1.本技术属于微生物和胃病治疗
技术领域：
：，具体地，本技术提供了一种肠膜明串珠菌，并提供了该菌及其与甘油的组合在抑制幽门螺杆菌中的应用。
背景技术：
：：2.幽门螺旋杆菌(helicobacterpylori简称hp)是胃癌、慢性胃炎、消化性溃疡、胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤等疾病的主要病因之一。菌体形态呈螺旋或s形，是能够定植于胃黏膜的微厌氧的革兰阴性杆菌(彭超，谢川，吕农华.幽门螺旋杆菌在胃内定植的相关影响因素[j].中国微生态学杂志，2017，29(3)：363-366.)。1982年，澳大利亚西澳大学的临床微生物教授barryj.marshall发现了幽门螺旋杆菌，2005年获诺贝尔医学奖。幽门螺旋杆菌感染在家庭内有明显的聚集现象，自愈率几乎为零。1994年，世界卫生组织(who)国际癌症研究机构将幽门螺旋杆菌定为ⅰ类致癌原。全世界有超过50％的人有hp感染。流行病学调查表明，我国成人中hp感染率达到40％～60％，平均为55％(毛丹丹,傅咏南,卞雪莲,王校.一种抑制幽门螺旋杆菌的复合益生菌组合物及其应用[p].cn111632084a,2020-09-08)。[0003]随着幽门螺旋杆菌治疗的广泛开展，幽门螺旋杆菌对克拉霉素、甲硝唑和左氧氟沙星(氟喹诺酮类)的耐药率呈上升趋势(zhangyx，zhouly，songzq，etal.primaryantibioticresistanceofhelicobacterpyloristrainsisolatedfrompatientswithdyspepticsymptomsinbeijing:aprospectiveserialstudy[j].worldjgastroenterol,2015,21(9):2786-2792)。目前，益生菌、黏膜保护剂、中药等非抗生素药物在幽门螺旋杆菌防治成研究热点。益生菌在提高幽门螺旋杆菌根除率及减少药物不良反应方面具有显著优势(ablesaz，simoni，meltonerupdateonhelicobacterpyloritreatment[j].am.fam.physician，2007，75:351-358.；yoonh，kimn，kimjy，etal.effectsofmultistrainprobioticcontainingyogurtonsecondlinetripletherapyforhelicobacterpyloriinfection[j].j.gastroenterol.hepatol.，2011，26:44-48)，其中乳酸菌的应用最为广泛。[0004]乳酸菌是国内外公认的对人类健康有益的安全(generallyrecognizedassafe，gras)微生物，被广泛应用于食品、医药、农业等领域中，能够调节胃肠道菌群平衡，提高人体免疫力，改善机体营养状况，还具有降低胆固醇、血脂等多种生理功能。很多乳酸菌还能够产生对致病微生物具有拮抗作用的物质，如有机酸类、乙醇、过氧化氢、罗伊氏菌素、细菌素类等，在食品以及医药等行业具有潜在的应用价值，是乳酸菌研究热点之一(王彦伟.产细菌素乳酸菌的筛选及其所产细菌素leucocinb-k7的研究[d].江南大学,2016)。[0005]幽门螺杆菌之所以能在酸度很低的胃中存活，就是因为幽门螺杆菌能产生脲素酶。脲素酶可将体内的脲素等分解为氨和二氧化碳，从而使幽门螺杆菌周围环境的ph值上升，形成一个微环境使幽门螺杆菌能够稳定生存增殖。因此，如果能找到抑制幽门螺杆菌脲素酶活性的益生菌加到幽门螺杆菌所处的环境中，将使幽门螺杆菌处于不利的生存环境，从而抑制幽门螺杆菌在胃中的定植与生长(陈晓华.拮抗幽门螺杆菌益生菌的筛选及其干预机制的研究[d].江南大学,2011)。[0006]乳酸菌中明串珠菌属的肠膜明串珠菌(leuconostocmesenteroides)是重要菌种，安全性高(李祎,吴晓敏,杜航,景如贤,杨刚刚.一株肠膜明串珠菌的分离鉴定及其抑菌特性[j].微生物学通报,2021,48(12):4776-4788)。josé从蔬菜中分离和纯化得到的肠膜明串珠菌能够有效抑制尖孢镰刀菌的生长(linaresmoralesjosérafaeletal.selectionoflacticacidbacteriaisolatedfromfreshfruitsandvegetablesbasedontheirantimicrobialandenzymaticactivities.[j].foods(basel,switzerland),2020,9(10):1399-1399)。苏慧慧从鲜榨蔗汁中分离和纯化后得到的肠膜明串珠菌，对几种食源性致病菌如金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌和单增李斯特菌有抑菌效果(苏慧慧,高亚飞,张平军,黄俊生,郭艺山,黄冬婷,高俊永,徐日益,刘芷媛.一种产细菌素的肠膜明串珠菌及其应用[p].cn113308408a,2021-08-27)，未见有肠膜明串珠菌对幽门螺杆菌抑制或应用的研究，也未见其与小球藻、甘油、甜菊糖配伍后在增效抑制幽门螺杆菌的食品、保健品或药用辅料中的应用。[0007]小球藻(chlorella)属绿藻门(chlorophyta)绿球藻目(chlorococcales)小球藻科(chlorellales)，可直接作为膳食补充剂。小球藻中多糖、酚酸类和黄酮类具有多种生物活性，可调节机体免疫力和抗肿瘤、抗炎、抗病毒、抗菌、抗氧化等。有的多糖已被纯化作为新一代药物(谢凤行,周可,张峰峰,赵琼,赵玉洁,杨建永,孙丽丽.小球藻培养基优化及脱氮效果[j].天津师范大学学报(自然科学版),2019,39(05):51-56；孙建瑞,赵君峰,符丹丹,原江锋,王大红.响应面法优化chlorellavulgaris224胞外多糖积累及其抑菌和抗氧化活性[j].天然产物研究与开发,2020,32(03):489-497)。小球藻的甲醇提取物有抑制大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的作用(pradhanbiswajitaetal.evaluationoftheanti-bacterialactivityofmethanolicextractofchlorellavulgarisbeyerinck[beijerinck]withspecialreferencetoantioxidantmodulation[j].futurejournalofpharmaceuticalsciences,2021,7(1)：145-146)。[0008]甜菊糖可促进小球藻的生长，提高生长速度和培养效率(陈育如,尹慧慧,郭欢欢等.甜菊糖在促进小球藻生长中的应用[p].zl107043733b)：添加来自生物质热解的内醚糖或经脱毒处理的纤维素热解液也能促进小球藻生长并且提高其叶绿素和单细胞蛋白含量。内醚糖或热解液能促进小球藻的生长的效率最高达194％，并显著提高其叶绿素和菌体蛋白含量(陈育如,孙欢,赵乙萱,刘军利,卫民.一种促进小球藻生长并提高其叶绿素和菌体蛋白含量的方法[p].zl103045481b)。技术实现要素：[0009]本发明在常用食品霉豆渣中筛选了多种乳酸菌和真菌，其中一株乳酸菌能有效抑制hp菌的生长(经形态和分子生生物学鉴定为肠膜明串珠菌(lk-06)，并提交菌种保藏中心保藏，保藏号为cgmccno.24366，将其与小球藻、甜菊糖、甘油等配伍使用，大大提高了对hp菌的抑制效率。[0010]一方面，本技术提供了一种具有抑制幽门螺旋杆菌和其脲素酶活性的肠膜明串珠菌lk-06，所述肠膜明串珠菌已于2022年1月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmccno.24366，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。[0011]进一步地，本技术提供了上述肠膜明串珠菌cgmccno.24366以及可选的甘油或甘油前体在制备抑制幽门螺杆菌和/或抑制幽门螺杆菌脲素酶活性的产品中的应用。[0012]另一方面，本技术提供了抑制幽门螺杆菌和/或抑制幽门螺杆菌脲素酶活性的产品，其包含上述肠膜明串珠菌cgmccno.24366以及可选的甘油或甘油前体。[0013]进一步地，所述产品中肠膜明串珠菌的活菌数不低于5×105cfu/ml或5×105cfu/g。[0014]进一步地，所述产品选自药物、食品、保健品、药物载体和/或药用辅料。[0015]进一步地，所述产品为冲饮剂、片剂、丸剂、粉剂、口服液、颗粒剂或胶囊剂。[0016]进一步地，所述产品为益生菌压片、益生菌固体饮料、益生菌液体饮料、益生菌糖果、益生菌牙膏、益生菌酸奶、益生菌功能性保健品、益生菌药用辅料。[0017]进一步地，所述产品中还包括选自小球藻粉、小球藻其提取物或藻液、植物油、全脂或脱脂奶粉、豆奶粉、甜菊糖、酶改糖、木糖醇、微晶纤维素、硬脂酸镁、全脂乳粉、脱脂乳粉、豆乳粉、豆粉、豆浆、其他益生菌的成分。[0018]另一方面，本技术提供了一种抑制幽门螺杆菌和/或抑制幽门螺杆菌脲素酶活性的产品，其特征在于，所述产品包含肠膜明串珠菌菌株cgmccno.24366与甘油或甘油前体，其中肠膜明串珠菌菌株cgmccno.24366与甘油或甘油前体混合存在或分装在不同容器或药剂中联合使用。[0019]进一步地，甘油或甘油前体使用时的浓度为50-300mmol/l，优选100-300mmol/l，优选200-300mmol/l，最优选300mmol/l。[0020]另一方面，本技术提供了一种抑制幽门螺杆菌和/或脲素酶活性的产品，其特征在于，所述产品包含肠膜明串珠菌菌株cgmccno.24366与小球藻，其中肠膜明串珠菌菌株cgmccno.24366与小球藻混合存在或分装在不同容器或药剂中联合使用，其中小球藻占产品重量的5％-30％。[0021]所用甜菊糖可以是甜菊糖苷系列物中的一种或多种混合物。[0022]所用甘油既可以是不同浓度或纯度的产品，也可以是能在体内产生甘油的前体如甘油脂等。[0023]本技术提供了一种肠膜明串珠菌肠膜亚种(leuconostocmesenteroides)cgmccno.24366，并提供了该菌及其与甘油的组合在抑制幽门螺杆菌中的应用。肠膜明串珠菌cgmccno.24366可显著抑制幽门螺杆菌的生长(抑菌圈直径12.6mm)；也可显著抑制幽门螺旋杆菌脲素酶的活性(抑制率68.3％)；与甘油合用，抑制幽门螺杆菌能力显著提高(抑菌圈直径14.4mm)；在制备抑制幽门螺杆菌的产品，如食品、保健品和药用辅料等中具有良好的应用前景。附图说明[0024]图1为不同菌株抑制hp菌脲素酶活力的比较图；[0025]图2为肠膜明串珠菌加甘油前后的抑菌效果比较图(左为加甘油处理前的抑菌圈，右为加甘油处理后的抑菌圈。具体实施方式[0026]实施例1：[0027]肠膜明串珠菌对幽门螺杆菌的抑制作用[0028]肠膜明串珠菌cgmccno.24366接种于mrs液体培养基中，37℃条件培养培养12h得到菌液。用牛津杯法测定菌液抑制幽门螺杆菌的效果，肠膜明串珠菌cgmccno.24366菌液对幽门螺杆菌的抑菌圈达12.6mm，表明肠膜明串珠菌cgmccno.24366具有很强的抑制幽门螺杆菌的作用。[0029]实施例2：[0030]甘油增效肠膜明串珠菌对幽门螺杆菌的抑制作用[0031]肠膜明串珠菌cgmccno.24366接种于mrs液体培养基中，37℃条件培养培养12h得到菌液。用牛津杯法测定甘油增效肠膜明串珠菌cgmccno.24366抑制幽门螺杆菌的效果，一只牛津杯只加肠膜明串珠菌cgmccno.24366菌液，另一只牛津杯加入肠膜明串珠菌cgmccno.24366菌液和甘油(300mmol/l)，肠膜明串珠菌cgmccno.24366菌液对幽门螺杆菌的抑菌圈达12.6mm，肠膜明串珠菌cgmccno.24366菌液和甘油对幽门螺杆菌的抑菌圈达14.4mm,表明甘油增效肠膜明串珠菌cgmccno.24366对幽门螺杆菌的抑制作用。[0032]实施例3：[0033]肠膜明串珠菌等乳酸菌对幽门螺杆菌脲素酶活力的影响[0034]肠膜明串珠菌接种于mrs培养基中经培养得发酵液。在96孔板中，取800μl幽门螺杆菌和200μl肠膜明串珠菌悬液混匀，共培养6h、22h。然后取50μl加入150μl脲素-酚红溶液，振荡后于波长550nm处测其吸光度值。图1的结果表明，经肠膜明串珠菌cgmccno.24366处理后，幽门螺杆菌的脲素酶活力显著下降(抑制率68.3％)。表明肠膜明串珠菌cgmccno.24366可有效降低幽门螺杆菌脲素酶的活力。[0035]实施例4：[0036]肠膜明串珠菌对幽门螺杆菌阳性患者幽门螺杆菌量和清除率的影响[0037]30名幽门螺杆菌阳性感染者(人群分布情况见表1，随机分为两组，人群基本情况差异无统计学意义)，其中，服用安慰剂组15人，服用肠膜明串珠菌cgmccno.24366益生菌剂组15人。安慰剂组每天服用安慰剂3次，肠膜明串珠菌cgmccno.24366益生菌组每天服用菌剂3次，实验周期1个月(安慰剂和肠膜明串珠菌菌粉除成分不同外，产品的外观和包装均相同，无明显差别)。分别于实验开始前和结束后通过c13吹气实验和hp检测试纸检测安慰剂组和益生菌组人员，评估患者体内幽门螺杆菌的清除率。[0038]由表1可见，肠膜明串珠益生菌组阴性率显著高于安慰剂组。此结果表明，肠膜明串珠菌cgmccno.24366对提高幽门螺杆菌感染患者体内幽门螺杆菌的清除率有帮助。[0039]表1不同组别幽门螺杆菌阳性患者的清除率[0040][0041]实施例5：[0042]菌粉冻干制备[0043]肠膜明串珠菌cgmccno.24366接种于液体发酵培养基中，37℃条件下培养36h得到菌液；经8000rpm离心10min得到菌泥；加保护剂后冻干，得到肠膜明串珠菌cgmccno.24366菌粉；保护剂的成分包含：100g/l脱脂奶粉。[0044]实施例6：[0045]菌粉喷雾干燥制备[0046]肠膜明串珠菌cgmccno.24366接种于液体发酵培养基中，35℃条件下培养得到菌液；加保护剂后,用常规喷雾干燥工艺得到肠膜明串珠菌cgmccno.24366菌粉；保护剂的成分包含：100g/l脱脂奶粉。[0047]实施例7：[0048]胶囊剂制备制备过程如下：[0049]肠膜明串珠菌cgmccno.24366菌粉25份、糊精54份、羧甲基淀粉钠15份、脱脂乳粉3份，小球藻2份，甜菊糖苷1份，混合均匀后用胶囊机分装得胶囊产品。[0050]实施例8：[0051]肠膜明串珠菌cgmccno.24366菌粉25份、糊精54份、羧甲基淀粉钠15份、脱脂乳粉3份，小球藻2份，甜菊糖苷1份，加成型剂混合均匀后用压片机压片得片剂产品。[0052]实施例9：[0053]肠膜明串珠菌cgmccno.24366菌粉15份、罗伊氏菌10份，糊精54份、羧甲基淀粉钠15份、脱脂乳粉3份，小球藻2份，甜菊糖苷酶改煻1份，加成型剂混合均匀后，用压片机压片得片剂产品。[0054]实施例10：[0055]肠膜明串珠菌cgmccno.24366菌粉15份、约氏乳杆菌10份，糊精54份、羧甲基淀粉钠15份、脱脂乳粉3份，小球藻2份，甜菊糖苷酶改煻1份，加成型剂混合均匀后，用压片机压片得片剂产品。[0056]实施例11：[0057]肠膜明串珠菌cgmccno.24366菌粉15份、鼠李乳杆菌粉10份，糊精54份、羧甲基淀粉钠15份、脱脂乳粉3份，小球藻2份，甜菊糖苷酶改煻1份，加成型剂混合均匀后，用压片机压片得片剂产品。[0058]实施例12：[0059]其他同实施例11，将其中的鼠李乳杆菌换为嗜酸乳杆菌。[0060]实施例13：[0061]肠膜明串珠菌cgmccno.24366制备口服液，具体过程如下：[0062]量取肠膜明串珠菌cgmccno.24366菌液97份、甜菊酶改糖2份、小球藻提取物1份，抗坏血酸0.05份混合罐装，即得口服液。[0063]实施例14：[0064]制备口服液，具体制备过程如下：[0065]量取肠膜明串珠菌cgmccno.24366菌液80份、鼠李糖乳杆菌菌液10份、、甜菊糖1份、抗坏血酸0.05份混合罐装，即得口服液。[0066]实施例15：[0067]肠膜明串珠菌cgmccno.24366菌液84份、罗伊氏乳杆菌菌液15份、甜菊糖1份、抗坏血酸0.05份混合均匀，罐装即得液体饮料。[0068]实施例16：[0069]其他同实施例15，将其中的罗伊氏乳杆菌换为嗜酸乳杆菌。[0070]实施例17：[0071]肠膜明串珠菌cgmccno.24366用于制备压片糖果过程如下：[0072]将下述原料包括脱脂奶粉30份、肠膜明串珠菌cgmccno.24366的菌粉25份、约氏乳杆菌菌液15份，糊精35份、植物油10份、甜菊糖2.5份、微晶纤维素8份和硬脂酸镁1份混合过150目筛网，通过压片机压片，包装，制得益生菌无糖压片糖果。[0073]实施例18：[0074]其他同实施例17，将其中的嗜酸乳杆菌换为约氏乳杆菌。[0075]实施例19：[0076]肠膜明串珠菌cgmccno.24366可用于制备压片糖果，具体制备过程如下：[0077]将下述原料包括脱脂奶粉30份、肠膜明串珠菌cgmccno.24366的菌粉15份、糊精35份、植物油10份、甘油5份、甜菊糖2份、微晶纤维素8份和硬脂酸镁2份混合过150目筛网，通过压片机压片后包装。[0078]实施例20：[0079]将全脂奶粉30份、肠膜明串珠菌cgmccno.24366的菌粉3份、鼠李糖乳杆菌2份、精精35份、小球藻10份、甜菊糖4份、微晶纤维素8份和硬脂酸镁1份混合过150目筛网，通过压片机压片，包装，制得益生菌无糖片剂。[0080]实施例21：[0081]肠膜明串珠菌cgmccno.24366用于制备固体饮料，具体制备过程如下：[0082]肠膜明串珠菌cgmccno.24366的菌粉18份、罗伊氏乳杆菌12份、乳粉35份、甜菊糖2份、cmc混合后包装，制得益生菌固体饮料。[0083]实施例22：[0084]肠膜明串珠菌cgmccno.24366可用于制备药用辅料，过程如下：[0085]肠膜明串珠菌cgmccno.24366的菌粉50份、甜菊酶改糖50份、混合均匀后作为药用辅料。[0086]实施例23：[0087]肠膜明串珠菌cgmccno.24366用于制备益生菌酸奶：[0088]脱脂奶在灭菌后冷却，添加5％肠膜明串珠菌cgmccno.24366菌粉和乳酸菌菌粉，1％甜菊糖苷，得到益生菌酸奶。[0089]实施例24：[0090]肠膜明串珠菌cgmccno.24366可用于制备益生菌酸奶，具体制备过程如下：[0091]全脂奶巴氏杀菌后添加5％肠膜明串珠菌cgmccno.24366菌粉，4％小球藻粉，1％甜菊糖苷，得到益生菌小球藻酸奶。[0092]实施例25：[0093]脱脂奶在95℃热杀菌20min后冷却，添加3％肠膜明串珠菌cgmccno.24366菌粉，2％鼠李糖乳杆菌菌粉，1％甜菊糖苷，混合均质罐装，得到益生菌饮料。[0094]实施例26：[0095]新鲜牛奶在95℃热杀菌20min后冷却，添加4％肠膜明串珠菌cgmccno.24366菌粉，1％罗伊氏乳杆菌菌粉，2％甜菊糖苷，混合，均质罐装，得到益生菌奶。[0096]实施例27：[0097]脱脂奶在95℃热杀菌20min后冷却，得到原料；在原料中添加3％肠膜明串珠菌cgmccno.24366菌粉，2％嗜酸乳杆菌菌粉，2％甜菊糖苷，混合，均质罐装，得到益生菌奶。[0098]实施例28：[0099]肠膜明串珠菌cgmccno.24366用于制备益生菌牙膏，具体制备过程如下：[0100]肠膜明串珠菌cgmccno.2436625份加入甜菊糖苷1份、去离子水40份，均匀搅拌获得的胶体，再加入发泡剂5份进行搅拌，再抽真空获得混合膏体，加入3份的薄荷香精并搅拌均匀，室温静置，经包装后得牙膏产品。[0101]实施例29：[0102]肠膜明串珠菌cgmccno.2436625份加入小球藻粉5份、甜菊糖苷2份、去离子水40份，均匀搅拌获得的胶体，再加入发泡剂5份进行搅拌，再抽真空获得混合膏体，加入3份的薄荷香精并搅拌均匀，室温静置后包装得牙膏产品。[0103]实施例30：[0104]肠膜明串珠菌cgmccno.2436625份加入甘油10份、甜菊糖苷2份、去离子水40份，均匀搅拌获得的胶体，再加入发泡剂5份进行搅拌，再抽真空获得混合膏体，加入3份的薄荷香精并搅拌均匀，室温静置后包装得牙膏产品。[0105]实施例31：[0106]肠膜明串珠菌cgmccno.2436615份，鼠李糖乳杆菌10份，加入甜菊糖苷2份、去离子水40份，均匀搅拌获得的胶体，再加入发泡剂5份进行搅拌，再抽真空获得混合膏体，加入3份的薄荷香精并搅拌均匀，室温静置包装后得牙膏产品。[0107]实施例32：[0108]肠膜明串珠菌cgmccno.2436613份，罗伊氏乳杆菌12份，加入甜菊糖苷2份、去离子水40份，均匀搅拌获得的胶体，再加入发泡剂5份进行搅拌，再抽真空获得混合膏体，加入3份的薄荷香精并搅拌均匀，室温静置包装后得牙膏产品。[0109]实施例33：[0110]肠膜明串珠菌cgmccno.2436610份，嗜酸乳杆菌15份，加入甜菊糖苷2份、去离子水40份，均匀搅拌获得的胶体，再加入发泡剂5份进行搅拌，再抽真空获得混合膏体，加入3份的薄荷香精并搅拌均匀，室温静置包装后得牙膏产品。[0111]实施例34：[0112]肠膜明串珠菌cgmccno.24366接种于mrs液体培养基，37℃条件培养培养12h得到菌液。图2显示了用牛津杯法测定甘油增效肠膜明串珠菌cgmccno.24366抑制幽门螺杆菌的效果，一只牛津杯只加肠膜明串珠菌cgmccno.24366菌液，另一只牛津杯加入肠膜明串珠菌cgmccno.24366菌液和小球藻提取物(占菌液的5％)，与未加小球藻的肠膜明串珠菌cgmccno.24366菌液，相比，加有小球藻提取物的抑菌圈更大(直径增加了22％)，说明小球藻提取物能增效肠膜明串珠菌cgmccno.24366对幽门螺杆菌的抑制作用。[0113]显然，本发明的上述实施例仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而这些属于本发明的精神所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之中。当前第1页12当前第1页12