一种复发性流产生物标志物及其应用

本发明涉及一种复发性流产生物标志物及其应用，具体为生物标志物nsd2在诊断与治疗复发性流产中的应用，属于分子诊断与治疗。

背景技术：

1、生殖障碍目前仍是人类所面临的重大健康问题之一，全世界每年仍有超过200万的胚胎停育发生，这其中很多是由于免疫稳态失衡导致的。胚胎因其携带了一半父本基因和基因表达产物而具有“非我”特性，因此需要在母胎界面维持独特的免疫耐受微环境才能使来自胎儿的滋养层与母体的子宫蜕膜完美融合以保证胚胎发育。子宫蜕膜中含有大量固有及适应性免疫细胞，包括约占70％的自然杀伤细胞(nk细胞)、约占20％的单核-巨噬细胞、约占1.7％的树突状细胞(dc细胞)和3-10％的t淋巴细胞以及一些其他含量较低的免疫细胞如b淋巴细胞和肥大细胞。这些细胞对于母胎界面免疫耐受的维持有重要作用。如nk细胞可以通过作用于cd14+的单核巨噬细胞诱导具有免疫抑制作用的调节性t细胞(treg)的产生，同时nk细胞也可以通过产生分泌ifnγ抑制th17细胞在母胎界面的分化，而th17的产生不利于母胎耐受。具有m2表型的巨噬细胞可以分泌炎症抑制因子并促进入侵滋养层细胞修复；巨噬细胞还可通过其吞噬功能清除胚胎释放出来的父本抗原以预防抗胎儿免疫应答的产生。在t细胞方面，除了cd4+的treg细胞之外，cd8+的抑制性t细胞可能也有重要作用，比如可以通过抑制b细胞产生抗体来维持母胎耐受。通过解析母胎界面免疫微环境的调控机理，可以为临床上妊娠障碍性疾病的诊断提供依据，并为妊娠障碍性疾病的治疗提供新的靶点和思路。

2、复发性流产(recurrent spontaneous abortion，rsa)是妇产科常见的病理妊娠之一,严重威胁着人类的生殖健康。其病因主要包括染色体异常、母体生殖道异常、母体内分泌异常、免疫功能异常、生殖道感染、宫颈机能不全及血栓形成倾向等，但是有50％复发性流产患者，使用目前临床的诊断方法尚不能发现导致流产反复发生的病因，且疗效不理想，称为不明原因反复自然流产(unexplainedrecurrent spontaneous abortion)，是临床上疑难性的不育症。因此，探讨其可能的致病因素能为反复自然流产的临床诊断和治疗提供一些新思路和新方法。

3、调节性t细胞(regulatory t cells，treg)是cd4+t细胞的特殊亚群，它以持续地表达转录因子foxp3为标志，treg细胞可以维持机体的自身免疫耐受，同时还可以通过抑制过度免疫来维持机体的稳态平衡。母胎微环境中的treg根据来源可以分为胸腺来源(ttreg)和外周初始t细胞诱导分化来的treg(ptreg)，小鼠怀孕早期母胎界面大部分是ttreg，外周血中的treg可以通过趋化因子cxcl12、ccl9及其受体cxcr4、ccr5和ccr7选择性募集到母胎界面，促进胚胎着床、维持母胎耐受。sasaki y等发现自发流产患者蜕膜组织中，treg细胞明显减少。arruvito l等研究发现在自发患者体内的treg不仅细胞数目下调，treg的抑制功能也明显减弱。alexander y.rudensky等通过cns1敲除小鼠模型研究发现ptreg的减少可以破坏子宫螺旋动脉的重塑和胎盘的发育。alison s.care通过dtr小鼠研究发现，怀孕早期treg的缺失会影响母体血管功能异常，从而影响胎盘和胚胎的正常发育。近期研究报道母胎界面的treg细胞共有三个类群：cd25hifoxp3+、pd1hiil-10+和tigit+foxp3dim，这三种不同的亚群均能抑制cd4+效应性t细胞的增值，同时cd25hifoxp3+、pd1hiil-10+亚群还可以调控效应t细胞细胞因子的产生。尽管treg细胞对于母胎界面特殊微环境的维持及妊娠的成功、胎儿的正常生产具有非常重要的作用，但是关于母胎耐受过程中treg细胞的调控机理仍然很不清楚。

技术实现思路

1、本发明的主要目的是：克服现有技术存在的问题，提出一种生物标志物nsd2的复发性流产相关应用，能够通过生物标志物nsd2实现对复发性流产的诊断或治疗。

2、本发明解决其技术问题的技术方案如下：

3、一种生物标志物的用途，其特征是，所述生物标志物为nsd2基因和/或nsd2蛋白；所述nsd2基因的genebank序列号为nc_000004.12(1871393..1982207)homo sapienschromosome 4,grch38.p13 primary assembly,序列信息详见https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/nc_000004.12？report＝genbank&from＝1871393&to＝1982192；所述nsd2蛋白由nsd2基因编码获得；所述用途为用于制备复发性流产的诊断工具，或用于制备治疗或预防复发性流产的药物。

4、本发明还提出：

5、一种针对复发性流产的诊断工具，其特征是，包括nsd2检测试剂，所述nsd2检测试剂针对的目标生物标志物为nsd2基因和/或nsd2蛋白；所述nsd2基因的genebank序列号为nc_000004.12(1871393..1982207)homo sapiens chromosome 4,grch38.p13 primaryassembly；所述nsd2蛋白由nsd2基因编码获得。

6、优选地，所述诊断工具的类型包括试剂盒、芯片、试纸、高通量测序平台。

7、优选地，所述nsd2检测试剂包括nsd2基因表达量检测试剂；

8、当针对nsd2基因时，所述nsd2基因表达量检测试剂包括nsd2基因mrna定量检测试剂；

9、当针对nsd2蛋白时，所述nsd2基因表达量检测试剂包括nsd2蛋白定量检测试剂。

10、更优选地，所述nsd2基因mrna定量检测试剂至少包括nsd2基因或转录本的特异性引物、nsd2基因或转录本的特异性识别探针之一；或者，所述nsd2蛋白定量检测试剂包括特异性结合nsd2蛋白的抗体或抗体片段。

11、更优选地，所述nsd2基因或转录本的特异性引物包括特异扩增nsd2基因的实时定量pcr引物；或者，所述特异性结合nsd2蛋白的抗体或抗体片段为单克隆或多克隆，所述抗体或抗体片段的具体形式包括f(ab′)2、fab′、fab、scfv、dsfv或其聚合物、二聚化v区、或含有cdr的肽；或者，所述nsd2蛋白定量检测试剂还包括编码特异性结合nsd2蛋白的抗体或抗体片段核酸，或含有该核酸的载体，或含有该载体的细胞。

12、nsd2基因或其表达产物作为生物标志物在制备治疗或预防复发性流产的药物中的应用。

13、提高nsd2基因表达量的物质或nsd2蛋白在制备治疗或预防复发性流产的药物中的应用。

14、作为本发明的一种优选，所述的提高nsd2基因表达量的物质选自nsd2基因的过表达载体。

15、nsd2基因或蛋白作为靶点在筛选治疗或预防复发性流产的药物中的应用。

16、本发明的有益效果如下：

17、本发明首次发现并证实treg细胞中nsd2基因表达与复发性流产的密切相关性，treg细胞中nsd2通过调控cxcr4基因的表达转录，影响怀孕期间treg细胞向蜕膜组织的迁移，从而影响胚胎的正常发育，并通过基因敲除小鼠进行疾病模型佐证，结果具有可靠性、可重复性。根据上述发现，本发明确定生物标志物nsd2基因和/或nsd2蛋白可通用于诊断复发性流产，不仅以区分正常妊娠和复发性流产患者，还可以对复发性流产患者的疾病活动性进行区分，鉴定患者的疾病预后，本发明据此开发出针对复发性流产的诊断工具，并开发出治疗或预防复发性流产的药物。