生物物证采集与保存试剂的制作方法

1.本发明涉及法医物证dna提取技术领域，具体地说是一种生物物证采集与保存试剂。


背景技术：

2.法医dna技术在众多刑事案件的侦破、民事案件的解决、重大事故尸源的认定、被拐卖妇女儿童等人员的亲子鉴定上发挥了重要作用。随着法制建设的不断完善和dna技术的不断发展，要求进行dna检验的案件及物证也越来越多，法医dna分析已然成为生物物证检验的常规技术。
3.dna是存在于生物体内的大分子，在离体的环境下，很容易被损坏、发生断裂，变成小分子，即dna降解。成功的dna分析始于生物物证检材的正确提取、保存与送检。来源于案件现场的法医生物检材承载着为侦查提供线索、为法庭提供证据的重要作用，检材的提取是否规范，保存是否妥当，送检是否及时都将直接影响到最终的鉴定结果。常规的生物检材有血液(斑)、唾液(斑)、精液(斑)、毛发、骨骼、脱落细胞等等，在这些生物检材中，脱落细胞类检材dna含量低，加之在高温、潮湿的环境中dna降解严重，影响dna提取的质量和产量，易导致dna分析失败。
4.《法医生物检材的提取、保存与送检规范(ga/t1162-2014)》为法医物证检验的检材提取、保存和送检制定了统一的规范要求，同时也为物证检验的成功提供了保障。对于采用擦拭方法提取的斑迹类检材，常采用干湿两步法提取，即先用湿润棉签擦拭检材客体表面，再用干燥棉签拭干转移。最常用的湿润棉签的试剂是去离子水，但有研究表明，去离子水擦拭提取的生物检材容易受微生物的作用而腐败，导致其中微量的dna降解。目前，市面上已有专家学者在去离子水中加入抗生素用作脱落细胞采集试剂，这种方式能够有效抑制微生物对dna破坏作用，但也有局限性，如不能很好的将脱落细胞与检材剥离等等。
5.因此，亟需开发一种生物物证采集与保存试剂，该试剂能够有效采集微量生物物证dna，并提供避免dna降解的微环境。


技术实现要素：

6.针对上述存在的问题，本发明的目的在于提供了一种生物物证采集与保存试剂。本发明试剂能有效采集微量生物物证dna，并提供避免dna降解的微环境。本发明试剂可以取代传统去离子水，用于干湿两步法擦拭提取斑痕类生物检材，实现dna提取现场化，在法医领域具有广阔的发展前景。
7.本发明为实现上述目的，采取以下技术方案予以实现：
8.一种生物物证采集与保存试剂，所述试剂包括十二烷基磺酸钠(sds)、乙二胺四乙酸(edta)、三羟甲基氨基甲烷(tris)和尿酸(uric acid)；所述试剂中：所述十二烷基磺酸钠(sds)的质量浓度为10％，所述乙二胺四乙酸(edta)的摩尔浓度为0.5mol/l，所述三羟甲基氨基甲烷(tris)的摩尔浓度为1mol/l，所述尿酸(uric acid)的摩尔浓度为2mol/l。
9.优选地，所述试剂的ph值调至8.0。
10.优选地，所述试剂用于微量生物物证采集与保存前须经分装、密封、灭菌和无核酸处理，具体如下：将ph值调至8.0的试剂分装到无核酸试剂瓶中，密封，经高压蒸汽灭菌处理后，取适量试剂经磁珠法提取dna，并采用试剂盒扩增，电泳检测str分型，未检出则为合格。
11.优选地，所述高压蒸汽灭菌处理具体如下：温度121.3℃，压力103.4kpa，时间20min。
12.优选地，所述适量试剂为100μl。
13.本发明试剂为(sds-edta-tris-尿酸)四联试剂，其中，十二烷基磺酸钠(sds)属阴离子表面活性剂，具有优异的渗透、洗涤、润湿、去污和乳化作用，易溶于水、乙醇，特殊的化学结构能够与细胞膜磷脂双分子层相似相溶，因而能够破坏细胞膜，将其中的dna释放。乙二胺四乙酸(edta)，是一种有机化合物，能与mg
2+
、ca
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、mn
2+
、fe
2+
等二价金属离子结合，常用作金属离子螯合剂，由于绝大多数核酸酶的活性中心需要mg
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，用于核酸酶抑制剂，可以抑制核酸酶对dna的破坏。三羟甲基氨基甲烷(tris)，是一种有机化合物，广泛应用于生物化学和分子生物学实验中缓冲液的制备，用于核酸的溶解。尿酸(uric acid)，是嘌呤代谢的终产物，为三氧基嘌呤，微溶于水，其化学性质稳定，易形成晶体，包裹dna免受微生物侵染。
14.与现有技术相比，本发明的有益效果如下：
15.本发明试剂联合四种成分(sds-edta-tris-尿酸)，互相配合、协作，使得试剂能够有利于微量细胞从生物物证上剥离，能够有效抑制核酸酶对dna的破坏，能够提供避免dna降解的微环境。
16.本发明试剂在室温下(25℃)保质期达1年以上，无外源dna污染，无毒害作用，不影响实验室后续dna检测。
17.采用指纹印痕模拟犯罪现场脱落细胞，本发明试剂与去离子水进行对比实验，本发明试剂检出率高；10μl经100倍稀释血液细胞采集后干燥，室温保存1年，本发明试剂检出率高。
18.本发明试剂中各个化学组分可全部国产化，且价格便宜，无毒无害，环境友好，广泛推广能够大大提高生物检材检出率，具有良好的社会、经济效益。
附图说明
19.图1是实施例4中用实施例2处理后合格的试剂采集模拟检材得到的dna分型图谱；
20.图2是实施例4中用去离子水采集模拟检材得到的dna分型图谱。
具体实施方式
21.为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明。
22.实施例1
23.一种生物物证采集与保存试剂的配置，该试剂包括十二烷基磺酸钠(sds)、乙二胺四乙酸(edta)、三羟甲基氨基甲烷(tris)和尿酸(uric acid)。该试剂中：十二烷基磺酸钠(sds)的质量浓度为10％，乙二胺四乙酸(edta)的摩尔浓度为0.5mol/l，三羟甲基氨基甲烷(tris)的摩尔浓度为1mol/l，尿酸(uric acid)的摩尔浓度为2mol/l。
24.本发明试剂为(sds-edta-tris-尿酸)四联试剂，其中，十二烷基磺酸钠(sds)属阴离子表面活性剂，具有优异的渗透、洗涤、润湿、去污和乳化作用，易溶于水、乙醇，特殊的化学结构能够与细胞膜磷脂双分子层相似相溶，因而能够破坏细胞膜，将其中的dna释放。乙二胺四乙酸(edta)，是一种有机化合物，能与mg
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、ca
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、mn
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、fe
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等二价金属离子结合，常用作金属离子螯合剂，由于绝大多数核酸酶的活性中心需要mg
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，用于核酸酶抑制剂，可以抑制核酸酶对dna的破坏。三羟甲基氨基甲烷(tris)，是一种有机化合物，广泛应用于生物化学和分子生物学实验中缓冲液的制备，用于核酸的溶解。尿酸(uric acid)，是嘌呤代谢的终产物，为三氧基嘌呤，微溶于水，其化学性质稳定，易形成晶体，包裹dna免受微生物侵染。
25.实施例2
26.一种生物物证采集与保存试剂(如实施例1所述)的分装、密封、灭菌和无核酸处理，具体如下：将ph值调至8.0的试剂分装到无核酸试剂瓶中，密封，经高压蒸汽灭菌处理(温度121.3℃，压力103.4kpa，时间20min)后，取100μl试剂经磁珠法提取dna，并采用试剂盒扩增，电泳检测str分型，未检出则为合格。
27.实施例3
28.采用指纹印痕模拟犯罪现场脱落细胞，将实施例2处理后合格的试剂与去离子水进行对比实验。分别采集90枚指纹脱落细胞后，经磁珠法提取dna，并采用试剂盒扩增，电泳检测str分型，本实验采用大于100个荧光单位进行判读，低于此标准不进行统计，计算两组实验dna位点检出率：
29.实施例2处理后合格的试剂采集90枚指纹，dna位点检出率为：76.9％。
30.去离子水采集90枚指纹，dna位点检出率为：42.9％。
31.实施例4
32.采用稀释血模拟犯罪现场微量生物检材，将实施例2处理后合格的试剂与去离子水进行对比实验，分别采集90份模拟检材后，室温(25
±
2℃)下放置1年，经磁珠法提取dna，并采用试剂盒扩增，电泳检测str分型，本实验采用大于100个荧光单位进行判读，低于此标准不进行统计，计算两组实验dna位点检出率：
33.实施例2处理后合格的试剂采集90份模拟检材，dna位点检出率为：100％，且所有样本分型杂合子均衡度好；图1是用实施例2处理后合格的试剂采集模拟检材得到的dna分型图谱。
34.去离子水采集90枚模拟检材，dna位点检出率为95.2％，且所有样本分型均呈现长片段降解趋势，图2是用去离子水采集模拟检材得到的dna分型图谱。
35.实施例5
36.将实施例2处理后合格的试剂置于室温下(25℃)保存，考察保存时间的影响：
37.[0038][0039]
由上表可知：本发明试剂在室温下(25℃)保质期达1年以上，无外源dna污染，无毒害作用，不影响实验室dna检验，符合法医物证检验标准要求，技术水平可达到国际先进水平。
[0040]
以上对本发明实施例所提供的技术方案进行了详细介绍，本文中应用了具体个例对本发明实施例的原理以及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只适用于帮助理解本发明实施例的原理；同时，对于本领域的一般技术人员，依据本发明实施例，在具体实施方式以及应用范围上均会有改变之处，综上所述，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。