特比奈芬在提高圆红冬孢酵母角鲨烯产量中的应用的制作方法

本发明属于生物，具体涉及特比奈芬在提高圆红冬孢酵母角鲨烯产量中的应用。

背景技术：

1、角鲨烯是人体胆固醇代谢途径中一个关键的中间产物，广泛存在于动、植物或微生物体内。在动物体内，尤以深海鲨鱼肝脏中的角鲨烯含量最为丰富；在植物中角鲨烯的分布也很广，如橄榄油、南瓜籽等均含有丰富的角鲨烯。角鲨烯具有强携氧能力、抗氧化、抗辐射、解毒作用、抑制微生物的生长、调控动物体中胆固醇的代谢以及防癌和抗癌作用等重要生理活性，在食品、医药、化妆品等领域具有广泛应用，具体如下：(1)角鲨烯抗氧化、抵御紫外线伤害，可用作化妆品；(2)角鲨烯可作为药物缓释剂，增强药物的治疗效果；(3)角鲨烯可摄取大量的氧，加强细胞新陈代谢消除疲劳，已成为功能明确的活性成分，在功能性食品中应用广泛；(4)角鲨烯是一种良好的自由基清除剂，因其具有抗氧化、降血糖、降血脂等生物活性，可用于保健品的生产加工，如角鲨烯软胶囊等；(5)角鲨烯常被添加于大豆油、花生油等食用植物油中，抑制或延缓油脂的氧化，从而提高食用植物油的稳定性，延长产品的货架期。由此可见，角鲨烯具有很高的经济效益。但由于角鲨烯在动物、植物及微生物中的含量并不高，目前角鲨烯仍处于供不应求的状态。

2、目前，角鲨烯的生产方法主要有植物萃取、化学合成以及生物合成等，植物萃取受限于植物周期且产量低；化学合成要求条件苛刻、生产过程安全性低，最主要的问题是工业合成的成本高昂；而生物合成的方法则采用廉价的培养基及易编辑、生长周期短的微生物，相对于化学合成苛刻的反应条件与高昂的成本，更为廉价、高效。

3、圆红冬孢酵母作为一种产油微生物，可天然累积类胡萝卜素，其具有生长周期短、利用碳源广泛、油脂积累量多等优点，且其对纤维素水解液中的诸如乙酸等毒性物质具有天然抗性，被认为是一株具有广泛工业应用前景的菌株。然而，受限于遗传操作的便利性和可操控性，使得对圆红冬孢酵母遗传改造研究进展缓慢、效率较低。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供特比奈芬的新用途。

2、为了实现上述目的，本发明首先提供了特比奈芬在如下1)-6)任一种中的应用：

3、1)使圆红冬孢酵母产角鲨烯；

4、2)提高圆红冬孢酵母角鲨烯产量；

5、3)生产角鲨烯；

6、4)制备使圆红冬孢酵母产角鲨烯的产品；

7、5)制备提高圆红冬孢酵母角鲨烯产量的产品；

8、6)制备生产角鲨烯的产品。

9、上述应用中，所述生产角鲨烯为利用圆红冬孢酵母生产角鲨烯。

10、为了实现上述目的，本发明又提供了一种使圆红冬孢酵母产角鲨烯或生产角鲨烯的方法。

11、本发明提供的使圆红冬孢酵母产角鲨烯或生产角鲨烯的方法包括在圆红冬孢酵母菌液中加入特比奈芬的步骤。

12、上述方法中，所述特比奈芬在圆红冬孢酵母菌液中的浓度可为15-40mg/l。

13、进一步的，所述特比奈芬在圆红冬孢酵母菌液中的浓度可为15-30mg/l或30-40mg/l。更进一步的，所述特比奈芬在圆红冬孢酵母菌液中的浓度为15mg/l或30mg/l，优选30mg/l。

14、上述方法可包括如下步骤：在圆红冬孢酵母菌液中加入特比奈芬，得到含有特比奈芬的圆红冬孢酵母菌液；将所述含有特比奈芬的圆红冬孢酵母菌液进行发酵培养，得到发酵液；所述发酵液中含有角鲨烯。

15、进一步的，所述发酵培养的条件可为28-30℃，200-250rpm培养48-72h。更进一步的，所述发酵培养的条件为30℃，250rpm培养48h。

16、所述圆红冬孢酵母菌液的制备方法可包括如下步骤：将活化后的圆红冬孢酵母接种至ypd液体培养基中，培养，得到种子液；再将所述种子液转接到ypd液体培养基中，得到所述圆红冬孢酵母菌液。其中，所述活化后的圆红冬孢酵母可为将保存的圆红冬孢酵母在ypd固体培养基上划线，然后在30℃培养箱中放置两天后得到的。所述种子液od600nm可为3。所述种子液与所述ypd液体培养基的体积可为10μl：1ml。

17、所述ypd液体培养基由溶剂和溶质组成，溶剂为水，溶质及其浓度分别如下：酵母提取物10g/l、蛋白胨20g/l、葡萄糖20g/l。

18、所述ypd固体培养基由溶剂和溶质组成，溶剂为水，溶质及其浓度分别如下：酵母提取物10g/l、蛋白胨20g/l、琼脂粉10g/l、葡萄糖20g/l。

19、按照上述方法制备得到的角鲨烯也属于本发明的保护范围。

20、上述方法在提高圆红冬孢酵母角鲨烯产量中的应用也属于本发明的保护范围。

21、上述任一所述应用或方法中，所述圆红冬孢酵母可为现有技术中任一种圆红冬孢酵母。

22、在本发明的具体实施例中，所述圆红冬孢酵母为圆红冬孢酵母ncyc 1585、圆红冬孢酵母δku70或圆红冬孢酵母np11-spcas9。

23、本发明首次发现特比奈芬可使圆红冬孢酵母产角鲨烯，且证实特比奈芬可使不同的圆红冬孢酵母均产生角鲨烯，可有效提高不同圆红冬孢酵母的角鲨烯产量，角鲨烯产量最高可达863.06mg/l。本发明为角鲨烯的生物合成提供了一种新方法，该方法可用于角鲨烯的生产与制备，具有良好的应用前景。

技术特征：

1.特比奈芬在如下1)-6)任一种中的应用：

2.一种使圆红冬孢酵母产角鲨烯或生产角鲨烯的方法，包括在圆红冬孢酵母菌液中加入特比奈芬的步骤。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述特比奈芬在圆红冬孢酵母菌液中的浓度为15-40mg/l。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述特比奈芬在圆红冬孢酵母菌液中的浓度为30mg/l。

5.根据权利要求2-4任一所述的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：在圆红冬孢酵母菌液中加入特比奈芬，得到含有特比奈芬的圆红冬孢酵母菌液；将所述含有特比奈芬的圆红冬孢酵母菌液进行发酵培养，得到发酵液；所述发酵液中含有角鲨烯。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述发酵培养的条件为28-30℃，200-250rpm培养48-72h。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述发酵培养的条件为30℃，250rpm培养48h。

8.按照权利要求2-7任一所述方法制备得到的角鲨烯。

9.权利要求2-7任一所述方法在提高圆红冬孢酵母角鲨烯产量中的应用。

10.根据权利要求1所述的应用或权利要求2-7所述的方法或权利要求9所述的应用，其特征在于：所述圆红冬孢酵母为圆红冬孢酵母ncyc 1585、圆红冬孢酵母δku70或圆红冬孢酵母np11-spcas9。

技术总结
本发明公开了特比奈芬在提高圆红冬孢酵母角鲨烯产量中的应用。本发明还公开了特比奈芬在使圆红冬孢酵母产角鲨烯或生产角鲨烯中的应用。所述使圆红冬孢酵母产角鲨烯或生产角鲨烯的方法包括在圆红冬孢酵母菌液中加入特比奈芬的步骤，所述特比奈芬在圆红冬孢酵母菌液中的浓度优选30mg/L。本发明首次发现特比奈芬可使圆红冬孢酵母产角鲨烯，且证实特比奈芬可使不同的圆红冬孢酵母均产生角鲨烯，可有效提高不同圆红冬孢酵母的角鲨烯产量，角鲨烯产量最高可达863.06mg/L。本发明为角鲨烯的生物合成提供了一种新方法，该方法可用于角鲨烯的生产与制备，具有良好的应用前景。

技术研发人员：郭霄,庄满生
受保护的技术使用者：合曜生物科技（南京）有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15