一株具有良好抗氧化效果的痤疮丙酸杆菌及其应用的制作方法

本发明属于微生物，尤其是涉及一株具有良好抗氧化效果的痤疮丙酸杆菌及其应用。

背景技术：

1、机体在新陈代谢过程中，产生大量的自由基，多余的自由基就会与蛋白质、dna等结合，造成氧化损伤。活性氧(reactive oxyden species,ros)是人类机体中最常见的自由基。过量ros会诱发机体氧化反应，可损害机体组织和细胞，进而促进皮肤衰老。抗氧化则是清除过量自由基，或间接消耗容易生成自由基的物质，从而起到一定的抗衰功效。

2、皮肤作为人体最大的器官，其上栖息着大量微生物，这些微生物与皮肤组织、皮肤分泌物、外界环境共同构成人体皮肤生态系统，在保护身体免受环境病原体的侵害、调节免疫系统和分解天然产物等方面具有重要作用。近些年，微生态护肤品概念兴起，通过增加皮肤表面有益微生物、降低有害微生物、增加微生物多样性等调节人体皮肤微生态平衡已经成为新的护肤策略。另外，随着肠道菌群与宿主相互作用的研究越来越深入，皮肤自身菌的应用与开发也不断扩大。2022年韩国一项研究，从20岁女性皮肤分离出植物乳杆菌制成细胞外囊泡与缓冲液混合涂抹至皮肤，有效对抗了皮肤衰老与色素沉着。这说明在健康皮肤中寻找有益菌应用到化妆品中具有广阔的应用前景。

3、痤疮丙酸杆菌是面部皮肤上丰度最高的共生菌，近几年对其关注度不断增加。研究发现，痤疮人群和健康人群皮肤中痤疮丙酸杆菌的基因型并无差异，而痤疮丙酸杆菌的基因表达存在显著的差别。不同来源的痤疮丙酸杆菌菌株的毒力不同，在健康皮肤和痤疮患者皮损中的丰度和分布也不同。痤疮丙酸杆菌的rt4核型更可能与痤疮相关，而rt6则更可能与健康皮肤有关。这使筛选健康皮肤中的“有益”痤疮丙酸杆菌作为自体“益肤菌”成为可能。目前国内缺乏健康人群来源的皮肤菌以及功能菌株的筛选研究。

技术实现思路

1、针对上述问题，本发明提供了一株具有良好抗氧化效果的痤疮丙酸杆菌及其应用。本发明首先从健康皮肤上分离菌株，并对菌株功效进行筛选和验证获得了痤疮丙酸杆菌菌株ccsm0331，该菌株在tsb液体培养基中生长迅速，其发酵液上清对dpph自由基具有良好的清除活性，同时可以降低维生素k3诱导人角质形成细胞产生的ros。其发酵产物的抗氧化能力，可以为皮肤有益菌的开发和微生态护肤品的开发奠定基础。

2、本发明首先自健康皮肤上分离到具有良好抗氧化效果的痤疮丙酸杆菌(cutibacterium acnes)ccsm0331，该菌株已于2022年6月1日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称cctcc)，其保藏编号为cctcc no：m 2022781。该菌株在tsa血平板上菌落为圆形凸起、白色不透明、表面光滑、湿润、边缘整齐、直径0.2～0.5mm的菌落、不产溶血圈。革兰氏染色阳性。菌体特征呈棒状微弯，一端钝圆，另一端尖细呈棒状。单个或成双排列，或呈x、y和v形排列，无鞭毛，不能运动，不产芽孢，革兰氏染色阳性。tsb液体培养基中，最低生长温度为15℃，最高生长温度为45℃，在30～40℃生长温度最佳；37℃恒温培养，ccsm0331菌株的最高生长ph为9.0、最低生长ph为4.0，最适生长ph为7.0左右。

3、本发明还提供了上述的痤疮丙酸杆菌ccsm0331菌株以及该菌株的tsb发酵上清在皮肤抗氧化方面的应用。上述抗氧化包括清除dpph自由基和降低由维生素k3诱导人角质形成细胞产生的ros。

4、上述的痤疮丙酸杆菌ccsm0331菌株以及该菌株的tsb发酵上清在对抗自由基对皮肤损伤，制备抗氧化、抗衰老护肤品中的应用。

5、本发明还提供了上述痤疮丙酸杆菌ccsm0331的tsb发酵上清的制备方法，其特征是，痤疮丙酸杆菌ccsm0331在tsb液体培养基(胰酪大豆胨液体培养基)中30～40℃厌氧发酵培养，发酵液离心，获得ccsm0331的tsb发酵上清。

6、具体包括以下步骤：

7、(1)将ccsm0331菌株挑取单菌落接种于tsb液体培养基中，30～40℃恒温厌氧培养48～72h，测定发酵液的od600值，调整菌体od600值为0.9～1.1，作为种子液；

8、(2)将种子液以体积比1～3％的接种量接种于tsb液体培养基中，30～40℃恒温厌氧培养48～72h，得到痤疮丙酸杆菌ccsm0331的发酵液；

9、(3)将上述发酵液离心，获得的离心上清液即为痤疮丙酸杆菌ccsm0331的发酵上清液。

10、本发明的技术效果是：

11、1、与现有技术(未见有关健康人群痤疮丙酸杆菌筛选的报道)相比，本发明提供了一株健康人源(分离自健康人皮肤上)的痤疮丙酸杆菌。

12、2、经过试验证明，该痤疮丙酸杆菌ccsm0331具有良好的抗氧化效果，所述痤疮丙酸杆菌具有高dpph自由基清除率和降低维生素k3诱导人角质形成细胞产生的ros。其中，所述痤疮丙酸杆菌发酵上清dpph自由基清除率为78.83±1.8％，ros清除率为17.9％。本发明菌株在对抗自由基对皮肤损伤，在抗氧化、抗衰老护肤品开发方面具有良好的应用前景，填充了痤疮丙酸杆菌在抗氧化功效筛选中的空白。

13、3、痤疮丙酸杆菌ccsm0331在tsb液体培养基中生长迅速，便于大规模生产应用。

技术特征：

1.一株痤疮丙酸杆菌(cutibacterium acnes)ccsm0331，所述菌株的保藏编号为cctccno：m 2022781。

2.权利要求1所述的痤疮丙酸杆菌ccsm0331在皮肤抗氧化方面的应用。

3.如权利要求2所述的应用，其特征是，所述抗氧化包括清除dpph自由基和降低由维生素k3诱导人角质形成细胞产生的ros。

4.权利要求1所述的痤疮丙酸杆菌ccsm0331在对抗自由基对皮肤损伤，制备抗氧化、抗衰老护肤品中的应用。

5.一种以痤疮丙酸杆菌ccsm0331为有效菌，tsb液体培养基发酵制备的tsb发酵上清。

6.权利要求5所述的tsb发酵上清的制备方法，其特征是，痤疮丙酸杆菌ccsm0331在tsb液体培养基中30～40℃厌氧发酵培养，发酵液离心，获得ccsm0331的tsb发酵上清。

7.如权利要求6所述的tsb发酵上清的制备方法，其特征是，

8.权利要求5所述的tsb发酵上清在皮肤抗氧化方面的应用。

9.如权利要求8所述的应用，其特征是，所述抗氧化包括清除dpph自由基和降低由维生素k3诱导人角质形成细胞产生的ros。

10.权利要求5所述的tsb发酵上清在对抗自由基对皮肤损伤，制备抗氧化、抗衰老护肤品中的应用。

技术总结
本发明公开了一株具有良好抗氧化效果的痤疮丙酸杆菌及其应用。本发明首先自健康皮肤上分离到具有良好抗氧化效果的痤疮丙酸杆菌(Cutibacterium acnes)CCSM0331，其保藏编号为CCTCC No：M 2022781。经过试验证明，该痤疮丙酸杆菌CCSM0331具有良好的抗氧化效果，所述痤疮丙酸杆菌具有高DPPH自由基清除率和降低维生素K3诱导人角质形成细胞产生的ROS。其中，所述痤疮丙酸杆菌发酵上清DPPH自由基清除率为78.83±1.8％，ROS清除率为17.9％，在对抗自由基对皮肤损伤，在抗氧化、抗衰老护肤品开发方面具有良好的应用前景。

技术研发人员：杨素珍,韩婷婷,李燕,姜姗姗,刘三岭,徐佩佩,白天明,袁春颖
受保护的技术使用者：山东福瑞达生物股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15