抗CD40抗体及其用途的制作方法

本发明涉及一种识别cd40蛋白的抗体及其应用。

背景技术：

1、癌症免疫治疗已成为第三代癌症治疗中最活跃的研究领域。过去几十年的许多临床研究表明，靶向肿瘤微环境(tme)并刺激抗肿瘤免疫反应可产生强健而持久的抗肿瘤作用。这导致了以pd-1等一系列靶点的免疫检查点抑制(ici)疗法的应用。ici治疗的主要目的是维持先前建立的抗肿瘤活性，相比之下，刺激性免疫靶点如cd40则用激动剂来激活免疫，主要集中在免疫反应的早期阶段。

2、cd40是大小为48kda的i型跨膜糖蛋白，属于肿瘤坏死因子(tnf)和神经生长因子(ngf)受体超家族成员，是连接固有免疫和适应性免疫的重要免疫细胞通讯介质。广泛存在于血小板、b细胞和髓系细胞，但也存在于非造血细胞，如内皮细胞、成纤维细胞、平滑肌细胞甚至某些类型的肿瘤细胞，如b细胞淋巴瘤和大约70％的实体瘤。cd40l(cd154/tnfsf5)是cd40的配体，属于ii型跨膜糖蛋白，分子量为39kda，也属于肿瘤坏死因子(tnf)受体超家族成员，是很重要的激活apc的共刺激分子。cd40l的表达通常可诱导并局限于造血系统的细胞，如血小板、粒细胞、活化t细胞、活化b细胞和活化自然杀伤细胞(nk)细胞，但内皮细胞和平滑肌细胞也有弱表达。cd40l常以可溶性三聚体形式与cd40结合，引起一定的生物学功能。cd40-cd40l的相互作用是体液免疫和细胞免疫中很重要的信号传导通路，在一些炎症以及某些自身免疫性疾病等方面也起到重要作用。已有证据表明cd40的激活已被证实可以逆转对肿瘤特异性抗原的耐受性，引起特异性抗肿瘤免疫。

3、不同类型的fc受体在免疫系统中发挥着不同的作用。例如，在nk细胞和巨噬细胞上表达的fcyriii受体，与附着在感染细胞或入侵病原体上的抗体结合，引发抗体介导的吞噬作用(adcp)或抗体依赖的细胞毒作用(adcc)，从而导致感染细胞或入侵病原体被消灭。另一方面，在b细胞和树突状细胞上表达的fcyriib受体与igg抗体结合后，可以下调免疫细胞的活性。激活免疫细胞的治疗方法是消除病变细胞(如癌细胞)的有效方法。然而，这类治疗方法往往会引发安全问题。例如，过度激活的免疫细胞将导致非预期细胞毒性作用，造成组织损伤。因此，开发有效和安全的新的免疫疗法是目前亟待解决的问题。

技术实现思路

1、本发明的目的为提供一种结合cd40蛋白的高亲和力抗体，其可通过与fc受体交联激活cd40蛋白，从而实现cd40在fc受体高表达的肿瘤微环境中的特异性激活，降低由于cd40分子广泛表达引起的外周毒副作用，提高cd40激动剂的安全性。

2、为了实现目的，本发明提供以下技术方案：

3、本发明的一方面，提供一种结合cd40蛋白的抗体或其抗原结合部分，所述抗体或其抗原结合部分包含选自氨基酸序列seq id no：1-3、11、12或其任何变体的重链cdr，和/或选自氨基酸序列seq id no：6-8、16-18或其任何变体的轻链cdr，以及重链恒定区；所述重链恒定区包含如seq id no：25或其任何变体所示的氨基酸序列。

4、在一实施方案中，所述抗体或其抗原结合部分依赖于与fc受体的结合激活cd40，从而激活dc细胞，产生抗肿瘤功效。

5、在一优选的实施方式中，所述fc受体为fcγriib，与外周血液、脾脏和淋巴结中的免疫细胞相比，fcγriib在肿瘤微环境中的dc和单核细胞/巨噬细胞中高表达。

6、本发明中，所述抗体依赖于fcγriib介导的交联反应激活cd40，该抗体可以实现在肿瘤微环境中富集，通过fcγriib可以实现cd40在肿瘤微环境中的特异性激活，产生抗肿瘤效果，从而降低cd40激动剂抗体的毒副反应，提高其安全使用剂量。

7、在一实施方案中，所述抗体或其抗原结合部分包含选自氨基酸序列seq id no：1、11或其任何变体的重链cdr1，选自氨基酸序列seq id no：2、12或其任何变体的重链cdr2，选自氨基酸序列seq id no：3或其任何变体的重链cdr3；和/或选自氨基酸序列seq id no：6、16或其任何变体的轻链cdr1，选自氨基酸序列seq id no：7、17或其任何变体的轻链cdr2，选自氨基酸序列seq id no：8、18或其任何变体的轻链cdr3。

8、在一实施方案中，所述抗体或其抗原结合部分包含选自氨基酸序列seq id no：4、14或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列seq id no：9、19或其任何变体的轻链可变区。

9、在一实施方案中，所述抗体或其抗原结合部分包含选自下列的重链和轻链的cdr组合：

10、(1)分别包含seq id no：1-3的重链cdr1、cdr2及cdr3序列，和/或分别包含eq idno：6-8的轻链cdr1、cdr2及cdr3序列；

11、(2)分别包含seq id no：1-3的重链cdr1、cdr2及cdr3序列，和/或分别包含eq idno：16-18的轻链cdr1、cdr2及cdr3序列；

12、(3)分别包含seq id no：11、12、3的重链cdr1、cdr2及cdr3序列，和/或分别包含eqid no：6-8的轻链cdr1、cdr2及cdr3序列；

13、(4)分别包含seq id no：11、12、3的重链cdr1、cdr2及cdr3序列，和/或分别包含eqid no：16-18的轻链cdr1、cdr2及cdr3序列。

14、在一实施方案中，所述抗体或其抗原结合部分是人源化的。

15、在一实施方案中，所述抗体或其抗原结合部分包含氨基酸序列seq id no：13或其任何变体所示的轻链恒定区。

16、在一实施方式中，所述重链恒定区为人lgg2亚型。

17、在一实施方式中，所述重链恒定区为lgg2亚型重链恒定区jac3，其具有higg2(s267e/l328f)突变。

18、在一实施方案中，所述抗体或其抗原结合部分包含氨基酸序列seq id no：5、15或其任何变体所示的重链氨基酸序列，和/或seq id no：10、20或其任何变体所示的轻链氨基酸序列。

19、在一实施方案中，所述抗体或其抗原结合部分能阻断cd40与其配体的结合。

20、本发明的另一方面，提供一种抗原受体，其包括：特异性识别cd40蛋白的抗原结合结构域，所述抗原结合结构域为上述抗体或其抗原结合部分。

21、本发明的另一方面，提供编码上述抗体或其抗原结合部分或抗原受体的核酸分子，或与其具有至少大于60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的序列同一性的核酸分子。

22、本发明的另一方面，提供包含上述核酸分子的载体。

23、本发明的另一方面，提供包含上述载体的细胞或试剂盒。

24、本发明的另一方面，提供包含上述抗受体、核酸分子、载体和/或细胞或试剂盒的药物组合物。

25、本发明的另一方面，提供包含上述抗体或其抗原结合部分、抗原受体、核酸分子、载体、细胞或试剂盒和/或药物组合物在制备用于治疗与cd40相关的疾病的药物或试剂盒中的用途。

26、在一实施方案中，所述与cd40相关的疾病包括肿瘤和感染。

27、在一实施方案中，所述肿瘤包括实体肿瘤和血液肿瘤。

28、在一实施方案中，所述与cd40相关的疾病包括结直肠癌、结肠癌、膀胱癌、乳腺癌、子宫/宫颈癌、卵巢癌、前列腺癌、睾丸癌、食管癌、胃肠癌、胰腺癌、肾癌、头颈癌、肺癌、胃癌、生殖细胞癌、骨癌、肝癌、甲状腺癌、皮肤癌、中枢神经系统的肿瘤、淋巴瘤、白血病、骨髓瘤、肉瘤和黑色素瘤。

29、在一实施方案中，所述感染包括病毒感染、细菌感染、真菌感染和寄生虫感染。

30、在一实施方案中，所述血液肿瘤包括白血病、淋巴瘤和骨髓瘤。