一种乳酸乳球菌单链DNA结合蛋白抗菌肽Yt9z及其应用

本发明涉及生物，尤其涉及一种乳酸乳球菌单链dna结合蛋白抗菌肽yt9z及其应用。

背景技术：

1、副溶血性弧菌是一种革兰氏阴性嗜盐杆菌，主要来源于鱼、虾、蟹、贝类和海藻等海产品。它是一种食源性致病菌，摄入含有该菌的食物会导致食物中毒，主要表现为腹痛、呕吐、腹泻及水样便等症状。此外，它还可以形成保护宿主防御的生物膜，从而对抗生素产生耐药性。

2、抗菌肽广泛分布于自然界的动植物和微生物中，是生物先天免疫系统的重要组成部分，是经免疫诱导产生的一类抵抗外界病原体感染的具有生物活性的小分子多肽。抗菌肽具有热稳定性良好、广谱抗菌行、不存在抗药性等特点，是很好的抗生素替代品。目前，人们已经从细菌、真菌、高等植物、动物等中发现并分离获得抗菌肽。

3、传统抗生素的发现并应用是人类的一大革命，但目前细菌对抗生素的耐药性问题已十分严重，对人类健康构成威胁。抗菌肽又称宿主防御肽，是生物机体在外界刺激诱导下产生，由特定基因编码合成，具有广谱抗菌活性或免疫调节功能的小分子多肽。与抗生素相比，具有广谱、快速、高选择性、低毒性的特点，且其存在多种作用靶点，使细菌很难产生耐药性。因此，抗菌肽被认为是抗生素的一种良好替代品。

4、乳酸乳球菌是一种革兰氏阳性兼性厌氧菌，其广泛存在于乳制品和植物产品中，在食品工业中应用广泛，对人和动物无致病性，是被公认安全的食品级微生物。乳酸乳球菌生长快速、代谢相对简单，分解与合成代谢分开；基因组小但包含足够的生物信息，胞内外蛋白易于分离、纯化，这些优势使乳酸乳球菌在代谢调控方面具有的重大研究价值。乳酸乳球菌在乳制品中已经得到广泛的应用，是发酵工业中常用的的发酵剂，可用于酸奶、大豆酸奶、干酪等乳制品的生产，对这些发酵乳制品的风味有重要影响。

5、因此，从乳酸乳球菌中寻找具有抗菌活性的抗菌肽，并探究其抑菌机理，具有重要的研究意义。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种乳酸乳球菌单链dna结合蛋白抗菌肽yt9z及其应用，通过乳酸乳球菌单链dna结合蛋白抗菌肽yt9z对副溶血性弧菌抑菌活性的研究，为寻找新的食品防腐剂、生物医药和水产饲料添加剂提供实验依据，促进我国食品、医药和水产养殖行业的健康、持续发展。

2、本发明解决其技术问题所采用的技术方案之一是：提供一种乳酸乳球菌单链dna结合蛋白抗菌肽yt9z。其氨基酸序列为rqqaenlakfakkg，如seq id no：1所示。

3、抗菌肽yt9z的分子量为1587.882道尔顿，所带正电荷为+3，总疏水性比为36％，通过apd3预测该肽可能形成α螺旋。

4、抗菌肽yt9z可以从以下作用对细菌造成破坏：作用于细胞膜使其发生变形和萎缩，增强细胞膜通透性利于yt9z进入细菌细胞与细菌dna发生结合，干扰细菌dna复制合成从而使细菌死亡。

5、本发明解决其技术问题所采用的技术方案之二是：提供一种乳酸乳球菌单链dna结合蛋白抗菌肽yt9z在制备抗菌药物中的应用，该抗菌药物用于抑制和/或杀灭副溶血性弧菌。

6、本发明解决其技术问题所采用的技术方案之三是：提供一种抗菌药物，其有效成分包括乳酸乳球菌单链dna结合蛋白抗菌肽yt9z，所述抗菌肽yt9z的氨基酸序列为seq idno：1。

7、在本发明一较佳实施例中，所述抗菌药物的有效成分为乳酸乳球菌单链dna结合蛋白抗菌肽yt9z，所述抗菌肽yt9z的氨基酸序列为seq id no：1。

8、在本发明一较佳实施例中，所述抗菌药物用于抑制和/或杀灭副溶血性弧菌。

9、本发明解决其技术问题所采用的技术方案之四是：提供一种饲料添加剂，其有效成分包括乳酸乳球菌单链dna结合蛋白抗菌肽yt9z，所述抗菌肽yt9z的氨基酸序列为seqid no：1。

10、在本发明一较佳实施例中，所述饲料添加剂的有效成分为乳酸乳球菌单链dna结合蛋白抗菌肽yt9z，所述抗菌肽yt9z的氨基酸序列为seq id no：1。

11、在本发明一较佳实施例中，所述饲料添加剂用于抑制和/或杀灭副溶血性弧菌。

12、本发明解决其技术问题所采用的技术方案之五是：提供一种食品防腐剂，其有效成分为乳酸乳球菌单链dna结合蛋白抗菌肽yt9z，所述抗菌肽乳酸乳球菌单链dna结合蛋白抗菌肽yt9z的氨基酸序列为seq id no：1。

13、在本发明一较佳实施例中，所述食品防腐剂用于抑制和/或杀灭副溶血性弧菌。

14、本发明的抗菌肽可以采用本领域技术人员已知的方法合成，例如固相合成，并采用本领域技术人员已知的方法进行纯化，例如高效液相色谱法。

15、实施本发明，具有如下有益效果：

16、本发明以乳酸乳球菌单链dna结合蛋白为研究对象，通过lcms质谱结果得到6种肽，然后利用apd3对所得的肽进行预测，发现一个全新氨基酸序列的多肽yt9z。研究yt9z对副溶血性弧菌这种致病性弧菌的抑菌活性；并利用透射电镜观察yt9z对副溶血性弧菌的破坏程度；同时提取副溶血性弧菌的基因组dna，验证其对副溶血性弧菌dna的影响作用。实验结果表明，该肽对副溶血性弧菌具有明显抑制作用。

17、它的抑菌机理是作用于细胞膜使其发生变形和萎缩，增强细胞膜通透性使肽能够穿过细菌细胞膜，与细菌dna结合，抑制dna的复制合成等功能，从而达到使细菌失活的作用。抗菌肽yt9z来源为单链dna结合蛋白，此蛋白在dna复制、重组和修复中起着重要作用，这一来源更好的印证了其能够与dna结合完成杀菌。

技术特征：

1.一种乳酸乳球菌单链dna结合蛋白抗菌肽yt9z，其氨基酸序列如seq id no：1所示。

2.如权利要求1所述的乳酸乳球菌单链dna结合蛋白抗菌肽yt9z在制备抗菌药物中的应用,其特征在于：所述抗菌药物用于抑制和/或杀灭副溶血性弧菌。

3.一种抗菌药物，其特征在于：其有效成分包括乳酸乳球菌单链dna结合蛋白抗菌肽yt9z，所述抗菌肽yt9z的氨基酸序列为seq id no：1。

4.如权利要求3所述的抗菌药物，其特征在于：其有效成分为乳酸乳球菌单链dna结合蛋白抗菌肽yt9z，所述抗菌肽yt9z的氨基酸序列为seq id no：1。

5.如权利要求3或4任一项所述的一种抗菌药物，其特征在于：所述抗菌药物用于抑制和/或杀灭副溶血性弧菌。

6.一种饲料添加剂，其特征在于：其有效成分包括乳酸乳球菌单链dna结合蛋白抗菌肽yt9z，所述抗菌肽yt9z的氨基酸序列为seq id no：1。

7.如权利要求6所述的饲料添加剂，其特征在于：其有效成分为乳酸乳球菌单链dna结合蛋白抗菌肽yt9z，所述抗菌肽yt9z的氨基酸序列为seq id no：1。

8.如权利要求6或7任一项所述的一种饲料添加剂，其特征在于：所述饲料添加剂用于抑制和/或杀灭副溶血性弧菌。

9.一种食品防腐剂，其特征在于：其有效成分为乳酸乳球菌单链dna结合蛋白抗菌肽yt9z，所述抗菌肽yt9z的氨基酸序列为seq id no：1。

10.如权利要求9所述的食品防腐剂，其特征在于：所述食品防腐剂用于抑制和/或杀灭副溶血性弧菌。

技术总结
本发明公开了一种乳酸乳球菌单链DNA结合蛋白抗菌肽Yt9z，其氨基酸序列为RQQAENLAKFAKKG，抗菌肽Yt9z的分子量为1587.882道尔顿。实验证明，本发明抗菌肽Yt9z能够有效抑制副溶血性弧菌的生长，且不易产生耐药性，可以作为抗生素的良好替代品用于副溶血性弧菌的防治。本发明为后续进一步研究乳酸乳球菌单链DNA结合蛋白用于食品防腐剂、生物医药和饲料添加剂奠定了基础。

技术研发人员：杨燊,邢宇凡,叶伟岸,裘德·尤文图斯·阿维娅,金日天,翁武银
受保护的技术使用者：集美大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/11