1.本发明创造属于菌类培养技术领域，尤其是涉及一种枯草芽孢杆菌高芽孢率的发酵方法。
背景技术：
2.枯草芽孢杆菌在水体中繁殖的过程中能够产生胞外酶，它能够将水体和底泥中的残余饵料、排泄废物和动植物残体等有机物分解，这些有机物首先分解为小分子，如高级脂肪酸和多肽等，然后分解为更小的分子有机物，如单糖、氨基酸、低级脂肪酸和环烃等，最终分解为二氧化碳、硝酸盐、硫酸盐等，实现降低水中的bod、cod，使水中的氮、氨、硫化物和亚硝酸氮的浓度降低，具有清除底泥和减轻水体富营养化的作用，此外芽孢杆菌分泌的多种抗生素和酶类都能抑制其它病原菌的生长。
3.枯草芽孢杆菌作为水产养殖用添加剂，一些研究证明其能够促进养殖品种加速生长，降低饲料系数，维持肠道微生态平衡，增强动物机体免疫力，提高抗病能力和减少污染等。
4.目前国内对枯草芽孢杆菌的研究主要集中在筛菌、抑菌效果以及枯草芽孢杆菌的产酶特性等，而对于枯草芽孢杆菌的高芽孢率发酵技术则报道较少。
技术实现要素：
5.有鉴于此，为解决上述问题，本发明创造提出了一种枯草芽孢杆菌高芽孢率的发酵方法，以枯草芽孢杆菌为菌种，经种子活化后接种到发酵培养基中培养，通过对培养基配方及培养条件的改进，枯草芽孢杆菌芽孢生成率显著提高。
6.为达到上述目的，本发明创造的技术方案是这样实现的：
7.一种枯草芽孢杆菌高芽孢率的发酵方法，其特征在于，包括如下步骤：
8.s1、以枯草芽孢杆菌为发酵菌种，接种于活化培养基中进行种子活化；所述活化培养基包括如下组分：蛋白胨8～12g/l、牛肉粉2～5g/l、氯化钠3～7g/l、葡萄糖8～12g/l；
9.s2、将活化后的菌种接种到发酵培养基中进行培养，得到高芽孢率的枯草芽孢杆菌；所述发酵培养基包括如下组分：葡萄糖3～7g/l、糖蜜8～12g/l、豆饼粉8～12g/l、酵母粉3～7g/l、mnso4 0.1～0.5g/l、kh2po4 0.1～0.4g/l、k2hpo4 0.1～0.5g/l、碳酸钙1～5g/l。
10.进一步的，所述s1中，活化培养基包括如下组分：蛋白胨10g/l、牛肉粉3g/l、氯化钠5g/l、葡萄糖10g/l。
11.进一步的，所述s1中，发酵培养基包括如下组分：葡萄糖5g/l、糖蜜10g/l、豆饼粉10g/l、酵母粉5g/l、mnso4 0.3g/l、kh2po
4 0.2g/l、k2hpo
4 0.3g/l、碳酸钙3g/l。
12.进一步的，所述s1中，种子活化的培养条件为：ph为7.0～7.2，温度为35～37℃，摇床培养20～26h。
13.优选的，种子活化的培养条件为：ph为7.0，温度为35℃，摇床培养24h。
14.进一步的，所述s2中，发酵培养的条件为：ph为7.2～7.4、温度为36～38℃、搅拌转速80～120r/min、培养时间45～50h。
15.优选的，发酵培养的条件为：ph为7.2、温度为37℃、搅拌转速100r/min、培养时间48h。
16.进一步的，所述s2中，发酵培养基中添加有作为芽孢载体的不溶物。
17.进一步的，所述s2中，发酵培养的接种量为6％v/v。
18.进一步的，所述s2中，每发酵10l体积的通氧量不小于1m3/h。
19.相对于现有技术，本发明创造所述的枯草芽孢杆菌高芽孢率的发酵方法具有以下优势：
20.(1)本发明创造所述的枯草芽孢杆菌高芽孢率的发酵方法通过对培养基配方及发酵条件的改进，为提高枯草芽孢杆菌的芽孢形成率、提高产品质量及稳定性提供了基础条件；
21.(2)本发明创造所述的枯草芽孢杆菌高芽孢率的发酵方法以枯草芽孢杆菌为菌种，经种子活化后接种到发酵培养基中培养，经过发酵周期后，枯草芽孢杆菌芽孢生成率显著提高，达到91.3％以上，比目前普遍收获期的80.7％芽孢率提高了13％。
具体实施方式
22.除有定义外，以下实施例中所用的技术术语具有与本发明创造所属领域技术人员普遍理解的相同含义。以下实施例中所用的试验试剂，如无特殊说明，均为常规生化试剂；所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
23.下面结合实施例来详细说明本发明创造。
24.实施例1
25.以枯草芽孢杆菌为发酵菌种，经种子活化后接种到发酵培养基中培养。
26.(1)活化培养
27.将枯草芽孢杆菌接种于活化培养基中进行种子活化；
28.其中，活化培养基的组分如下：蛋白胨10g/l、牛肉粉3g/l、氯化钠5g/l、葡萄糖10g/l；
29.活化培养的条件为：ph 7.0，温度35℃，摇床培养24h。
30.(2)发酵培养
31.将活化好的枯草芽孢杆菌接种到发酵培养基中培养，发酵体积为30l；
32.其中，发酵培养基的组分如下：葡萄糖5g/l、糖蜜10g/l、豆饼粉10g/l、酵母粉5g/l、mnso4 0.3g/l、kh2po
4 0.2g/l、k2hpo
4 0.3g/l、碳酸钙3g/l；
33.发酵培养的条件为：ph 7.2，温度37℃，转速100r/min，通氧量6m3/h，装液量30l，接种量6％(v/v)，培养时间48h。
34.培养结束时，测得的芽孢率为92.4％。
35.实施例2
36.以枯草芽孢杆菌为发酵菌种，经种子活化后接种到发酵培养基中培养。
37.(1)活化培养
38.将枯草芽孢杆菌接种于活化培养基中进行种子活化；
39.其中，活化培养基的组分如下：蛋白胨10g/l、牛肉粉3g/l、氯化钠5g/l、葡萄糖10g/l；
40.活化培养的条件为：ph 7.0，温度35℃，摇床培养24h。
41.(2)发酵培养
42.将活化好的枯草芽孢杆菌接种到发酵培养基中培养，发酵体积为300l；
43.其中，发酵培养基的组分如下：葡萄糖5g/l、糖蜜10g/l、豆饼粉10g/l、酵母粉5g/l、mnso4 0.3g/l、kh2po
4 0.2g/l、k2hpo
4 0.3g/l、碳酸钙3g/l；
44.发酵培养的条件为：ph 7.2，温度37℃，转速100r/min，通氧量30m3/h，装液量300l，接种量6％(v/v)，培养时间48h。
45.培养结束时，测得的芽孢率为91.6％。
46.实施例1和2中的芽孢杆菌芽孢率测定方法为：发酵结束后取1ml发酵液加入到9ml无菌生理盐水中，依次做10倍系列稀释，选取5个适当的稀释倍数，分别常温及80℃水浴处理10min，分别吸取0.1ml常温稀释液和水浴后稀释液注入到各自的平板计数培养基中，用涂布棒将稀释液混匀铺平，每个稀释度接三个平板，倒置，于37℃恒温培养箱中培养24h，选取菌落数在30～300之间的培养皿计菌落数；
47.其中，芽孢率＝水浴后的菌落数/常温菌落数。
48.以上所述仅为本发明创造的较佳实施例而已，并不用以限制本发明创造，凡在本发明创造的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明创造的保护范围之内。