一种贝莱斯芽孢杆菌及其在防治葡萄病害中的应用的制作方法

本发明属于微生物菌种领域，具体涉及一种贝莱斯芽孢杆菌及其在植物病害防治中的应用。

背景技术：

1、植物根际促生菌(pgpr)是一类能促进植物生长的细菌，可以在植物根部定植之后通过促进植物营养的吸收、诱导根表面激素的产生或者分泌抗菌物质等来抑制危害性病原菌的侵害，达到直接或者间接影响植物生长和发展的目的。pgpr的促生机理主要包括固氮、溶磷、解钾、分泌噬铁素、分泌植物激素及相关调控物质和释放挥发性物质等。根际促生菌增强植物抗病性研究一直是研究的热点话题。在芽孢杆菌属中已分离到可增强植物抗病性的促生菌株。研究表明，在干旱条件下接种胁迫耐受性pgpr菌株可诱导植物激素产生，促进侧根生长发育，增强植物对养分和水分的吸收利用率；接种能分泌iaa的根际促生细菌bacillus tequilensis u36可促进幼苗根毛形成和根的生长，进而增加对水和营养物的摄取，帮助植物应对水分短缺状况。葡萄白腐病也是葡萄的主要病害之一，在全国葡萄产区均有发生，并呈现加重趋势。其主要为害果穗，也可侵染枝蔓和叶片。葡萄白腐病是由白腐盾壳霉(coniella diplodiella)侵染伤口引起的，是引起果实腐烂的主要病害之一，在全国各葡萄园地发生较普遍，果实损失率在10-15％，在严重的年份里可损失60％以上，甚至失收，高温高湿季节，该病危害相当严重。葡萄白腐病的防治目前主要以化学防治为主。对于生防菌的研究较少。

2、虽然国内外学者对生防芽孢杆菌进行了大量研究，但是在葡萄病害中，尤其是葡萄白腐病的防治方面，生防芽孢杆菌的研究相对较少，筛选到具有高效拮抗活性的芽孢杆菌是研发生防制剂，实现生物防治的关键环节。

技术实现思路

1、本发明要解决的技术问题是：如何有效防治葡萄白腐病。

2、为解决上述技术问题，第一个方面，本发明提供贝莱斯芽孢杆菌，所述贝莱斯芽孢杆菌为贝莱斯芽孢杆菌(bacillus velezensis)，其菌株编号为gsbz09，在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为cgmcc no.23947。

3、为解决上述技术问题，第二个方面，本发明提供菌剂，所述菌剂含有上述的贝莱斯芽孢杆菌和/或，含有上述的贝莱斯芽孢杆菌的培养物。

4、所述菌剂可为产生生长素iaa的菌剂、降解磷的菌剂、植物生长促进剂、植物病原菌抑制剂和/或植物白腐病防治剂。

5、术语“培养物”是指经人工接种和培养后，长有微生物群体的液体或固体产物(培养容器内的所有物质)的统称。即通过将微生物进行生长和/或扩增而获得的产物，其可以是微生物的生物学纯培养物，也可以含有一定量的培养基、代谢物或培养过程中产生的其他成分。

6、本发明中，所述培养物是将所述贝莱斯芽孢杆菌(bacillus velezensis)gsbz09在微生物培养基中培养得到的物质(培养容器内的所有物质)。

7、为解决上述技术问题，第三个方面，本发明提供应用，所述应用可为如下a1)-a9)中的任一种：

8、a1)上述的贝莱斯芽孢杆菌在制备促进植物生长的产品中的应用；

9、a2)上述的贝莱斯芽孢杆菌或上述的菌剂在促进植物生长中的应用；

10、a3)上述的贝莱斯芽孢杆菌在制备植物病原菌抑制剂中的应用；

11、a4)上述的贝莱斯芽孢杆菌或上述的菌剂在抑制植物病原菌中的应用；

12、a5)上述的贝莱斯芽孢杆菌在制备预防和/或治疗植物白腐病的产品中的应用；

13、a6)上述的贝莱斯芽孢杆菌或上述的菌剂在预防和/或治疗植物白腐病中的应用；

14、a7)上述的贝莱斯芽孢杆菌或上述的菌剂在降解磷中的应用；

15、a8)上述的贝莱斯芽孢杆菌或上述的菌剂在制备吲哚乙酸(iaa)中的应用；

16、a9)上述的贝莱斯芽孢杆菌或上述的菌剂在制备噬铁素中的应用。

17、进一步地，上述的应用中，所述植物可为下述p1)-p4)中任一种：

18、p1)双子叶植物；

19、p2)葡萄科植物；

20、p3)葡萄属植物；

21、p4)葡萄。

22、进一步地，上述应用中，所述促进植物生长可为促进植物的营养生长。

23、具体可为促进植物地上部分的生长，促进植物鲜重增加和/或促进植物干重增加。

24、进一步地，上述的应用中，其特征在于：a3)或a4)所述病原菌可为真菌或细菌；

25、所述真菌可为葡萄白腐病菌—白腐垫壳孢(coniella diplodiella)、葡萄炭疽病菌—盘长孢(gloeosporium fructigrum)、尖孢镰刀菌(fusarium oxysporum)、葡萄枝枯病菌—葡萄盘多毛孢(pestalotia menezesiana)葡萄蔓枯病菌—葡萄生拟茎点霉(phomopsis viticola)、葡萄穗轴褐枯病菌—葡萄生链格孢霉(alternaria viticola)、葡萄溃疡病菌—葡萄座腔菌(botryosphaeria dothidea)、葡萄灰霉病菌—灰葡萄孢(botrytis cinerea)中至少一种；

26、和/或，所述细菌可为葡萄土壤杆菌(agrobacterium vitis)。

27、为解决上述技术问题，第四个方面，本发明提供促进植物生长的方法，所述方法包括在微生物培养基中培养上述的贝莱斯芽孢杆菌，收集培养物，用所述培养物处理植物。

28、为解决上述技术问题，第五个方面，本发明提供预防和/或治疗植物病害的方法，所述方法包括在微生物培养基中培养上述的贝莱斯芽孢杆菌，收集培养物，用所述培养物处理植物。

29、进一步地，上述的方法中，所述病原菌可为真菌或细菌；

30、所述真菌可为葡萄白腐病菌—白腐垫壳孢(coniella diplodiella)、葡萄炭疽病菌—盘长孢(gloeosporium fructigrum)、尖孢镰刀菌(fusarium oxysporum)、葡萄枝枯病菌—葡萄盘多毛孢(pestalotia menezesiana)葡萄蔓枯病菌—葡萄生拟茎点霉(phomopsis viticola)、葡萄穗轴褐枯病菌—葡萄生链格孢霉(alternaria viticola)、葡萄溃疡病菌—葡萄座腔菌(botryosphaeria dothidea)、葡萄灰霉病菌—灰葡萄孢(botrytis cinerea)中至少一种；

31、和/或，所述细菌可为葡萄土壤杆菌(agrobacterium vitis)。

32、更具体的，所述植物病害可为植物白腐病，所述病原菌可为葡萄白腐病菌—白腐垫壳孢(coniella diplodiella)。

33、进一步地，上述的方法中，所述微生物培养基可由以下原料配制：淀粉2％，牛肉膏1％，酵母膏0.5％，nacl 0.5％，znso4 0.1％，所述百分比为质量占比，其余为水。

34、为解决上述技术问题，第七个方面，本发明提供述贝莱斯芽孢杆菌的培养方法，所述培养方法可包括使用微生物培养基培养所述贝莱斯芽孢杆菌的步骤，所述微生物培养基的配方为：淀粉2％，牛肉膏1％，酵母膏0.5％，nacl 0.5％，znso4 0.1％，所述百分比为质量占比，其余为水。

35、本发明中，所述微生物培养基可为固体培养基或液体培养基。

36、本发明中所述固体培养基可由液体培养基中添加15g/l的琼脂粉制备得到。

37、本发明中，所述用培养物处理植物具体可为用贝莱斯芽孢杆菌的发酵液或发酵上清液对植物灌根处理，或用贝莱斯芽孢杆菌的发酵液或发酵上清液接触植物表面。

38、本发明中，所述用培养物处理病原菌具体可为在病原菌接触植物前用贝莱斯芽孢杆菌的发酵液或发酵上清液喷洒植物，或，在病原菌接触植物前/后用贝莱斯芽孢杆菌的发酵液或发酵上清液接触植物表面。

39、本研究从葡萄种植园根际土壤中分离筛选到一株对葡萄白腐病菌有较好防效的芽孢杆菌gsbz09，该菌株抑菌谱广，对葡萄种植中常见的病原菌尤其对葡萄白腐病菌和葡萄土壤杆菌均具有良好的抑菌活性。本研究通过对葡萄根际土壤微生物的定向筛选，预获得高效拮抗葡萄白腐病菌的芽孢杆菌，为葡萄白腐病的生物防治提供基础材料。

40、保藏说明

41、菌种名称：贝莱斯芽孢杆菌

42、拉丁名：bacillus velezensis

43、菌株编号：gsbz09

44、保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心

45、保藏机构简称：cgmcc

46、地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编100101

47、保藏日期：2021年11月22日

48、保藏中心登记入册编号：cgmcc no.23947