一种组合物，其包含抗gm-csfrα抗体或其抗原结合部分，其中所述组合物包含从阴离子交换色谱树脂或混合模式色谱树脂收集的洗脱液级分，并且其中所述洗脱液级分包含小于约40％、约35％、约30％、约25％、约24％、约23％、约22％、约21％、约20％、约19％、约18％、约17％、约16％、约15％、约10％或约5％的酸性物种。

72、另一方面，本发明提供了一种组合物，其包含抗gm-csfrα抗体或其抗原结合部分，其中所述组合物包含从阴离子交换色谱树脂或混合模式色谱树脂收集的洗脱液级分，并且其中所述洗脱液级分包含约1-40％、约1-35％、约1-30％、约1-28％、约1-25％、约2-20％、约3-15％、约5-25％、约5-28％、约5-30％、约10-28％、约10-30％、约10-40％、约9-18％、约11-22％、约11-38％、约12-20％、约12-38％、约15-30％、约14-28％或约18-40％的酸性物种。

73、在一些实施例中，所述洗脱液级分包含约11-38％的酸性物种。在一些实施例中，所述洗脱液级分从阴离子交换色谱树脂收集，并且包含约11-22％的酸性物种。在一些实施例中，所述洗脱液级分从混合模式色谱树脂收集，并且包含约12-38％的酸性物种。

74、一方面，本发明提供了一种组合物，其包含抗gm-csfrα抗体或其抗原结合部分，其中所述组合物包含从阴离子交换色谱树脂或混合模式色谱树脂收集的洗脱液级分，并且其中所述洗脱液级分包含小于约45％、约40％、约35％、约30％、约25％、约24％、约23％、约22％、约21％、约20％、约19％、约18％、约17％、约16％、约15％、约10％或约5％的碱性物种。

75、另一方面，本发明提供了一种组合物，其包含抗gm-csfrα抗体或其抗原结合部分，其中所述组合物包含从阴离子交换色谱树脂或混合模式色谱树脂收集的洗脱液级分，并且其中所述洗脱液级分包含约1-45％、约1-40％、约1-35％、约1-25％、约5-35％、约10-35％、约15-35％、约1-30％、约1-25％、约1-24％、约5-25％、约5-30％、约5-45％、约10-25％、约10-30％、约10-40％、约15-25％、约15-30％、约15-35％、约15-25％、约17-26％、约9-29％、约9-41％或约16-41％的碱性物种。

76、在一些实施例中，所述洗脱液级分包含约9-41％的碱性物种。

77、在一些实施例中，所述洗脱液级分从混合模式色谱树脂收集，并且包含约9-29％的碱性物种。在一些实施例中，所述洗脱液级分从阴离子交换色谱树脂收集，并且包含约16-41％的碱性物种。

78、一方面，本发明提供了一种组合物，其包含抗gm-csfrα抗体或其抗原结合部分，其中所述组合物包含从阴离子交换色谱树脂或混合模式色谱树脂收集的洗脱液级分，并且其中所述洗脱液级分包含大于约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约63％、约64％、约65％、约66％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％或约99％的主要物种。

79、另一方面，本发明提供了一种组合物，其包含抗gm-csfrα抗体或其抗原结合部分，其中所述组合物包含从阴离子交换色谱树脂或混合模式色谱树脂收集的洗脱液级分，并且其中所述洗脱液级分包含约40-99％、约45-99％、约50-99％、约55-99％、约50-90％、约55-90％、约50-80％、约55-80％、约50-70％、约55-70％、约50-65％、约55-65％、约58-62％、约58-63％、约58-67％、约46-67％、约53-61％或约46-66％的主要物种。

80、在一些实施例中，所述洗脱液级分从混合模式色谱树脂收集，并且包含约53-61％的主要物种。

81、在一些实施例中，所述洗脱液级分从阴离子交换色谱树脂收集，并且包含约46-66％的主要物种。

82、在前述方面中任一项的一些实施例中，所述抗gm-csfrα抗体或其抗原结合部分是玛弗利木单抗。

83、在一些实施例中，酸性物种的水平、主要物种的水平或碱性物种的水平是通过离子交换色谱确定的。

84、一方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含本文所述的组合物中的任一种以及药学上可接受的载体。

85、一方面，本发明提供了一种产生具有水平降低的高分子量聚集体和/或宿主细胞蛋白的包含所关注的蛋白质的制剂的方法，所述方法包含使包含所述所关注的蛋白质、高分子量聚集体和/或宿主细胞蛋白(hcp)的样品经受色谱树脂，其中所述色谱树脂选自由阳离子交换色谱树脂、阴离子交换色谱树脂和混合模式色谱树脂组成的组，由此产生具有水平降低的高分子量聚集体和/或宿主细胞蛋白的包含所述所关注的蛋白质的所述制剂。

86、另一方面，本发明提供了一种降低包含所关注的蛋白质的制剂中的高分子量聚集体和/或宿主细胞蛋白(hcp)的水平的方法，所述方法包含使包含所述所关注的蛋白质以及半抗体的样品经受色谱树脂，其中所述色谱树脂选自由阳离子交换色谱树脂、阴离子交换色谱树脂和混合模式色谱树脂组成的组，由此降低包含所述所关注的蛋白质的所述制剂中的高分子量聚集体和/或宿主细胞蛋白的水平。

87、在一些实施例中，所述所关注的蛋白质是抗体或其抗原结合部分。在一些实施例中，所述抗体或其抗原结合部分是抗gm-csfrα抗体或其抗原结合部分。在一些实施例中，所述抗gm-csfrα抗体或其抗原结合部分是玛弗利木单抗。

88、在一些实施例中，所述色谱树脂是阳离子交换色谱树脂。在一些实施例中，所述阳离子交换色谱树脂包含选自由以下组成的组的官能团：巯基、磺酸酯、硫酸酯、羧甲基、磺乙基、磺丙基、磷酸酯和磺酸酯。在一些实施例中，所述阳离子交换色谱树脂选自由以下组成的组：porostmxs cex、captotms impact、totopearltmgigagap cm 650m和toyopealtm硫酸酯650f。在一些实施例中，所述阳离子交换色谱树脂以结合洗脱模式运行。

89、在一些实施例中，所述色谱树脂是阴离子交换色谱树脂。在一些实施例中，所述阴离子交换色谱树脂包含选自由以下组成的组的官能团：二乙基氨基乙基、四氨基乙基和季铵。在一些实施例中，所述阴离子交换色谱树脂选自由porostmxq aex和captotmq impres组成的组。在一些实施例中，所述阴离子交换色谱树脂以结合洗脱模式运行。

90、在一些实施例中，所述色谱树脂是混合模式色谱树脂。在一些实施例中，所述混合模式色谱树脂包含选自由以下组成的组的官能团：羧基、羟基、n-苄基-n-甲基乙醇胺、苯基丙胺和己胺。在一些实施例中，所述混合模式色谱树脂选自由capttmmmc impres和captotmadhere impres组成的组。

91、在一些实施例中，所述制剂包含小于约10％、约9％、约8％、约7％、约6％、约5％、约4％、约3％、约1％、约0.9％、约0.8％、约0.7％、约0.6％、约0.5％、约0.4％、约0.3％、约0.2％或约0.1％的高分子量聚集体。在一些实施例中，所述制剂包含小于0.5％的高分子量聚集体。

92、在一些实施例中，所述制剂包含约0.01-10％、约0.01-5％、约0.01-1％、约0.04-0.2％、约0.1-0.4％、约0.04-0.4％、约0.04-0.8％、约0.5-0.8％、约1-10％、约2-10％、约3-10％或约4-10％的高分子量聚集体。在一些实施例中，所述制剂包含约0.04-0.8％的高分子量聚集体。

93、在一些实施例中，与所述样品中的高分子量聚集体的水平相比，所述制剂中的高分子量聚集体的水平降低了至少约90％、约80％、约70％、约60％、约50％、约40％、约30％、约20％或约10％。

94、在一些实施例中，所述制剂包含小于约10、约9、约8、约7、约6、约5、约4、约3、约2、约1、约0.9、约0.8、约0.7、约0.6或约0.5ppm的hcp。

95、在一些实施例中，所述制剂包含约0.1-10、约1-10、约2-10、约3-10、约4-10、约1-5、约5-10、约0.1-2、约0.1-3、约2-8或约0.1-8ppm的hcp。在一些实施例中，所述制剂包含约0.1-2ppm的hcp。

96、在一些实施例中，与所述样品中的hcp的水平相比，所述制剂中的hcp的水平降低了至少约90％、约80％、约70％、约60％、约50％、约40％、约30％、约20％或约10％。

97、在一些实施例中，所述制剂包含大于所关注的蛋白质的约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％、约99.1％或约99.5％的单体。

98、在一些实施例中，所述制剂包含所关注的蛋白质的大于约99.1％的单体。

99、在一些实施例中，所述制剂包含所关注的蛋白质的约90-99.9％、约90-95％、约95-99.9％、约99-99.9％、约99.1-99.9％、约98-99％、约98-99.9％或约98.5-99.5％的单体。

100、在一些实施例中，所述制剂包含所关注的蛋白质的约98-99％的单体。在一些实施例中，所述制剂包含所关注的蛋白质的约98-99.9％的单体。

101、在一些实施例中，所述制剂包含所关注的蛋白质的小于10％、约9％、约8％、约7％、约6％、约5％、约4％、约3％、约2％、约1％、约0.5％、约0.4％、约0.3％、约0.2％或约0.1％的片段。在一些实施例中，所述制剂包含所关注的蛋白质的小于约0.4％或小于0.3％的片段。

102、在一些实施例中，所述制剂包含所关注的蛋白质的约0.1-10％、约0.1-5％、约0.1-3％、约0.1-2％、约0.6-1.5％、约0.5-1.5％、约0.5-1.1％、约0.4-0.8％或约0.4-1.1％的片段。在一些实施例中，所述制剂包含所关注的蛋白质的约0.6-1.5％的片段。在一些实施例中，所述制剂包含所关注的蛋白质的约0.5-1.5％的片段。

103、在一些实施例中，所述方法进一步包含使用洗脱缓冲液收集洗脱液级分。

104、在一些实施例中，所述洗脱液级分包含小于约10％、约9％、约8％、约7％、约6％、约5％、约4％、约3％、约1％、约0.9％、约0.8％、约0.7％、约0.6％、约0.5％、约0.4％、约0.3％、约0.2％或约0.1％的高分子量聚集体。

105、在一些实施例中，所述洗脱液级分包含约0.01-10％、约0.01-5％、约0.01-1％、约0.04-0.8％、约0.04-0.2％、约0.1-0.4％、约0.04-0.4％、约0.5-0.8％、约0.1-6％、约1-10％、约2-10％、约3-10％或约4-10％的高分子量聚集体。在一些实施例中，所述洗脱液级分包含约0.04-0.4％的高分子量聚集体。

106、在一些实施例中，所述洗脱液级分从阳离子交换树脂收集，并且包含约0.01-10％、约0.01至5％、约0.01至1％、约0.04-0.2％、约0.04-0.8％、约0.1-0.4％、约0.04-0.4％、约0.5-0.7％、约0.1-6％、约1-10％、约2-10％、约3-10％或约4-10％的高分子量聚集体。

107、在一些实施例中，所述洗脱液级分从阳离子交换树脂收集，并且包含约0.1-0.4％的高分子量聚集体。

108、在一些实施例中，所述洗脱液级分从阴离子交换色谱树脂收集，并且包含约0.01-10％、约0.01-5％、约0.0-1％、约0.04-0.2％、约0.04-0.8％、约0.1-0.4％、约0.04-0.8％、约0.5-0.8％、约1-10％、约2-10％、约3-10％或约4-10％的高分子量聚集体。

109、在一些实施例中，所述洗脱液级分从阴离子交换树脂收集，并且包含约0.04-0.2％的高分子量聚集体。

110、在一些实施例中，与所述样品中的高分子量聚集体的水平相比，所述洗脱液级分中的高分子量聚集体的水平降低了至少约90％、约80％、约70％、约60％、约50％、约40％、约30％、约20％或约10％。

111、在一些实施例中，所述洗脱液级分包含小于约10、约9、约8、约7、约6、约5、约4、约3、约2、约1、约0.9、约0.8、约0.7、约0.6或约0.5ppm的hcp。

112、在一些实施例中，所述洗脱液级分包含约0.1-10、约1-10、约2-10、约3-10、约4-10、约1-5、约5-10、约0.1-2、约0.1-3、约2-8ppm或约0.1-8ppm的hcp。在一些实施例中，所述洗脱液级分包含约0.1-8ppm的hcp。

113、在一些实施例中，所述洗脱液级分从阴离子交换色谱树脂收集，并且包含约0.1-2ppm的hcp。

114、在一些实施例中，所述洗脱液级分从阳离子交换色谱树脂收集，并且包含约2-8ppm的hcp。

115、在一些实施例中，与所述样品中的hcp的水平相比，所述洗脱液级分中的hcp的水平降低了至少约90％、约80％、约70％、约60％、约50％、约40％、约30％、约20％或约10％。

116、在一些实施例中，所述洗脱液级分包含所关注的蛋白质的大于约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％、约99.1％或约99.5％的单体。

117、在一些实施例中，所述洗脱液级分包含所关注的蛋白质的约90-99.9％、约90-95％、约94-99.9％、约95-99.9％、约99-99.9％、约99.1-99.9％、约98-99％、约98-99.9％或约98.5-99.5％的单体。

118、在一些实施例中，所述洗脱液级分包含所关注的蛋白质的约98-99.9％的单体。在一些实施例中，所述洗脱液级分包含所关注的蛋白质的约98.5-99.5％的单体。

119、在一些实施例中，所述洗脱液级分包含所关注的蛋白质的小于约10％、约9％、约8％、约7％、约6％、约5％、约4％、约3％、约2％、约1％、约0.5％、约0.4％、约0.3％、约0.2％或约0.1％的片段。

120、在一些实施例中，所述洗脱液级分包含所关注的蛋白质的约0.1-10％、约0.1-5％、约0.1-3％、约0.1-2％、约0.1-1.1％、约0.1-0.8％、约0.5-1.5％、约0.6-1.5％、约0.5-1.1％、约0.4-0.8％或约0.4-1.1％的片段。

121、在一些实施例中，所述洗脱液级分包含所关注的蛋白质的约0.1-1.1％的片段。在一些实施例中，所述洗脱液级分包含所关注的蛋白质的约0.1-0.8％的片段。在一些实施例中，所述洗脱液级分包含所关注的蛋白质的约0.4-1.1％的片段。

122、在一些实施例中，所述洗脱液级分从阳离子交换色谱收集，并且包含所关注的蛋白质的约0.1-0.8％或约0.4-0.8％的片段。在一些实施例中，所述洗脱液级分从阴离子交换色谱树脂收集，并且包含所关注的蛋白质的约0.1-1.1％或约0.5-1.1％的片段。

123、在一些实施例中，高分子量聚集体的水平、所关注的蛋白质的片段的水平或所关注的蛋白质的单体的水平是通过尺寸排阻色谱确定的。

124、在一些实施例中，hcp的水平是通过elisa确定的。

125、一方面，本发明提供了一种组合物，其包含抗gm-csfrα抗体或其抗原结合部分，其中所述组合物包含小于约10％、约9％、约8％、约7％、约6％、约5％、约4％、约3％、约1％、约0.9％、约0.8％、约0.7％、约0.6％、约0.5％、约0.4％、约0.3％、约0.2％或约0.1％的高分子量聚集体。

126、在一些实施例中，所述组合物包含小于约0.5％的高分子量聚集体。

127、另一方面，本发明提供了一种组合物，其包含抗gm-csfrα抗体或其抗原结合部分，其中所述组合物包含约0.01-10％、约0.01-5％、约0.01-1％、约0.04-0.2％、约0.1-0.4％、约0.04-0.4％、约0.04-0.8％、约0.5-0.8％、约1-10％、约2-10％、约3-10％或约4-10％的高分子量聚集体。

128、在一些实施例中，所述组合物包含约0.04-0.8％的高分子量聚集体。

129、一方面，本发明提供了一种组合物，其包含抗gm-csfrα抗体或其抗原结合部分，其中所述组合物包含小于约10、约9、约8、约7、约6、约5、约4、约3、约2、约1、约0.9、约0.8、约0.7、约0.6或约0.5ppm的宿主细胞蛋白。

130、另一方面，本发明提供了一种组合物，其包含抗gm-csfrα抗体或其抗原结合部分，其中所述组合物包含约0.1-10、约1-10、约2-10、约3-10、约4-10、约1-5、约5-10、约0.1-2、约0.1-3、约2-8ppm或约0.1-8ppm的hcp。在一些实施例中，所述组合物包含约0.1-2ppm的hcp。

131、一方面，本发明提供了一种组合物，其包含抗gm-csfrα抗体，其中所述组合物包含大于约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％、约99.1％或约99.5％的抗体单体。

132、在一些实施例中，所述组合物包含大于99.1％的抗体单体。

133、另一方面，本发明提供了一种组合物，其包含抗gm-csfrα抗体，其中所述组合物包含约90-99.9％、约90-95％、约95-99.9％、约99-99.9％、约99.1-99.9％、约98-99％、约98-99.9％或约98.5-99.5％的抗体单体。

134、在一些实施例中，所述组合物包含约98-99％的抗体单体。在一些实施例中，所述组合物包含约98-99.9％的抗体单体。

135、一方面，本发明提供了一种组合物，其包含抗gm-csfrα抗体，其中所述组合物包含小于约10％、约9％、约8％、约7％、约6％、约5％、约4％、约3％、约2％、约1％、约0.5％、约0.4％、约0.3％、约0.2％或约0.1％的抗体片段。

136、在一些实施例中，所述组合物包含小于约0.4％的抗体片段。

137、另一方面，本发明提供了一种组合物，其包含抗gm-csfrα抗体，其中所述组合物包含约0.1-10％、约0.1-5％、约0.1-3％、约0.1-2％、约0.6-1.5％、约0.5-1.5％、约0.5-1.1％、约0.4-0.8％或约0.4-1.1％的抗体片段。

138、在一些实施例中，所述组合物包含约0.5-1.5％的抗体片段。在一些实施例中，所述组合物包含约0.6-1.5％的抗体片段。

139、一方面，本发明提供了一种组合物，其包含抗gm-csfrα抗体或其抗原结合部分，其中所述组合物包含从色谱树脂收集的洗脱液级分，其中所述色谱树脂选自由阳离子交换色谱树脂、阴离子交换色谱树脂和混合模式色谱树脂组成的组，并且其中所述洗脱液级分包含小于约10％、约9％、约8％、约7％、约6％、约5％、约4％、约3％、约1％、约0.9％、约0.8％、约0.7％、约0.6％、约0.5％、约0.4％、约0.3％、约0.2％或约0.1％的高分子量聚集体。

140、另一方面，本发明提供了一种组合物，其包含抗gm-csfrα抗体或其抗原结合部分，其中所述组合物包含从色谱树脂收集的洗脱液级分，其中所述色谱树脂选自由阳离子交换色谱树脂、阴离子交换色谱树脂和混合模式色谱树脂组成的组，并且其中所述洗脱液级分包含约0.1-10％、约0.01-5％、约0.01-1％、约0.04-0.8％、约0.04-0.2％、约0.1-0.4％、约0.5-0.8％、约0.04-0.4％、约0.1-6％、约1-10％、约2-10％、约3-10％或约4-10％的高分子量聚集体。

141、在一些实施例中，所述洗脱液级分包含约0.04-0.4％的高分子量聚集体。在一些实施例中，所述洗脱液级分从阴离子交换色谱树脂收集，并且包含约0.04-0.2％的高分子量聚集体。在一些实施例中，所述洗脱液级分从阳离子交换色谱树脂收集，并且包含约0.1-0.4％的高分子量聚集体。

142、一方面，本发明提供了一种组合物，其包含抗gm-csfrα抗体或其抗原结合部分，其中所述组合物包含从色谱树脂收集的洗脱液级分，其中所述色谱树脂选自由阳离子交换色谱树脂、阴离子交换色谱树脂和混合模式色谱树脂组成的组，并且其中所述洗脱液级分包含小于约10、约9、约8、约7、约6、约5、约4、约3、约2、约1、约0.9、约0.8、约0.7、约0.6或约0.5ppm的宿主细胞蛋白。

143、另一方面，本发明提供了一种组合物，其包含抗gm-csfrα抗体或其抗原结合部分，其中所述组合物包含从色谱树脂收集的洗脱液级分，其中所述色谱树脂选自由阳离子交换色谱树脂、阴离子交换色谱树脂和混合模式色谱树脂组成的组，并且其中所述洗脱液级分包含约0.1-10、约1-10、约2-10、约3-10、约4-10、约1-5、约5-10、约0.1-2、约0.1-3、约2-8ppm或约0.1-8ppm的hcp。

144、在一些实施例中，所述洗脱液级分包含约0.1-8ppm的hcp。

145、在一些实施例中，所述洗脱液级分从阴离子交换色谱树脂收集，并且包含约0.1-2ppm的hcp。在一些实施例中，所述洗脱液级分从阳离子交换色谱树脂收集，并且包含约2-8ppm的hcp。

146、一方面，本发明提供了一种组合物，其包含抗gm-csfrα抗体或其抗原结合部分，其中所述组合物包含从色谱树脂收集的洗脱液级分，其中所述色谱树脂选自由阳离子交换色谱树脂、阴离子交换色谱树脂和混合模式色谱树脂组成的组，并且其中所述洗脱液级分包含大于约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％、约99.1％或约99.5％的抗体单体。

147、另一方面，本发明提供了一种组合物，其包含抗gm-csfrα抗体或其抗原结合部分，其中所述组合物包含从色谱树脂收集的洗脱液级分，其中所述色谱树脂选自由阳离子交换色谱树脂、阴离子交换色谱树脂和混合模式色谱树脂组成的组，并且其中所述洗脱液级分包含约90-99.9％、约90-95％、约94-99.9％、约95-99.9％、约99-99.9％、约99.1-99.9％、约98-99％、约98-99.9％或约98.5-99.5％的抗体单体。

148、在一些实施例中，所述洗脱液级分包含约98-99.9％的抗体单体。在一些实施例中，所述洗脱液级分包含约98.5-99.5％的抗体。

149、一方面，本发明提供了一种组合物，其包含抗gm-csfrα抗体，其中所述组合物包含从色谱树脂收集的洗脱液级分，其中所述色谱树脂选自由阳离子交换色谱树脂、阴离子交换色谱树脂和混合模式色谱树脂组成的组，并且其中所述洗脱液级分包含小于约10％、约9％、约8％、约7％、约6％、约5％、约4％、约3％、约2％、约1％、约0.5％、约0.4％、约0.3％、约0.2％或约0.1％的抗体片段。

150、另一方面，本发明提供了一种组合物，其包含抗gm-csfrα抗体，其中所述组合物包含从色谱树脂收集的洗脱液级分，其中所述色谱树脂选自由阳离子交换色谱树脂、阴离子交换色谱树脂和混合模式色谱树脂组成的组，并且其中所述洗脱液级分包含约0.1-10％、约0.1-5％、约0.1-3％、约0.1-2％、约0.1-1.1％、约0.1-0.8％、约0.6-1.5％、约0.5-1.5％、约0.5-1.1％、约0.4-0.8％或约0.4-1.1％的抗体片段。

151、在一些实施例中，所述洗脱液级分包含约0.4-1.1％的抗体片段。

152、在一些实施例中，所述洗脱液级分从阴离子交换色谱树脂收集，并且包含约0.1-1.1％或约0.5-1.1％的抗体片段。

153、在一些实施例中，所述洗脱液级分从阳离子交换色谱树脂收集，并且包含约0.1-0.8％或约0.4-0.8％的抗体片段。

154、在一些实施例中，高分子量聚集体的水平、抗体单体的水平和/或抗体片段的水平是通过尺寸排阻色谱确定的。

155、在一些实施例中，hcp的水平是通过elisa确定的。

156、在一些实施例中，所述抗gm-csfrα抗体或其抗原结合部分是玛弗利木单抗。

157、一方面，本发明提供了一种用于由细胞培养物制备具有水平降低的酸性物种的包含所关注的蛋白质的制剂的方法，所述方法包含：在生物反应器中温育所述细胞培养物；将所述细胞培养物的ph维持在约6-7.5的ph下；由此制备具有水平降低的酸性物种的包含所关注的蛋白质的制剂。

158、另一方面，本发明提供了一种用于降低细胞培养物中的所关注的蛋白质的酸性物种的水平的方法，所述方法包含：在生物反应器中温育所述细胞培养物；将所述细胞培养物的ph维持在约6-7.5的ph下；由此降低所述所关注的蛋白质的酸性物种的水平。

159、一方面，本发明提供了一种用于增加来自细胞培养物的所关注的蛋白质的产生产率的方法，所述方法包含：在生物反应器中温育所述细胞培养物；将所述细胞培养物的ph维持在约6-7.5的ph下；由此增加所述所关注的蛋白质的所述产生产率。

160、在一些实施例中，所述所关注的蛋白质是抗体或其抗原结合部分。在一些实施例中，所述抗体或其抗原结合部分是抗gm-csfrα抗体或其抗原结合部分。在一些实施例中，所述抗gm-csfrα抗体或其抗原结合部分是玛弗利木单抗。

161、在一些实施例中，所述细胞培养物的ph维持在约6-7.5、约6.5-7.5、约6-7、约6.5-7或约6.7-7的ph下。在一些实施例中，所述细胞培养物的ph维持在约6.5-7的ph下。

162、在一些实施例中，在温育时段的第2天-第8天期间，所述细胞培养物的ph降低了约0.01-0.4、约0.02-0.4、约0.05-0.3、约0.1-0.4、约0.1-0.3、约0.1-0.2或约0.1-0.2，但维持在约6.5-7的ph下。

163、在一些实施例中，所述细胞培养物的ph通过一个或多个选自由以下组成的组的步骤维持：(a)增加所述细胞培养物中的co2的水平；(b)将所述细胞培养物中的乳酸盐的水平维持在约0.1-5g/l下；(c)增加所述细胞培养物中的乳酸盐产生；以及(d)在所述温育时段间增加细胞培养补充剂的水平。

164、在一些实施例中，所述细胞培养物中的co2的水平增加了至少约0.1％、约0.5％、约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约8％、约9％或约10％。在一些实施例中，所述细胞培养物中的co2的水平增加了约0.1-5％、约0.2-6％、约0.3-7％、约0.4-8％或约0.5-10％。

165、在一些实施例中，所述细胞培养物中的乳酸盐的水平维持在约0.1-5g/l、0.1-4g/l、0.1-3g/l、0.1-2g/l、0.2-2g/l、约0.3-2g/l、约0.4-2g/l、约0.5-2g/l、约0.6-2g/l、约0.7-2g/l、约0.8-2g/l、约0.9-2g/l、约0.1-1.9、约0.2-1.8、约0.3-1.7、约0.4-1.6、约0.5-1.5g/l、约0.6-1.4、约0.7-1.3、约0.8-1.2或约0.9-1.1下。

166、在一些实施例中，所述细胞培养补充剂包含一种或多种补充剂。

167、在一些实施例中，所述细胞培养补充剂的水平在温育时段间增加了约0.1％-20％、约0.1％-10％、约0.1％-5％、约0.5％-20％、约0.5％-10％或约1％-10％。

168、在一些实施例中，在温育时段的第2天-第8天期间，将在约0.1-3％的水平下的所述细胞培养补充剂添加到所述细胞培养物中，并且在温育时段的第4天-第10天期间，所述细胞培养补充剂的水平增加了初始水平的约50％或更多。

169、在一些实施例中，增加所述细胞培养补充剂使乳酸盐产生增加、渗透压增加、细胞活力增加和/或细胞培养物的ph降低。

170、在一些实施例中，将所述细胞培养物维持在约35-37℃的温度下。

171、一方面，本发明提供了一种用于由细胞培养物制备具有水平降低的酸性物种的包含所关注的蛋白质的制剂的方法，所述方法包含：在生物反应器中温育所述细胞培养物；以及一个或多个选自由以下组成的组的步骤：(a)将所述细胞培养物的ph维持在约6-7.5、约6-7或约6.5-7的ph下；(b)在所述温育时段期间增加细胞培养补充剂的水平；(c)将所述细胞培养物中的乳酸盐的水平维持在约0.1-5g/l下；(d)增加所述细胞培养物中的乳酸盐产生；(e)增加所述细胞培养物中的co2的水平；和/或(f)降低所述细胞培养物的ph，由此制备具有水平降低的酸性物种的包含所关注的蛋白质的制剂。

172、另一方面，本发明提供了一种用于降低细胞培养物中的所关注的蛋白质的酸性物种的水平的方法，所述方法包含：在生物反应器中温育所述细胞培养物；以及一个或多个选自由以下组成的组的步骤：(a)将所述细胞培养物的ph维持在约6-7.5、约6-7或约6.5-7的ph下；(b)在所述温育时段期间增加细胞培养补充剂的水平；(c)将所述细胞培养物中的乳酸盐的水平维持在约0.1-5g/l下；(d)增加所述细胞培养物中的乳酸盐产生；(e)增加所述细胞培养物中的co2的水平；和/或(f)降低所述细胞培养物的ph，由此降低所述所关注的蛋白质的酸性物种的水平。

173、另一方面，本发明提供了一种用于增加来自细胞培养物的所关注的蛋白质的产生产率的方法，所述方法包含：在生物反应器中温育所述细胞培养物；以及一个或多个选自由以下组成的组的步骤：(a)将所述细胞培养物的ph维持在约6-7.5、约6-7或约6.5-7的ph下；(b)在所述温育时段期间增加细胞培养补充剂的水平；(c)将所述细胞培养物中的乳酸盐的水平维持在约0.1-5g/l下；(d)增加所述细胞培养物中的乳酸盐产生；(e)增加所述细胞培养物中的co2的水平；和/或(f)降低所述细胞培养物的ph，由此增加所述所关注的蛋白质的所述产生产率。

174、在一些实施例中，所述所关注的蛋白质是抗体或其抗原结合部分。在一些实施例中，所述抗体或其抗原结合部分是抗gm-csfrα抗体或其抗原结合部分。在一些实施例中，所述抗gm-csfrα抗体或其抗原结合部分是玛弗利木单抗。