一种香豆素类化合物及其制备方法与抗阿尔兹海默病的应用与流程

1.本发明属于有机化合物合成与医药应用技术领域，具体涉及一种香豆素类化合物及其制备方法与抗阿尔兹海默病的应用。


背景技术：

2.阿尔茨海默病(alzheimer’s disease,ad)是最常见的一种痴呆症，以认知缺陷、行为和人格异常为特征。阿尔茨海默病晦涩复杂的病理生理学使探索不同的药物具有挑战性。胆碱能损伤、tau蛋白过度磷酸化和β-淀粉样蛋白(aβ)聚集是疾病进展中确定的三个主要病理。
3.典型的胆碱能假说认为，大脑中胆碱能神经元的选择性丧失在很大程度上导致了ad的认知障碍，而乙酰胆碱酯酶抑制剂(acheis)可以通过调节乙酰胆碱(ach)的水解来提高乙酰胆碱水平和作用时间。乙酰胆碱酯酶(ache)有两个不同的结合位点：催化活性位点(cas)是位于峡谷底部的底物和抑制剂的结合位点，外围阴离子位点(pas)是位于峡谷入口的酶抑制剂的结合位点。丁酰胆碱酯酶(buche)是一种可以水解ach和其他酰基胆碱的胆碱酯酶，主要存在于周围神经系统。虽然他克林同时抑制ache和buche，但研究表明，多奈哌齐作为一种高选择性的chei，其抑制治疗指数高于他克林，而且buche的抑制可以诱发周围神经系统的负作用。此外，在治疗ad的临床试验中，选择性ache抑制剂的效果优于非选择性抑制剂。同时，tau蛋白假说指出，微管解聚和神经纤维缠结(nfts)的形成主要由糖原合成酶3β(gsk-3β)介导，因此，tau蛋白信号通路上游的gsk-3β已成为新型抗ad疗法开发的一个主要目标。此外，ad的一个标志是在海马区出现老年斑，主要是由β-淀粉样肽(aβ)的细胞外沉积产生的。β-位点app裂解1(bace1)和γ-分泌酶对淀粉样β前体蛋白(app)的依次裂解促成了aβ的形成。目前，通过阻碍bace1的活性来抑制aβ的形成和/或抑制aβ聚集，都被设想为治疗ad的合适策略。


技术实现要素：

4.发明目的：本发明提供一种香豆素类化合物及其制备方法与抗阿尔兹海默病的应用，其目的在于提供一种具有抑制ache、gsk-3β、bace1活性的香豆素衍生物，提供所述新型香豆素类化合物的制备方法，同时还指出香豆素类衍生物在制备治疗阿尔兹海默病药物中的应用。
5.技术方案：
6.一种香豆素类化合物或其药学上可用的盐，所述的衍生物结构通式如式i所示：
7.8.其中：r1为香豆素苯环上的取代基，选自
9.所述苯基和吡啶基包括取代和未取代的苯基和吡啶基；r2为哌啶和苄基之间n上的取代基，r2选自：h或者ch3；n为0或者1；r3为f、ch3、och3、cn、no2、3,4-di-f、h或者替换苯环为噻吩结构。
10.优选的，下列化合物或其在药学上可用的盐，选自：
11.[0012][0013]
一种所述化合物的制备方法，化合物的制备方法包括以下步骤：
[0014]
(1)将化合物1溶于甲苯中，加入氢化钠，冰浴条件搅拌，之后缓慢滴加碳酸二乙
酯，110℃回流，反应得到化合物2；
[0015]
(2)将化合物2溶于无水二氧六环中，加入cs2co3、3-吡啶硼酸和二(三苯基磷)氯化钯，反应得到化合物3；
[0016]
(3)将化合物3溶于丙酮中，加入碳酸钾k2co3和1,3-二溴丙烷，反应得到化合物4；
[0017]
(4)将化合物4溶于丙酮中，滴入吗啉替换步骤(3)中1,3-二溴丙烷的，重复步骤(3)，反应得到化合物zlwq-1；
[0018]
(5)将化合物2代替化合物3溶于丙酮中，重复步骤(3)，反应得到化合物5；
[0019]
(6)将化合物5溶于丙酮，加入哌啶取代基，反应得到化合物6a、6b或者6c；
[0020]
(7)将化合物6a、6b或者6c溶于二氧六环中，加入硼酸或者硼酸酯，重复步骤(2)，反应得到化合物7a、7b、7c、7d、7e、7f或者7g；
[0021]
(8)将化合物6a、7a、7b、7c、7d、7e、7f或者7g溶于乙酸乙酯中，加入hcl-etoac，反应得到目标化合物8a、8b、8c、8d、8e、8f、8g或者8h；
[0022]
(9)将化合物8a、8b、8c、8d、8e、8f、8g或者8h溶于甲醇或者1,2-二氯乙烷中，加入含不同取代基的醛，选取催化剂氰基硼氢化钠或者三乙酰氧基硼氢化钠，反应得到目标化合物zlwq-2、zlwq-3、zlwq-4、zlwq-5、zlwq-6、zlwq-7、zlwq-8、zlwq-9、zlwq-10、zlwq-11、zlwq-12、zlwq-13、zlwq-14、zlwq-15、zlwq-16、zlwq-17、zlwq-18、zlwq-19或者zlwq-20；
[0023]
(10)将化合物5溶于n,n-二甲基甲酰胺dmf中，加入碳酸钾k2co3和4-氨基-1-苄基哌啶，反应得到化合物9；
[0024]
(11)将化合物9溶于二氧六环中，加入硼酸或者硼酸酯，重复步骤(2)，得到最终产物zlwq-21、zlwq-22、zlwq-23、zlwq-24、zlwq-25、zlwq-26或者zlwq-27。
[0025]
优选的，哌啶取代基为1-boc-4-氨基哌啶、4-n-叔丁氧羰基-4-n-甲基氨基哌啶或者4-(boc-氨甲基)哌啶。
[0026]
优选的，硼酸或者硼酸酯为3-吡啶硼酸、4-吡啶硼酸、2-氟-5-吡啶硼酸、n-(5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧苯甲酸-2-基)吡啶-2-基)环丙烷甲酰胺、4-氟吡啶硼酸中的一种。
[0027]
优选的，不同取代基的醛为苯甲醛、2-氟苯甲醛、3-氟苯甲醛、4-氟苯甲醛、3-甲基苯甲醛、4-甲基苯甲醛、3-甲氧基苯甲醛、4-甲氧基苯甲醛、3-氰基苯甲醛、3-硝基苯甲醛、3-噻吩甲醛、3,4-二氟苯甲醛中的一种。
[0028]
一种药物组合物，所述的式i或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的辅料。
[0029]
所述式i添加一种或多种药学上可接受的辅料制成制剂，所述制剂的剂型为胶囊剂、丸剂、片剂、颗粒剂或注射剂。
[0030]
所述化合物或其药学上可用的盐在制备治疗阿尔兹海默症药物中的应用。
[0031]
所述化合物或其药学上可用的盐在制备ache抑制剂、gsk-3β抑制剂、bace1抑制剂中的应用。
[0032]
有益效果：本发明提出的香豆素类化合物具有较低的细胞毒活性，能够选择性的抑制ache的酶活力(与bche相比)和gsk-3β、bace1的酶活力。因此，该类化合物在制备预防或治疗阿尔茨海默症药物中具有重要作用。
附图说明
[0033]
图1为化合物的合成路线图；
[0034]
图2为化合物zlwq-21对ache的抑制作用的lineweaver-burk图；
[0035]
图3为gsk-3β在体外的抑制活性图；
[0036]
图4为bace1的抑制活性图。
具体实施方式
[0037]
下面通过具体实施例对本发明进行说明，但本发明并不局限于此。
[0038]
通过核磁共振(nmr)确定化合物的结构。nmr的测定是使用bruker avance-300/500核磁共振仪，测定的溶剂是dmso-d6，内标为tms。制备方法如图1所示。
[0039]
实施例1 7-br-4-羟基-2h-色烯-2-酮(化合物2)
[0040]
在冰浴条件下，将nah(含量60％，3equiv.)溶于50ml干甲苯中，并将干甲苯溶解后的1-(4-溴-2-羟基苯基)乙酮(1equiv.)混合物缓慢加入上述混合物中。在0℃搅拌30分钟后，逐步滴加碳酸二乙酯(5equiv.)。然后，反应在110℃搅拌下回流20小时。当反应液冷却后，用水淬灭，用2m盐酸调节酸度，直到没有沉淀出现。将得到的混合物抽滤，滤饼用水清洗。收集固体并干燥，得到产物化合物2。浅黄色固体，产率为91％。该产物可直接使用，无需进一步提纯。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ12.71(s,1h),7.73(d,j＝8.4hz,1h),7.68(d,j＝1.9hz,1h),7.53(dd,j＝8.5,1.9hz,1h),5.61(s,1h).esi-ms m/z 241.0[m+h]
+
.
[0041]
实施例2 4-羟基-7-(吡啶-3-基)-2h-色烯-2-酮(化合物3)
[0042]
将原料化合物2(1equiv.)和3-吡啶硼酸(1.2equiv.)溶解在二氧六环/水(4:1)中，cs2co3(3equiv.)和pd(dppf)cl2(0.05％equiv.)添加到上述溶液中。将反应混合物在95℃搅拌12小时。在反应结束后在减压下浓缩。反应粗品经快速柱层析纯化，得到产物化合物3。黄色固体。收率90％。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ9.02(d,j＝2.5hz,1h),8.64(dd,j＝4.8,1.6hz,1h),8.22(dt,j＝8.0,2.0hz,1h),7.92(d,j＝8.2hz,1h),7.80(d,j＝1.7hz,1h),7.75(dd,j＝8.2,1.8hz,1h),7.54(dd,j＝8.0,4.7hz,1h),5.68(s,1h).esi-ms m/z 240.1[m+h]
+
.
[0043]
实施例3 4-(3-溴丙氧基)-7-(吡啶-3-基)-2h-色烯-2-酮(化合物4)将化合物3(1equiv.)溶解在丙酮(30ml)中，添加1,3-二溴丙烷(5equiv.)，添加k2co3(3equiv.)作为催化剂，并在60℃回流下搅拌反应6h，反应后减压浓缩，去除溶剂，并用硅胶柱色谱法纯化以获得白色固体化合物4。收率93％。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ9.04(d,j＝9.4hz,1h),8.65(s,1h),8.44
–
8.19(m,1h),7.96(d,j＝7.8hz,1h),7.83(d,j＝8.0hz,1h),7.77
–
7.65(m,1h),7.57(q,j＝10.6,5.5hz,1h),6.14
–
5.83(m,1h),4.99(s,1h),4.76
–
4.17(m,2h),4.11
–
3.67(m,1h),2.69(s,1h),2.44
–
2.20(m,1h).esi-ms m/z 360.1[m+h]
+
.
[0044]
实施例4 7-溴-4-(3-溴丙氧基)-2h-色烯-2-酮(化合物5)
[0045]
以7-br-4-羟基-2h-色烯-2-酮(化合物2)代替化合物3，其他条件不变，重复实施例3的操作，得到化合物5，白色固体，产率95％。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ7.81(d,j＝8.4hz,1h),7.72(d,j＝1.8hz,1h),7.55(dd,j＝8.6,2.0hz,1h),5.98(s,1h),4.39
–
4.20(m,2h),3.74(t,j＝6.5hz,2h),2.37(p,j＝6.3hz,2h).esi-ms m/z 360.9[m+h]
+
.
[0046]
实施例5(1-(3-((7-溴-2-氧代-2h-色烯-4-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)氨基甲酸
叔丁酯(化合物6a)
[0047][0048]
以化合物5为原料，1-boc-4-氨基哌啶代替1,3-二溴丙烷进行取代，其他条件不变，重复实施例3的操作，得到化合物6a，白色固体，产率81％。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ7.73(dd,j＝5.2,3.3hz,2h),7.57(dd,j＝8.5,1.9hz,1h),6.75(d,j＝7.8hz,1h),5.93(s,1h),4.24(t,j＝6.1hz,2h),3.32(s,4h),2.82(d,j＝11.1hz,2h),2.44(t,j＝6.9hz,1h),1.95(p,j＝9.5hz,4h),1.68(d,j＝12.1hz,2h),1.38(s,9h).esi-ms m/z 481.2[m+h]
+
.
[0049]
实施例6(1-(3-((7-溴-2-氧代-2h-色烯-4-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(化合物6b)
[0050][0051]
以化合物5为原料，4-n-叔丁氧羰基-4-n-甲基氨基哌啶代替1,3-二溴丙烷进行取代，其他条件不变，重复实施例3的操作，得到化合物6b，白色固体，产率82％。esi-ms m/z 495.2[m+h]
+
.
[0052]
实施例7((1-(3-((7-溴-2-氧代-2h-色烯-4-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(化合物6c)
[0053][0054]
以化合物5为原料，4-(boc-氨甲基)哌啶代替1,3-二溴丙烷进行取代，其他条件不变，重复实施例3的操作，得到化合物6c，白色固体，产率85％。esi-ms m/z 495.2[m+h]
+
.
[0055]
实施例8(1-(3-((2-氧代-7-(吡啶-3-基)-2h-色烯-4-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(化合物7a)
[0056][0057]
以化合物6a为原料，其他条件不变，重复实施例2的操作，得到化合物7a。白色固体，产率84％。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ9.02(d,j＝2.6hz,1h),8.64(dd,j＝4.8,1.6hz,1h),8.21(dt,j＝8.1,2.0hz,1h),7.89(d,j＝8.2hz,1h),7.82(d,j＝1.7hz,1h),7.76(dd,j＝8.2,1.8hz,1h),7.54(dd,j＝8.0,4.8hz,1h),6.76(d,j＝7.8hz,1h),5.92(s,1h),4.26(t,j＝6.1hz,2h),3.33(s,3h),2.84(d,j＝11.2hz,2h),2.46(d,j＝7.5hz,2h),1.96(dt,j＝17.5,8.8hz,4h),1.77
–
1.62(m,2h),1.38(s,9h).esi-ms m/z 480.3[m+h]
+
.
[0058]
实施例9(1-(3-((2-氧代-7-(吡啶-4-基)-2h-色烯-4-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(化合物7b)
[0059][0060]
以化合物6a为原料，将3-吡啶硼酸替换为4-吡啶硼酸，其他条件不变，重复实施例2的操作，得到化合物7b。黄色固体，产率84％。esi-ms m/z 480.3[m+h]
+
.
[0061]
实施例10(1-(3-((7-(6-氟吡啶-3-基)-2-氧代-2h-色烯-4-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(化合物7c)
[0062][0063]
以化合物6a为原料，将3-吡啶硼酸替换为2-氟-5-吡啶硼酸，其他条件不变，重复实施例2的操作，得到化合物7c。黄色固体，产率86％。esi-ms m/z498.3[m+h]
+
.
[0064]
实施例11(1-(3-((7-(6-(环丙烷甲酰胺基)吡啶-3-基)-2-氧代-2h-色烯-4-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(化合物7d)
[0065][0066]
以化合物6a为原料，将3-吡啶硼酸替换为n-(5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧苯甲酸-2-基)吡啶-2-基)环丙烷甲酰胺，其他条件不变，重复实施例2的操作，得到化合物7d。黄色固体，产率79％。esi-ms m/z 563.3[m+h]
+
.
[0067]
实施例12((1-(3-((2-氧代-7-(吡啶-3-基)-2h-色烯-4-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(化合物7e)
[0068][0069]
以化合物6c为原料替换化合物2，其他条件不变，重复实施例2的操作，得到化合物7e。黄色固体，产率79％。esi-ms m/z 494.3[m+h]
+
.
[0070]
实施例13(1-(3-((7-(6-氟吡啶-3-基)-2-氧代-2h-色烯-4-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(化合物7f)
[0071][0072]
以化合物6b为原料，将3-吡啶硼酸替换为2-氟-5-吡啶硼酸，其他条件不变，重复实施例2的操作，得到化合物7f。黄色固体，产率88％。esi-ms m/z 512.3[m+h]
+
.esi-ms m/z 512.3[m+h]
+
.
[0073]
实施例14(1-(3-((7-(4-氟苯基)-2-氧代-2h-色烯-4-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(化合物7g)
[0074][0075]
以化合物6b为原料，将3-吡啶硼酸替换为4-氟吡啶硼酸，其他条件不变，重复实施例2的操作，得到化合物7g。黄色固体，产率81％。esi-ms m/z 511.3[m+h]
+
.
[0076]
实施例15 4-(3-(4-氨基哌啶-1-基)丙氧基)-7-溴-2h-色烯-2-酮(化合物8a)
[0077][0078]
在室温下，将4m hcl-etoac(20ml)添加到化合物6a(1equiv.)的etoac(20ml)溶液中。搅拌一小时后抽滤所得溶液，得到产物化合物8a。白色固体，产率86％。esi-ms m/z 381.1[m+h]
+
.
[0079]
实施例16 4-(3-(4-氨基哌啶-1-基)丙氧基)-7-(吡啶-3-基)-2h-色烯-2-酮(化合物8b)
[0080][0081]
在室温下，将4m hcl-etoac(20ml)添加到化合物7b(1equiv.)的etoac(20ml)溶液中。搅拌一小时后抽滤所得溶液，得到产物化合物8b。黄色固体，产率88％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.27(d,j＝2.2hz,1h),8.84(d,j＝5.2hz,1h),8.74
–
8.65(m,2h),8.10
–
8.04(m,1h),7.94(dd,j＝5.3,2.5hz,1h),7.85(dt,j＝8.1,2.6hz,1h),5.98(s,1h),4.36(t,j＝
6.1hz,5h),3.60(d,j＝12.3hz,2h),3.45
–
3.22(m,3h),3.20
–
3.03(m,1h),2.43
–
2.30(m,2h),2.20(d,j＝12.0hz,2h),2.13
–
1.96(m,2h).esi-ms m/z 380.2[m+h]
+
.
[0082]
实施例17 4-(3-(4-氨基哌啶-1-基)丙氧基)-7-(吡啶-4-基)-2h-色烯-2-酮(化合物8c)
[0083][0084]
在室温下，将4m hcl-etoac(20ml)添加到化合物7c(1equiv.)的etoac(20ml)溶液中。搅拌一小时后抽滤所得溶液，得到产物化合物8c。白色固体，产率92％。esi-ms m/z 380.3[m+h]
+
.
[0085]
实施例18 4-(3-(4-氨基哌啶-1-基)丙氧基)-7-(6-氟吡啶-3-基)-2h-色烯-2-酮(化合物8d)
[0086][0087]
在室温下，将4m hcl-etoac(20ml)添加到化合物7d(1equiv.)的etoac(20ml)溶液中。搅拌一小时后抽滤所得溶液，得到产物化合物8d。白色固体，产率91％。esi-ms m/z 398.2[m+h]
+
.
[0088]
实施例19 n-(5-(4-(3-(4-氨基哌啶-1-基)丙氧基)-2-氧-2h-色烯-7-基)吡啶-2-基)环丙烷甲酰胺(化合物8e)
[0089][0090]
在室温下，将4m hcl-etoac(20ml)添加到化合物7e(1equiv.)的etoac(20ml)溶液中。搅拌一小时后抽滤所得溶液，得到产物化合物8e。白色固体，产率84％。esi-ms m/z 463.3[m+h]
+
.
[0091]
实施例20 4-(3-(4-(氨基甲基)哌啶-1-基)丙氧基)-7-(吡啶-3-基)-2h-色烯-2-酮(化合物8f)
[0092][0093]
在室温下，将4m hcl-etoac(20ml)添加到化合物7f(1equiv.)的etoac(20ml)溶液中。搅拌一小时后抽滤所得溶液，得到产物化合物8f。白色固体，产率83％。esi-ms m/z 394.3[m+h]
+
.
[0094]
实施例21 7-(6-氟吡啶-3-基)-4-(3-(4-(甲胺基)哌啶-1-基)丙氧基)-2h-色烯-2-酮(化合物8g)
[0095][0096]
在室温下，将4m hcl-etoac(20ml)添加到化合物7g(1equiv.)的etoac(20ml)溶液中。搅拌一小时后抽滤所得溶液，得到产物化合物8g。白色固体，产率87％。esi-ms m/z 412.3[m+h]
+
.
[0097]
实施例22 7-(4-氟苯基)-4-(3-(4-(甲胺基)哌啶-1-基)丙氧基)-2h-色烯-2-酮(化合物8h)
[0098][0099]
在室温下，将4m hcl-etoac(20ml)添加到化合物7h(1equiv.)的etoac(20ml)溶液中。搅拌一小时后抽滤所得溶液，得到产物化合物8h。白色固体，产率91％。esi-ms m/z 411.3[m+h]
+
.
[0100]
实施例23(4-(3-((1-苄基哌啶-4-基)氨基)丙氧基)-7-溴-2h-色烯-2-酮)(化合物9)
[0101][0102]
在室温下将化合物5(1equiv.)和k2co3(3equiv.)依次添加在dmf(10ml)中，然后添加1-苄基哌啶-4-胺(5equiv.)。将所得溶液在室温下搅拌4小时。用ea(100ml)稀释后，混合物用水(350ml)洗涤，有机相用na2so4干燥，过滤，浓缩，残余物用快速柱色谱纯化，得到目标化合物9。白色固体，产率86％。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ7.85
–
7.66(m,2h),7.57(dd,j＝8.5,1.9hz,1h),7.33
–
7.29(m,2h),7.28(d,j＝2.0hz,2h),7.23(d,j＝6.9hz,1h),5.95(s,1h),4.29(t,j＝6.1hz,2h),3.44(d,j＝9.6hz,4h),2.83(d,j＝9.0hz,2h),2.80
–
2.72(m,
2h),2.67(p,j＝1.9hz,1h),2.33(p,j＝1.9hz,1h),2.04
–
1.89(m,4h),1.83(d,j＝12.3hz,2h).esi-ms m/z 471.2[m+h]
+
.
[0103]
实施例24 4-(3-吗啉丙氧基)-7-(吡啶-3-基)-2h-色烯-2-酮(化合物zlwq-1)
[0104]
以化合物4为原料，用吗啉环代替1,3-二溴丙烷，其他条件不变，重复实施例3的操作，得到化合物zlwq-1。黄色固体化合物zlwq-1，产率65％。1hnmr(400mhz,dmso-d6):δ9.01(d,j＝2.4hz,1h),8.67
–
8.60(m,1h),8.21(dt,j＝8.1,2.1hz,1h),7.89(d,j＝8.2hz,1h),7.82(d,j＝1.8hz,1h),7.76(dd,j＝8.2,1.8hz,1h),7.54(dd,j＝8.0,4.7hz,1h),5.93(s,1h),4.29(t,j＝6.2hz,2h),3.58(t,j＝4.6hz,4h),3.33(s,2h),2.61
–
2.44(m,4h),2.00(p,j＝6.6hz,2h).
13
c nmr(101mhz,dmso-d6):δ165.23,162.14,153.77,150.01,148.44,141.73,135.02,134.22,124.45,124.06,123.15,115.32,114.94,91.15,68.37,66.68(2c),55.06,53.83(2c),25.68.hr-esi-ms:367.1663[m+h]
+
,(calcd for c
21h22
n2o4,367.1652).
[0105]
实施例25 4-(3-(4-(苄基氨基)哌啶-1-基)丙氧基)-7-溴-2h-色烯-2-酮(化合物zlwq-2)
[0106]
将化合物8a(1equiv.)溶于30ml甲醇中，加入所需的苯甲醛(1.2equiv.)，加入冰醋酸4-6滴，将反应环境调至酸性条件，将反应体系加热至75℃，回流搅拌，40分钟后冷却至室温，在冰浴条件下缓慢加入硼氢化钠(3equiv.)的10ml甲醇溶液，搅拌反应6小时，结束后用饱和nahco3水溶液淬灭，减压浓缩除去溶剂，硅胶柱层析纯化得到最终产品化合物zlwq-2。白色固体，产率65％。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ7.77(d,j＝8.5hz,1h),7.73(d,j＝1.9hz,1h),7.65
–
7.59(m,2h),7.57(dd,j＝8.5,1.9hz,1h),7.44
–
7.36(m,3h),5.94(s,1h),4.27(t,j＝6.0hz,2h),4.10(s,2h),3.22(q,j＝7.5hz,6h),2.87(t,j＝7.3hz,1h),2.65(s,1h),2.20
–
2.03(m,4h),1.79(s,2h).
13
c nmr(101mhz,dmso-d6):δ164.97,161.62,153.64,134.18,130.37(2c),129.00(2c),127.82(2c),126.01,125.14,119.87,115.07,91.28,68.33,53.87(2c),51.39(2c),47.76,27.84(2c),25.54.hr-esi-ms:471.1297[m+h]
+
,(calcd for c
24h27
brn2o3,471.1278).
[0107]
实施例26 4-(3-(4-((2-氟苄基)氨基)哌啶-1-基)丙氧基)-7-(吡啶-3-基)-2h-色烯-2-酮(化合物zlwq-3)
[0108]
将化合物8b(1equiv.)溶于30ml甲醇中，加入所需的2-氟苯甲醛(1.2equiv.)，其他条件不变，重复实施例25的实验方法，得到最终产品化合物zlwq-3。白色固体，产率70％。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ9.03(d,j＝2.5hz,1h),8.65(dd,j＝4.8,1.6hz,1h),8.24(dt,j＝8.3,2.0hz,1h),8.01(d,j＝8.2hz,1h),7.87
–
7.79(m,2h),7.77(dd,j＝8.2,1.7hz,1h),7.55(dd,j＝8.0,4.8hz,1h),7.51
–
7.46(m,1h),7.39
–
7.19(m,2h),5.96(s,1h),4.36(t,j＝5.9hz,2h),4.22(s,2h),3.67(s,2h),3.38(d,j＝7.5hz,4h),3.27(s,2h),2.45
–
2.28(m,4h),2.18(d,j＝13.1hz,2h).
13
c nmr(101mhz,dmso-d6):δ165.01,162.10,160.25,153.77,150.02,148.45,141.83,135.13,134.22,133.13,131.88,125.10,125.07,124.51,124.39,123.10,116.06,115.20,114.97,91.46,67.47,53.32,52.52,50.26(2c),40.80,25.77(2c),23.36.hr-esi-ms:488.2359[m+h]
+
,(calcd for c
29h30
fn3o3,488.2344).
[0109]
实施例27 4-(3-(4-((3-氟苄基)氨基)哌啶-1-基)丙氧基)-7-(吡啶-3-基)-2h-chromen-2-one(化合物zlwq-4)
[0110]
将化合物8b(1equiv.)溶于30ml甲醇中，加入所需的3-氟苯甲醛(1.2equiv.)，其他条件不变，重复实施例25的实验方法，得到最终产品zlwq-4。白色固体，产率63％。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ9.04(s,1h),8.66(d,j＝4.7hz,1h),8.23(d,j＝8.0hz,1h),8.00(d,j＝8.3hz,1h),7.85(s,1h),7.77(d,j＝8.4hz,1h),7.61
–
7.53(m,2h),7.49(q,j＝5.5,4.1hz,2h),7.26(t,j＝7.0hz,1h),5.97(s,1h),4.36(q,j＝7.1,6.1hz,2h),4.22(s,2h),3.67(d,j＝12.3hz,2h),3.28
–
3.23(m,2h),3.05(q,j＝7.4,6.7hz,4h),2.40
–
2.32(m,4h),2.17(t,j＝13.1hz,2h).
13
c nmr(101mhz,dmso-d6):δ164.99,163.22,162.09,161.60,153.77,150.00,148.42,141.83,135.16,134.23,131.10,126.84,124.52,124.34,123.08,117.43,116.31,115.20,115.00,91.49,67.42,53.34,52.12,50.23(2c),47.01,25.82(2c),23.35.hr-esi-ms:488.2361[m+h]
+
,(calcd for c
29h30
fn3o3,488.2344).
[0111]
实施例28 4-(3-(4-((4-氟苄基)氨基)哌啶-1-基)丙氧基)-7-(吡啶-3-基)-2h-chromen-2-one(化合物zlwq-5)
[0112]
将化合物8b(1equiv.)溶于30ml甲醇中，加入所需的4-氟苯甲醛(1.2equiv.)，其他条件不变，重复实施例25的实验方法，得到最终产品化合物zlwq-5。白色固体，产率58％。1h nmr(600mhz,dmso-d6):δ9.20(t,j＝3.5hz,1h),8.93
–
8.70(m,1h),8.59(d,j＝8.0hz,1h),8.03(d,j＝8.3hz,1h),7.92(dd,j＝6.6,1.8hz,1h),7.83(dd,j＝8.4,1.9hz,2h),7.78
–
7.72(m,2h),7.33
–
7.15(m,2h),5.98(s,1h),4.36(q,j＝7.9,6.0hz,2h),4.18(q,j＝6.4,5.8hz,2h),3.65(d,j＝12.4hz,2h),3.39(q,j＝7.3hz,2h),3.08(q,j＝11.9hz,2h),2.45
–
2.27(m,4h),2.17(qd,j＝13.2,3.8hz,2h),1.24(t,j＝7.3hz,2h).
13
cnmr(151mhz,dmso-d6):δ164.88,163.62,162.00,153.69,146.31,145.05,140.24,139.09,135.62,133.23,128.71,128.70,125.99,124.53,123.30,115.87,115.73,115.37,115.28,91.75,67.54,53.26,52.55,50.15(2c),46.71,25.73(2c),23.30.hr-esi-ms:488.2362[m+h]
+
,(calcd for c
29h30
fn3o3,488.2344).
[0113]
实施例29 4-(3-(4-((3-甲基苄基)氨基)哌啶-1-基)丙氧基)-7-(吡啶-3-基)-2h-色烯-2-酮(化合物zlwq-6)
[0114]
将化合物8b(1equiv.)溶于30ml甲醇中，加入所需的3-甲基苯甲醛(1.2equiv.)，其他条件不变，重复实施例25的实验方法，得到最终产品化合物zlwq-6。白色固体，产率58％。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ9.03(d,j＝2.4hz,1h),8.65(dd,j＝4.8,1.6hz,1h),8.23(dt,j＝8.3,1.9hz,1h),8.00(d,j＝8.2hz,1h),7.84(d,j＝1.7hz,1h),7.77(dd,j＝8.2,1.8hz,1h),7.55(ddd,j＝8.0,4.7,0.9hz,1h),7.49
–
7.40(m,2h),7.31(t,j＝7.6hz,1h),7.22(d,j＝7.6hz,1h),5.96(s,1h),4.36(t,j＝5.9hz,2h),4.13(s,2h),3.65(s,2h),3.51
–
3.32(m,6h),2.37(s,3h),2.33(s,4h),2.16(s,2h).
13
c nmr(101mhz,dmso-d6):δ163.91,161.00,152.67,148.94,147.36,140.73,137.13,134.00,133.11,131.23,130.08,128.80,126.60,123.39,123.26,121.99,114.09,113.87,90.36,66.38,52.23,51.41,49.12(2c),46.52,24.69(2c),22.26,20.31.hr-esi-ms:484.2609[m+h]
+
,(calcd for c
30h33
n3o3,484.2595).
[0115]
实施例30 4-(3-(4-((4-甲基苄基)氨基)哌啶-1-基)丙氧基)-7-(吡啶-3-基)-2h-色烯-2-酮(化合物zlwq-7)
[0116]
将化合物8b(1equiv.)溶于30ml甲醇中，加入所需的4-甲基苯甲醛(1.2equiv.)，
其他条件不变，重复实施例25的实验方法，得到最终产品化合物zlwq-7。白色固体，产率49％。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ9.11
–
8.96(m,1h),8.68(d,j＝4.8hz,1h),8.30(d,j＝8.0hz,1h),8.01(d,j＝8.2hz,1h),7.86(d,j＝6.0hz,1h),7.78(d,j＝8.6hz,1h),7.61(dd,j＝8.1,4.8hz,1h),7.55(dd,j＝19.0,7.6hz,2h),7.23(d,j＝7.7hz,2h),5.97(s,1h),4.35(t,j＝5.8hz,2h),4.12(t,j＝5.9hz,2h),3.65(d,j＝12.2hz,5h),3.26(p,j＝5.0hz,3h),2.38(t,j＝14.5hz,4h),2.32(s,3h),2.16(q,j＝12.8hz,2h).
13
c nmr(101mhz,dmso-d6):δ164.97,162.07,153.75,149.45,147.92,141.58,138.73,135.75,134.43,130.67(2c),129.58(2c),129.28,124.73,124.39,123.11,115.27,115.03,91.51,66.83,53.29,51.76,50.17(2c),47.30,25.75(2c),23.30,21.26.hr-esi-ms:484.2610[m+h]
+
,(calcd for c
30h33
n3o3,484.2595).
[0117]
实施例31 4-(3-(4-((3-甲氧基苄基)氨基)哌啶-1-基)丙氧基)-7-(吡啶-3-基)-2h-色烯-2-酮(化合物zlwq-8)
[0118]
将化合物8b(1equiv.)溶于30ml甲醇中，加入所需的3-甲氧基苯甲醛(1.2equiv.)，其他条件不变，重复实施例25的实验方法，得到最终产品化合物zlwq-8。白色固体，产率57％。1h nmr(600mhz,dmso-d6):δ9.29(d,j＝3.0hz,1h),8.86(d,j＝5.2hz,1h),8.77
–
8.74(m,1h),8.04(d,j＝8.2hz,1h),8.00
–
7.94(m,2h),7.86(dd,j＝8.3,1.8hz,1h),7.42
–
7.28(m,2h),7.19(d,j＝7.5hz,1h),6.97(dd,j＝8.3,2.5hz,1h),5.99(s,1h),4.36(t,j＝6.0hz,2h),4.16(d,j＝5.8hz,2h),3.79(s,3h),3.66(d,j＝12.2hz,2h),3.38(q,j＝7.3hz,2h),3.05(qd,j＝7.3,4.7hz,4h),2.44
–
2.33(m,4h),2.17(dt,j＝13.2,9.6hz,2h).
13
c nmr(151mhz,dmso-d6):164.81,161.95,159.78,153.68,144.57,143.48,141.05,139.46,136.31,133.77,130.17,126.70,124.56,123.38,122.66,116.11,116.02,115.60,115.01,91.91,67.53,55.73,53.28,51.93,50.18,47.54,45.74,25.78(2c),23.31.hr-esi-ms:500.2554[m+h]
+
,(calcd for c
30h33
n3o4,500.2544).
[0119]
实施例32 4-(3-(4-((4-甲氧基苄基)氨基)哌啶-1-基)丙氧基)-7-(吡啶-3-基)-2h-色烯-2-酮(化合物zlwq-9)
[0120]
将化合物8b(1equiv.)溶于30ml甲醇中，加入所需的4-甲氧基苯甲醛(1.2equiv.)，其他条件不变，重复实施例25的实验方法，得到最终产品化合物zlwq-9。白色固体，产率56％。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ9.04(d,j＝2.5hz,1h),8.66(dd,j＝4.8,1.6hz,1h),8.25(dt,j＝8.1,2.1hz,1h),8.00(d,j＝8.3hz,1h),7.85(d,j＝1.7hz,1h),7.77(dd,j＝8.3,1.8hz,1h),7.57(dd,j＝8.2,4.8hz,3h),6.98(d,j＝8.4hz,2h),5.97(s,1h),4.36(t,j＝5.9hz,2h),4.11(t,j＝5.6hz,2h),3.77(s,3h),3.61
–
3.68(m,2h),3.35
–
3.19(m,4h),3.08(s,2h),2.45
–
2.28(m,4h),2.23
–
2.05(m,2h):
13
c nmr(101mhz,dmso-d6):δ164.98,162.08,160.11,153.75,149.81,148.25,141.72,135.35,134.28,132.28,124.58(2c),124.38,124.13,123.09,115.21,114.97,114.38(2c),91.48,67.46,55.69,53.29,52.53,51.65,50.18,47.05,25.77(2c),23.31.hr-esi-ms:500.2546[m+h]
+
,(calcd for c
30h33
n3o4,500.2544).
[0121]
实施例33 3-(((1-(3-((2-氧代-7-(吡啶-3-基)-2h-色烯-4-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)氨基)甲基)苄腈(化合物zlwq-10)
[0122]
将化合物8b(1equiv.)溶于30ml甲醇中，加入所需的3-氰基苯甲醛(1.2equiv.)，
其他条件不变，重复实施例25的实验方法，得到最终产品化合物zlwq-10。白色固体，产率53％。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ9.03(d,j＝2.4hz,1h),8.65(dd,j＝4.8,1.6hz,1h),8.23(dt,j＝8.1,2.0hz,1h),8.15(s,1h),7.99(d,j＝8.0hz,2h),7.90(dt,j＝7.9,1.5hz,1h),7.84(d,j＝1.7hz,1h),7.76(dd,j＝8.3,1.8hz,1h),7.66(t,j＝7.8hz,1h),7.55(dd,j＝8.0,4.8hz,1h),5.96(s,1h),4.36(t,j＝5.8hz,2h),4.28(s,2h),3.76
–
3.62(m,2h),3.49
–
3.43(m,2h),3.26(d,j＝9.0hz,2h),3.07(d,j＝14.2hz,2h),2.39
–
2.34(m,4h),2.14(d,j＝13.0hz,2h).
13
c nmr(101mhz,dmso-d6):δ165.00,162.09,153.77,150.01,148.42,141.83,135.73,135.13,134.43,134.22,134.07,133.04,130.29,124.51,124.36,123.08,118.95,115.19,114.97,111.90,91.47,67.40,53.37,52.32,50.30(2c),46.87,25.91(2c),23.42.hr-esi-ms:495.2397[m+h]
+
,(calcd for c
30h30
n4o3,495.2391).
[0123]
实施例34 4-(3-(4-((3-硝基苄基)氨基)哌啶-1-基)丙氧基)-7-(吡啶-3-基)-2h-色烯-2-酮(化合物zlwq-11)
[0124]
将化合物8b(1equiv.)溶于30ml甲醇中，加入所需的3-硝基苯甲醛(1.2equiv.)，其他条件不变，重复实施例25的实验方法，得到最终产品化合物zlwq-11。白色固体，产率50％。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ9.03(d,j＝2.4hz,1h),8.65(dd,j＝4.7,1.6hz,1h),8.59(s,1h),8.30
–
8.19(m,2h),8.15(d,j＝7.7hz,1h),8.01(d,j＝8.2hz,1h),7.84(d,j＝1.7hz,1h),7.80
–
7.70(m,2h),7.55(dd,j＝8.0,4.8hz,1h),5.96(s,1h),4.35(d,j＝5.4hz,4h),3.65(s,2h),3.50
–
3.41(m,4h),3.25(s,2h),2.36(s,4h),2.16(s,2h).
13
c nmr(101mhz,dmso-d6):δ165.03,162.11,153.76,150.04,148.45(2c),148.10,141.83,137.66,135.11,134.22,130.51,125.71,124.51,124.38,124.16,123.11,115.19,114.95,91.45,67.48,53.34,52.52,50.29(2c),46.82,25.94(2c),23.43.hr-esi-ms:515.2287[m+h]
+
,(calcd for c
29h30
n4o5,515.2289).
[0125]
实施例35 7-(吡啶-3-基)-4-(3-(4-(噻吩-3-基甲基)氨基)哌啶-1-基)丙氧基)-2h-chromen-2-one(化合物zlwq-12)
[0126]
将化合物8b(1equiv.)溶于30ml甲醇中，加入所需的3-噻吩甲醛(1.2equiv.)，其他条件不变，重复实施例25的实验方法，得到最终产品化合物zlwq-12。白色固体，产率46％。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ9.01(d,j＝2.4hz,1h),8.64(dd,j＝4.8,1.6hz,1h),8.21(dt,j＝8.0,2.0hz,1h),7.95(d,j＝8.2hz,1h),7.82(d,j＝1.7hz,1h),7.80
–
7.72(m,2h),7.60(dd,j＝5.0,2.9hz,1h),7.54(dd,j＝8.0,4.8hz,1h),7.42(dd,j＝5.0,1.3hz,1h),5.93(s,1h),4.31(t,j＝6.0hz,2h),4.15(s,2h),3.21(t,j＝7.2hz,4h),3.02(s,2h),2.87(d,j＝7.2hz,2h),2.19(s,4h),1.92(s,2h).
13
c nmr(101mhz,dmso-d6):δ165.13,162.12,153.75,150.02,148.43,141.77,135.06,134.21,133.44,129.39,127.33,127.15,124.48,124.26,123.14,115.24,114.92,91.28,67.95,53.65(2c),50.94(2c),42.40,26.97(2c),24.87.hr-esi-ms:476.1991[m+h]
+
,(calcd for c
27h29
n3o3s,476.2002).
[0127]
实施例36 4-(3-(4-((3,4-二氟苄基)氨基)哌啶-1-基)丙氧基)-7-(吡啶-3-基)-2h-色烯-2-酮(化合物zlwq-13)
[0128]
将化合物8b(1equiv.)溶于30ml甲醇中，加入所需的3,4-二氟苯甲醛(1.2equiv.)，其他条件不变，重复实施例25的实验方法，得到最终产品化合物zlwq-13。白色固体，产率51％。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ9.02(dd,j＝2.4,0.8hz,1h),8.64(dd,j＝
4.8,1.6hz,1h),8.22(ddd,j＝8.0,2.5,1.6hz,1h),7.94(d,j＝8.2hz,1h),7.82(d,j＝1.7hz,1h),7.77(dd,j＝8.3,1.7hz,1h),7.72(s,1h),7.54(ddd,j＝8.1,4.8,0.9hz,1h),7.49
–
7.38(m,2h),5.94(s,1h),4.30(t,j＝6.0hz,2h),4.10
–
3.96(m,2h),3.22(d,j＝7.4hz,2h),3.16(s,2h),2.89(d,j＝11.5hz,2h),2.75(s,2h),2.08(d,j＝14.3hz,4h),1.74(d,j＝12.0hz,2h).
13
cnmr(101mhz,dmso-d6):δ165.17,162.14,153.76,150.86,150.03,148.44(2c),141.77,135.07,134.22,124.49(2c),124.20,123.16(2c),118.00,117.83,115.27,114.95,91.24,68.10,53.82(2c),51.15(2c),47.26,28.23(2c),25.20.hr-esi-ms:506.2265[m+h]
+
,(calcd for c
29h29
f2n3o3,506.2250).
[0129]
实施例37 4-(3-(4-(苄基氨基)哌啶-1-基)丙氧基)-7-(吡啶-3-基)-2h-chromen-2-one(化合物zlwq-14)
[0130]
将化合物8b(1equiv.)溶于30ml甲醇中，加入所需的苯甲醛(1.2equiv.)，其他条件不变，重复实施例25的实验方法，得到最终产品化合物zlwq-14。白色固体，产率55％。1h nmr(600mhz,dmso-d6):δ9.28(s,1h),8.86(d,j＝5.2hz,1h),8.74(d,j＝8.3hz,1h),8.05(d,j＝8.2hz,1h),8.01
–
7.92(m,2h),7.86(dd,j＝8.3,1.7hz,1h),7.71
–
7.62(m,2h),7.43(q,j＝7.6,6.9hz,3h),6.00(s,1h),4.37(t,j＝5.8hz,3h),4.19(q,j＝6.5,5.8hz,3h),3.67(d,j＝12.0hz,2h),3.45
–
3.29(m,2h),3.12
–
2.99(m,2h),2.43
–
2.35(m,4h),2.18(td,j＝13.0,3.8hz,2h).
13
c nmr(151mhz,dmso-d6):δ164.82,161.95,153.70,144.83,143.73,140.86,139.57,136.24,132.40,130.81,130.68,129.37,129.09(2c),126.61,124.55,123.36,116.00,115.60,91.92,67.52,53.29,52.10,50.22,47.70,45.80,25.80(2c),23.32.hr-esi-ms:470.2447[m+h]
+
,(calcd for c
29h31
n3o3,470.2438).
[0131]
实施例38 4-(3-(4-(苄基氨基)哌啶-1-基)丙氧基)-7-(吡啶-4-基)-2h-chromen-2-one(化合物zlwq-15)
[0132]
将化合物8c(1equiv.)溶于30ml 1,2-二氯乙烷中，加入所需的苯甲醛(1.2equiv.)，加入冰醋酸4-6滴，将反应环境调至酸性条件，40分钟后在冰浴条件下缓慢加入三乙酰氧基硼氢化钠(3equiv.)，搅拌反应6小时，结束后用水淬灭，减压浓缩除去溶剂，硅胶柱层析纯化得到最终产品化合物zlwq-15。该反应在室温下进行。淡黄色固体，产率77％。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ8.69(d,j＝5.2hz,2h),7.93(d,j＝8.2hz,1h),7.87(d,j＝1.7hz,1h),7.86
–
7.79(m,3h),7.56(d,j＝7.2hz,2h),7.44
–
7.32(m,3h),5.95(s,1h),4.28(t,j＝6.1hz,2h),4.03(s,2h),2.84(d,j＝11.4hz,4h),2.56(d,j＝7.2hz,2h),2.04(q,j＝6.5hz,6h),1.67(d,j＝12.1hz,2h).
13
c nmr(101mhz,dmso-d6):δ164.82,161.95,153.70,144.85,143.73,140.84,139.57,136.24,132.40,130.81,130.68,129.37,129.09(2c),126.61,124.55,123.36,116.00,115.60,91.92,67.52,53.29,52.10,50.22(2c),47.70,25.80(2c),23.32.hr-esi-ms:470.2431[m+h]
+
,(calcd for c
29h31
n3o3,470.2438).
[0133]
实施例39 n-(4-(4-(3-(4-(苄基氨基)哌啶-1-基)丙氧基)-2-氧代-2h-色烯-7-基)吡啶-2-基)环丙烷甲酰胺(化合物zlwq-16).
[0134]
用化合物8e代替化合物8c，其他条件不变，重复实施例38的操作，得到最终产物化合物zlwq-16。黄色固体，产率81％。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ10.96(s,1h),8.51
–
8.32(m,2h),7.96(d,j＝8.2hz,1h),7.74
–
7.65(m,2h),7.61(d,j＝7.0hz,2h),7.49(d,j＝5.3hz,1h),7.41(q,j＝6.3hz,3h),5.95(s,1h),4.30(t,j＝6.0hz,2h),4.12(s,2h),3.05(q,j＝
7.3hz,3h),2.83(s,2h),2.23
–
2.14(m,4h),2.06(t,j＝5.9hz,1h),1.96
–
1.80(m,2h),1.20(t,j＝7.3hz,3h),0.84(d,j＝8.1hz,4h).
13
c nmr(101mhz,dmso-d6):δ173.45,164.98,162.02,153.65,153.44,149.28,147.76,142.28(2c),130.45(2c),129.14,129.04(2c),124.41,122.99,117.64,116.12,114.98,111.42,91.59,68.03,53.62(2c),52.51,47.79,45.80,27.23(2c),14.72,8.89,8.25(2c).hr-esi-ms:553.2800[m+h]
+
,(calcd for c
33h36
n4o4,553.2809).
[0135]
实施例40 4-(3-(4-(苄基氨基)哌啶-1-基)丙氧基)-7-(6-氟吡啶-3-基)-2h-色烯-2-酮(化合物zlwq-17)
[0136]
用化合物8d代替化合物8c，其他条件不变，重复实施例38的操作，得到最终产物化合物zlwq-17。白色固体，产率70％。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ8.72(d,j＝2.6hz,1h),8.45(td,j＝8.2,2.7hz,1h),7.98(d,j＝8.3hz,1h),7.86(d,j＝1.7hz,1h),7.76(dd,j＝8.3,1.7hz,1h),7.64
–
7.56(m,2h),7.50
–
7.40(m,3h),7.36(dd,j＝8.6,2.8hz,1h),5.97(s,1h),4.35(t,j＝5.9hz,2h),4.19(s,2h),3.64(s,2h),3.38(t,j＝7.3hz,4h),3.03(s,2h),2.43
–
2.21(m,4h),2.12(s,2h).
13
c nmr(101mhz,dmso-d6):δ164.98,162.83,162.07,153.75,146.56,141.37,141.31,140.59,132.85,130.60(2c),129.40,129.13(2c),124.31,123.04,115.21,115.02,110.51,91.49,67.47,53.41(2c),50.33(2c),47.81,25.75(2c),23.67.hr-esi-ms:488.2339[m+h]
+
,(calcd for c
29h30
fn3o3,488.2344).
[0137]
实施例41 4-(3-(4-((苯氨基)甲基)哌啶-1-基)丙氧基)-7-(吡啶-3-基)-2h-色烯-2-酮(化合物zlwq-18)
[0138]
用化合物8f代替化合物8c，其他条件不变，重复实施例38的操作，得到最终产物化合物zlwq-18。白色固体，产率50％。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ9.04(d,j＝2.5hz,2h),8.66(dd,j＝4.8,1.6hz,1h),8.23(dt,j＝8.1,1.9hz,1h),8.00(d,j＝8.3hz,1h),7.86(d,j＝1.7hz,1h),7.78(dd,j＝8.3,1.8hz,1h),7.60
–
7.53(m,3h),7.51
–
7.41(m,2h),5.99(s,1h),4.36(t,j＝5.9hz,2h),4.17(s,2h),3.61(d,j＝12.0hz,2h),3.42
–
3.35(m,2h),2.98(d,j＝11.3hz,2h),2.88(s,2h),2.40
–
2.21(m,3h),2.11
–
1.91(m,3h),1.54(d,j＝13.5hz,2h).
13
c nmr(101mhz,dmso-d6):δ164.98,162.08,153.79,150.08,148.48,141.89(2c),135.11,134.19,130.64(2c),129.53,129.16(2c),124.50,124.31,123.06,115.17,115.04,91.52,67.39,53.55,52.48,51.60,51.06(2c),31.10,27.24(2c),23.38.hr-esi-ms:484.2613[m+h]
+
,(calcd for c
30h33
n3o3,484.2595).
[0139]
实施例42 4-(3-(4-(苄基(甲基)氨基)哌啶-1-基)丙氧基)-7-(6-氟吡啶-3-基)-2h-色烯-2-酮(化合物zlwq-19)
[0140]
用化合物8g代替化合物8c，其他条件不变，重复实施例38的操作，得到最终产物化合物zlwq-19。白色固体，产率63％。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ8.68(d,j＝2.6hz,1h),8.40(td,j＝8.2,2.7hz,1h),7.88(d,j＝8.2hz,1h),7.81(d,j＝1.7hz,1h),7.74(dd,j＝8.2,1.8hz,1h),7.35
–
7.30(m,1h),7.30(d,j＝2.4hz,1h),7.28(d,j＝2.5hz,3h),7.21(ddd,j＝8.5,5.5,2.4hz,1h),5.93(s,1h),4.27(t,j＝6.1hz,2h),3.51(s,2h),2.94(dd,j＝11.7,3.8hz,2h),2.46(t,j＝7.0hz,2h),2.36(tt,j＝11.5,3.7hz,1h),2.07(s,3h),1.98(dd,j＝8.4,4.8hz,2h),1.93
–
1.84(m,2h),1.75
–
1.64(m,2h),1.50(qd,j＝12.0,3.7hz,2h).
13
cnmr(101mhz,dmso-d6):δ165.22,162.40,162.11,153.74,146.60,141.27,141.18,
140.62,132.87,128.85(2c),128.54(2c),127.07,124.06,123.07,115.37,114.93,110.13,91.14,68.53,60.79,57.86,54.64,53.41(2c),37.78,28.07(2c),26.30.hr-esi-ms:502.2503[m+h]
+
,(calcd for c
30h32
fn3o3,502.2500).
[0141]
实施例43 4-(3-(4-(苄基(甲基)氨基)哌啶-1-基)丙氧基)-7-(4-氟苯基)-8,8a-二氢-2h-色烯-2-酮(化合物zlwq-20).
[0142]
用化合物8h代替化合物8c，其他条件不变，重复实施例38的操作，得到最终产物化合物zlwq-20。白色固体，产率66％。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ7.87(d,j＝3.6hz,1h),7.85(d,j＝4.0hz,1h),7.83(d,j＝2.1hz,1h),7.72
–
7.68(m,1h),7.67(d,j＝1.8hz,1h),7.38
–
7.31(m,2h),7.29(d,j＝6.0hz,4h),7.22(dt,j＝6.1,2.9hz,1h),5.91(s,1h),4.27(t,j＝6.1hz,2h),3.52(s,2h),3.01
–
2.90(m,2h),2.46(t,j＝7.1hz,2h),2.40
–
2.32(m,1h),2.08(s,3h),1.98(p,j＝6.6hz,2h),1.92
–
1.83(m,2h),1.76
–
1.67(m,2h),1.51(tt,j＝12.0,6.0hz,2h).
13
c nmr(101mhz,dmso-d6):δ165.37,162.25,161.80,153.78,143.73,140.64,135.16,129.75,129.67,128.86(2c),128.55(2c),127.08,123.91,122.98,116.56,116.35,114.76,114.57,90.85,68.47,60.79,57.87,54.67,53.43(2c),37.78,28.07(2c),26.32.hr-esi-ms:501.2542[m+h]
+
,(calcd for c
31h33
fn2o3,501.2548).
[0143]
实施例44 7-(吡啶-3-基)-4-(3-(4-((噻吩-3-基甲基)氨基)哌啶-1-基)丙氧基)-2h-色烯-2-酮(化合物zlwq-21)
[0144]
用化合物9代替化合物2，其他条件不变，重复实施例2的实验方法，得到终产物化合物zlwq-21。淡黄色固体，产率79％。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ9.02(d,j＝2.4hz,1h),8.65(dd,j＝4.7,1.5hz,1h),8.22(dt,j＝8.0,2.1hz,1h),7.97(d,j＝8.2hz,1h),7.83(d,j＝1.7hz,1h),7.77(dd,j＝8.3,1.7hz,1h),7.54(dd,j＝8.0,4.7hz,1h),7.33(s,5h),5.95(s,1h),4.37(t,j＝5.9hz,2h),3.62
–
3.54(m,2h),3.15(t,j＝7.5hz,4h),3.04(s,3h),2.26(t,j＝7.1hz,2h),2.08(d,j＝12.1hz,3h),1.73(s,2h).
13
c nmr(101mhz,dmso-d6):δ165.07,162.11,153.75,150.05,148.45,141.82(2c),135.07,134.19,129.65(2c),128.81(2c),127.93,124.49,124.30,123.12,115.22,114.94,91.39,67.35,52.52,51.08,45.91(2c),41.46,25.55(2c),8.94.hr-esi-ms:470.2432[m+h]
+
,(calcd for c
29h31
n3o3,470.2438).
[0145]
实施例45 4-(3-((1-苄基哌啶-4-基)氨基)丙氧基)-7-(吡啶-4-基)-2h-色烯-2-酮(化合物zlwq-22)
[0146]
用化合物9代替化合物2，用4-吡啶硼酸替换3-吡啶硼酸，其他条件不变，重复实施例2的实验方法，得到终产物化合物zlwq-22。白色固体，产率84％。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ8.83
–
8.47(m,2h),7.98(d,j＝8.3hz,1h),7.88(d,j＝1.7hz,1h),7.86
–
7.80(m,1h),7.80(d,j＝1.8hz,2h),7.48
–
6.97(m,5h),5.96(s,1h),4.37(t,j＝6.0hz,2h),3.22(q,j＝7.4hz,2h),3.13(t,j＝7.5hz,4h),2.89(d,j＝10.5hz,2h),2.28(t,j＝7.1hz,2h),2.02(t,j＝14.7hz,4h),1.70(d,j＝12.2hz,2h).
13
c nmr(101mhz,dmso-d6):δ164.94,162.03,153.71,150.91(2c),145.56,141.74,138.40,129.41(2c),128.71(2c),127.60,124.41,123.02,121.94(2c),116.12,115.07,91.71,67.49,61.93,54.72,51.37(2c),41.32,28.16(2c),25.54.hr-esi-ms:470.2426[m+h]
+
,(calcd for c
29h31
n3o3,470.2438)
[0147]
实施例46 4-(3-((1-苄基哌啶-4-基)氨基)丙氧基)-7-(2-氟吡啶-4-基)-2h-色
烯-2-酮(化合物zlwq-23)
[0148]
用化合物9代替化合物2，用2-氟-4-吡啶硼酸替换3-吡啶硼酸，其他条件不变，重复实施例2的实验方法，得到终产物化合物zlwq-23。白色固体，产率78％。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ8.37(d,j＝5.3hz,1h),8.03
–
7.93(m,2h),7.90
–
7.81(m,2h),7.69(s,1h),7.61(s,2h),7.51
–
7.40(m,3h),5.99(s,1h),4.47
–
4.14(m,4h),3.45(s,4h),3.17(s,2h),3.00(s,2h),2.28(q,j＝7.5hz,4h),2.07(d,j＝13.2hz,2h).
13
c nmr(101mhz,dmso-d6):δ164.80,163.38,161.95,153.63,151.60,148.82,140.40,140.36,131.99(2c),129.97,129.22(2c),124.42,123.24,120.46,116.61,115.53,107.89,92.00,67.41,59.19,52.31,49.93(2c),41.74,25.72(2c),25.42.hr-esi-ms:488.2350[m+h]
+
,(calcd for c
29h30
fn3o3,488.2344).
[0149]
实施例47 4-(3-((1-苄基哌啶-4-基)氨基)丙氧基)-7-(6-氟吡啶-3-基)-2h-色烯-2-酮(化合物zlwq-24)
[0150]
用化合物9代替化合物2，用2-氟-5-吡啶硼酸替换3-吡啶硼酸，其他条件不变，重复实施例2的实验方法，得到终产物化合物zlwq-24。白色固体，产率87％。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ8.70(d,j＝2.6hz,1h),8.44(td,j＝8.2,2.7hz,1h),7.96(d,j＝8.3hz,1h),7.84(d,j＝1.7hz,1h),7.76(dd,j＝8.2,1.8hz,1h),7.38
–
7.16(m,6h),5.95(s,1h),4.36(t,j＝5.9hz,2h),3.50(s,2h),3.18(s,4h),2.89(d,j＝9.3hz,2h),2.22(d,j＝7.2hz,2h),2.02(t,j＝6.6hz,4h),1.63(t,j＝12.1hz,2h).
13
c nmr(101mhz,dmso-d6):δ166.75,164.94,162.03,153.72,149.34,147.79,142.32,134.43,132.57,128.91(2c),128.51(2c),124.54,123.10,118.37,116.18,115.17,112.88,91.79,67.36,61.99,56.49,51.37(2c),41.47,28.46(2c),25.58.hr-esi-ms:488.2335[m+h]
+
,(calcd for c
29h30
fn3o3,488.2344).
[0151]
实施例48 4-(3-((1-苄基哌啶-4-基)氨基)丙氧基)-7-(4-氟苯基)-2h-色烯-2-酮(化合物zlwq-25)
[0152]
用化合物9代替化合物2，用4-氟硼酸替换3-吡啶硼酸，其他条件不变，重复实施例2的实验方法，得到终产物化合物zlwq-25。白色固体，产率81％。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ7.93(d,j＝8.3hz,1h),7.90
–
7.82(m,2h),7.72(d,j＝1.7hz,1h),7.69(dd,j＝8.3,1.8hz,1h),7.37(d,j＝2.2hz,2h),7.38
–
7.29(m,4h),7.27(d,j＝6.2hz,1h),5.92(s,1h),4.37(d,j＝6.0hz,2h),3.23(q,j＝7.4hz,3h),3.14(t,j＝7.5hz,4h),2.88(q,j＝7.3hz,2h),2.27(t,j＝7.1hz,2h),2.05(d,j＝12.2hz,3h),1.71(s,2h).
13
c nmr(101mhz,dmso-d6):δ165.19,162.21,161.83,153.75,143.80,136.97,135.12,129.80(2c),129.72(2c),128.74(3c),124.15,122.97,116.58,116.37,114.62,114.54,91.09,68.74,61.87,54.59,51.42(2c),41.37,28.29,25.53(2c).hr-esi-ms:487.2376[m+h]
+
,(calcd for c
30h31
fn2o3,487.2391).
[0153]
实施例49 n-(4-(4-(3-(1-苄基哌啶-4-基)氨基)丙氧基)-2-氧代-2h-铬-7-基)吡啶-2-基)环丙烷甲酰胺(化合物zlwq-26)
[0154]
用化合物9代替化合物2，用n-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-基)环丙烷甲酰胺替换3-吡啶硼酸，其他条件不变，重复实施例2的实验方法，得到终产物化合物zlwq-26。淡黄色固体，产率85％。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ10.96(s,1h),
8.56
–
8.32(m,2h),7.98(d,j＝8.2hz,1h),7.75(d,j＝1.6hz,1h),7.70(dd,j＝8.3,1.7hz,1h),7.51(dd,j＝5.3,1.7hz,1h),7.29(ddq,j＝13.6,9.2,7.0hz,5h),5.98(s,1h),4.36(t,j＝5.9hz,2h),3.49(s,3h),3.15(t,j＝7.5hz,2h),3.12
–
2.98(m,1h),2.93
–
2.79(m,2h),2.22(p,j＝6.4hz,2h),2.12
–
1.89(m,5h),1.59(qd,j＝12.8,12.4,3.9hz,2h),0.97
–
0.72(m,4h).
13
c nmr(101mhz,dmso-d6):δ173.45,164.91,161.99,153.68,153.46,149.29,147.77,142.39,138.52,129.31(2c),128.69(2c),127.52,124.44,123.00,117.66,116.10,115.06,111.46,91.75,67.35,61.98,54.91,51.39(2c),41.51,28.56(2c),25.69,14.72,8.23(2c).hr-esi-ms:553.2792[m+h]
+
,(calcd for c
33h36
n4o4,553.2809).
[0155]
实施例50 n-(4-(4-(3-(1-苄基哌啶-4-基)氨基)丙氧基)-2-氧代-2h-铬-7-基)吡啶-2-基)苯甲酰胺(化合物zlwq-27)
[0156]
用化合物9代替化合物2，用n-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-基)苯甲酰胺替换3-吡啶硼酸，其他条件不变，重复实施例2的实验方法，得到终产物化合物zlwq-27。黄色固体，产率81％。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ10.97(s,1h),8.58(d,j＝1.6hz,1h),8.52(d,j＝5.2hz,1h),8.07(d,j＝1.2hz,1h),8.05(d,j＝1.6hz,1h),8.03(d,j＝8.3hz,1h),7.83(d,j＝1.7hz,1h),7.78(dd,j＝8.2,1.7hz,1h),7.66
–
7.58(m,2h),7.54(dd,j＝8.3,6.8hz,2h),7.33(d,j＝7.0hz,5h),5.99(s,1h),4.37(t,j＝6.0hz,2h),3.63
–
3.42(m,2h),3.26(d,j＝14.8hz,3h),3.21
–
3.09(m,2h),3.02
–
2.81(m,2h),2.23(d,j＝7.5hz,2h),2.00(d,j＝13.1hz,3h),1.63(s,2h).
13
c nmr(101mhz,dmso-d6):δ166.75,164.94,162.03,153.72,153.57,149.34,147.79,142.32,134.43,132.57,129.35,128.91(3c),128.73(2c),128.51(3c),127.57,124.54,123.10,118.37,116.18,115.17,112.88,91.79,67.36,62.06,56.49,51.37(2c),41.47,28.46(2c),25.58.hr-esi-ms:589.2783[m+h]
+
,(calcd for c
36h36
n4o4,589.2809).
[0157]
实施例51：胆碱酯酶抑制活性的评价
[0158]
采用改进的ellman方法测试化合物抗ache活性。在96孔板中，各孔加入140μl pbs缓冲液(0.1m,ph＝8.0)，样品孔中加入20μl待测样品溶液和15μl酶溶液；样品本底对照孔用15μl pbs缓冲液代替15μl酶溶液，其他条件不变；空白对照孔用20μl pbs缓冲液代替20μl待测样品溶液，其他条件不变。完全抑制对照孔用20μl pbs缓冲液配的阳性药代替20μl待测样品溶液，其他条件不变。各孔混合均匀后在4℃保存20min。取出加入10μl dtnb(2mm)和10μlatchi(15mm)，在37℃反应20min后即可在405nm读取吸光度值。按如下公式计算出待测样品的抑制率，使用graphpad prism 8.0确定线性回归参数并计算ic
50
。bche酶活力测定与ache类似。结论：实验证明，本发明所制备的部分化合物能够有效的选择性抑制ache的活性。
[0159]
[0160][0161]aache from electric eel and buche from equine serum were used.bdata are the mean of at least three independent determinations(mean
±
sd).c％selectivity index(si)＝ic
50
(buche)/ic
50
(ache).
[0162]
实施例52：化合物zlwq-21的ache动力学研究
[0163]
采用ellman方法对两种不同浓度(1.00μm和3.00μm)的化合物zlwq-21进行ache的动力学研究。在不同浓度的底物乙酰硫代胆碱(25、12.5、6.25、3.125、1.5625μm)下构建lineweaver-burk倒数图(1/v对1/[s])以获得抑制类型。lineweaver-burk次要地块在获得的斜率构建。通过对化合物zlwq-21在不同浓度乙酰硫代胆碱(atch)下的动力学研究，研究了酶促抑制的机理，并利用二级图计算了化合物zlwq-21的抑制常数。线性lineweaver-burk图(1/v vs.1/s)如图2所示。图2中(a)为在不同浓度的底物(atch)下，化合物zlwq-21对ache的抑制作用的lineweaver-burk图。(b)为计算化合物zlwq-21的稳态抑制常数的二次图。结果表明，随着抑制剂浓度的增加，斜率和截距增加，这表明化合物zlwq-21具有竞争性抑制作用，能够与酶的cas和pas结合。为了进一步研究解离常数(ki)，通过lineweaver-burk的化合物zlwq-21二级图获得(图2b，ki＝2.641μm)。这些结果表明zlwq-21作为竞争性ache抑制剂。
[0164]
实施例54：gsk-3β抑制活性的评价
[0165]
用白色96孔板在测定缓冲液中进行激酶glo测定。将1μl(10μm)的被测化合物
(zlwq-1～27)(先溶解于dmso中，再用激酶缓冲液稀释至所需浓度)和2μl(5ng)的酶加至每个孔，然后添加2μl的含有0.2μg的底物和25μmatp的等比混合物。在室温孵育60分钟后，用5μl的激酶glo试剂停止酶促反应并将剩余的atp消除，仍在室温孵育40分钟后，使用激酶检测试剂将反应生成的adp转化为atp，30分钟后使用多功能酶标仪记录发光值。结论：实验证明，本发明所制备的部分化合物能够有效的抑制gsk-3β的活性(图3)。
[0166]
实施例53：bace-1抑制活性评价
[0167]
采用荧光共振能量转移(fret)方法通过生化分析研究其抑制bace1酶活性的能力。rhbace1(40ng/μl)和肝素溶液(4ng/μl)等体积混合，37℃孵育30min。同时，荧光多肽底物(mca-sevnldaefrk(dpn)rrnh2)用测定缓冲液(0.1m醋酸钠，ph 4.0)稀释至20μm。将50μl rhbace1肝素混合物吸收到96孔板中，加入50μl底物(20μm)和2μl不同浓度的化合物(zlwq-1～27)混合，然后在25℃避光反应60min。分别在320nm的冲击波长和405nm的发射波长下测量吸收值。记录并比较空白和阳性药物的荧光强度，减去空白背景信号，计算化合物的抑制百分比。目标化合物抑制剂的抑制百分比％＝1-(ifi/ifo
×
100％)，其中ifi和ifo分别为空白和样品的荧光强度。使用graphpad prism 8.0确定ic50。结果见图4，图4中(a)为体外bace1的抑制活性。(b)为通过fret实验，zlwq-13对bace1的抑制活性。(c)为通过fret实验，zlwq-21对bace1的抑制活性。结论：实验证明，本发明所制备的部分化合物能够有效的抑制bace1的活性(图4)。
[0168]
实施例54：细胞毒性的评价
[0169]
肝癌hepg2细胞，正常干细胞hl-7702细胞，神经瘤母细胞sh-sy5y被用于细胞毒性评价。选取对数生长期的细胞，向96孔细胞培养板中每孔加入100μl细胞悬液(每孔0.8
×
104个细胞)，培养24小时。每孔加入含有不同浓度待测化合物(zlwq-1～27)的dmem培养液；同时设空白对照组(只加高糖dmem培养液)。培养48小时后，每孔加入20μl的mtt溶液(5mg/ml)，在培养箱继续培养4小时。弃去培养基，每孔加入150μl的dmso溶解，摇床震荡5min使结晶完全溶解。以多功能酶标仪于490nm波长处读取od值，计算细胞的存活率。实验结果表明部分化合物对三种细胞没有明显的毒性。
[0170][0171][0172]aic
50 values are means of at least three independentexperiments(mean
±
sd).
b nd＝not determined.
[0173]
实施例55：体外血脑屏障渗透试验
[0174]
在这项研究中，对bbb(pampa-bbb)(一种普遍使用的被动跨细胞渗透体外模型)进行了完善的平行人工膜渗透测定，以评估所选化合物zlwq-12～13、zlwq-21、他克林和多奈哌齐的脑渗透性。通过将10种商业药物的实验渗透率(pe)与基于该小组过去研究的报告值
进行对比来完成测定验证。我们发现渗透率大于4.7
×
10-6
cm/s的物质可以很好地穿过血脑屏障(cns+)，针对低(cns-)和不确定性提出了pe《3.2和4.7》pe》3.2的阈值(cns
±
)。
[0175]
令人满意的是，结果证明zlwq-12、zlwq-13和zlwq-21可以穿过bbb(pe》4.7
×
10-6cm/s)，如下表所示。
[0176][0177]adata are mean
±
sd of at least three independent experiments in triplicate.
[0178]
通过酶活力测试和细胞毒性实验结果，该类香豆素衍生物可为发现新的ad治疗药物提供理论依据。