一种猫传染性鼻气管炎疫苗及其制备方法和应用

本发明涉及生物制品，尤其涉及一种猫传染性鼻气管炎疫苗及其制备方法和应用。

背景技术：

1、猫传染性鼻气管炎(feline infectious rhinotracheitis,fir)，又称猫病毒性鼻气管炎，是由猫疱疹病毒i型(feline herpesvirus 1,fhv-1)引起的一种急性、高度接触性上呼吸道疾病。fhv-1主要感染猫，也可感染虎、猎豹等猫科动物，对猫的健康构成了巨大威胁。据报道，fhv-1感染造成的呼吸道感染的疾病约占猫所有确诊病毒性上呼吸道感染的50～75％；fhv-1感染猫最常见的症状是结膜炎和鼻气管炎，该病毒还可能导致猫出现舌炎、肺炎、流产、角膜炎、全身感染，或罕见的皮炎。fhv-1感染猫主要是经感觉神经元传入三叉神经节，可引起机体的潜伏感染；由于该病毒的潜伏感染较长，感染的猫长期带毒排毒，给猫传染性鼻气管炎的诊断和防治工作带来极大的困难。

2、疫苗接种是控制和预防传染病最安全、最有效的措施之一。目前，fhv-1减毒活疫苗和灭活病毒疫苗被广泛使用。尽管减毒活疫苗可以提供保护，但通常会对猫产生一些副作用，如打喷嚏、眼部分泌物和体温升高。与减毒活疫苗相比，灭活疫苗可能会在注射部位引起不良反应，尤其是与铝佐剂结合时，可能会在注射部位发生肉瘤。

技术实现思路

1、为了解决现有技术存在的问题，本发明提供一种猫传染性鼻气管炎疫苗及其制备方法和应用。

2、第一方面，本发明提供一种免疫原性组合物，包括：猫传染性鼻气管炎gb蛋白、猫传染性鼻气管炎gc蛋白和猫传染性鼻气管炎gd蛋白。

3、进一步地，所述猫传染性鼻气管炎gb蛋白通过如seq id no.1所示的核苷酸序列编码得到；所述猫传染性鼻气管炎gc蛋白通过如seq id no.2所示的核苷酸序列编码得到；所述猫传染性鼻气管炎gd蛋白通过如seq id no.3所示的核苷酸序列编码得到。

4、进一步地，所述猫传染性鼻气管炎gb蛋白、猫传染性鼻气管炎gc蛋白和猫传染性鼻气管炎gd蛋白的摩尔比为1～5：1～5：1～5。

5、第二方面，本发明提供一种猫传染性鼻气管炎疫苗，包括所述免疫原性组合物。

6、进一步地，所述猫传染性鼻气管炎疫苗中猫传染性鼻气管炎gb蛋白的用量为0.1～1mg/ml；和/或，所述猫传染性鼻气管炎gc蛋白的用量为0.1～1mg/ml；和/或，所述猫传染性鼻气管炎gd蛋白的用量为0.1～1mg/ml。

7、进一步地，还包括佐剂；所述佐剂包括gel02、天然来源佐剂(例如quila、皂甙、蜂胶)、油乳佐剂(例如弗氏佐剂、白油佐剂、isa206、mf-59、佐剂-65、saf系列)、细胞因子佐剂(例如白细胞介素、干扰素、肿瘤坏死因子、集落刺激因子)、微生物来源佐剂(例如脂多糖、胞壁酰二肽、霍乱毒素、cpg免疫调节序列)、脂质体佐剂、纳米佐剂中的一种或多种。

8、进一步地，所述佐剂为gel02；所述免疫原性组合物和所述佐剂的质量比为20:1～5:1。

9、第三方面，本发明提供所述猫传染性鼻气管炎疫苗的制备方法，包括：

10、将如seq id no.1-3所示的核苷酸序列分别构建至载体上，通过昆虫细胞-杆状病毒表达系统进行表达得到猫传染性鼻气管炎gb蛋白、猫传染性鼻气管炎gc蛋白和猫传染性鼻气管炎gd蛋白，配以佐剂制备得到所述猫传染性鼻气管炎疫苗。

11、进一步地，通过gem-pa表面展示系统表达得到猫传染性鼻气管炎gb蛋白、猫传染性鼻气管炎gc蛋白和猫传染性鼻气管炎gd蛋白。

12、进一步地，表达猫传染性鼻气管炎gb蛋白的表达盒为：信号肽+猫传染性鼻气管炎gb蛋白+linker+pa3序列的形式；

13、表达猫传染性鼻气管炎gc蛋白的表达盒为：信号肽+猫传染性鼻气管炎gc蛋白+linker+pa3序列的形式；

14、表达猫传染性鼻气管炎gd蛋白的表达盒为：信号肽+猫传染性鼻气管炎gd蛋白+linker+pa3序列的形式。

15、进一步地，pa3的序列如seq id no.4所示，gp64信号肽序列如seq id no.5所示，linker序列如seq id no.6所示。

16、进一步地，所述昆虫细胞-杆状病毒表达系统中采用的载体为pfastbac1载体。

17、进一步地，所述昆虫细胞-杆状病毒表达系统中转染的细胞为sf9细胞。

18、本发明进一步提供所述免疫原性组合物在制备用于免疫猫传染性鼻气管炎的药物中的应用。

19、本发明进一步提供一种生物材料，所述生物材料包括如seq id no.1-3中任意一种或多种核苷酸序列；所述生物材料为表达盒、载体或者转基因细胞。

20、本发明具备如下有益效果：

21、本发明对gb-pa3、gc-pa3和gd-pa3基因的序列进行优化后表达得到三种猫传染性鼻气管炎蛋白，进而组合这三种蛋白和佐剂得到一种特定的猫传染性鼻气管炎疫苗，该疫苗具备较高的免疫原性，在免疫后可以显著提高il-2、il-4、il-6、il-10、ifn-γ和tnf-α细胞因子的水平，在治疗或预防猫传染性鼻气管炎的领域具有重要意义。

技术特征：

1.一种免疫原性组合物，其特征在于，包括：猫传染性鼻气管炎gb蛋白、猫传染性鼻气管炎gc蛋白和猫传染性鼻气管炎gd蛋白。

2.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述猫传染性鼻气管炎gb蛋白通过如seq id no.1所示的核苷酸序列编码得到；和/或，所述猫传染性鼻气管炎gc蛋白通过如seq id no.2所示的核苷酸序列编码得到；和/或，所述猫传染性鼻气管炎gd蛋白通过如seq id no.3所示的核苷酸序列编码得到。

3.根据权利要求1或2所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述猫传染性鼻气管炎gb蛋白、猫传染性鼻气管炎gc蛋白和猫传染性鼻气管炎gd蛋白的摩尔比为1～5：1～5：1～5。

4.一种猫传染性鼻气管炎疫苗，其特征在于，包括权利要求1-3任一项所述的免疫原性组合物。

5.根据权利要求4所述的猫传染性鼻气管炎疫苗，其特征在于，所述猫传染性鼻气管炎疫苗中猫传染性鼻气管炎gb蛋白的用量为0.1～1mg/ml；和/或，所述猫传染性鼻气管炎gc蛋白的用量为0.1～1mg/ml；和/或，所述猫传染性鼻气管炎gd蛋白的用量为0.1～1mg/ml。

6.根据权利要求1所述的猫传染性鼻气管炎疫苗，其特征在于，还包括佐剂；所述佐剂包括gel02、天然来源佐剂、油乳佐剂、细胞因子佐剂、微生物来源佐剂、脂质体佐剂、纳米佐剂中的一种或多种。

7.根据权利要求6所述的猫传染性鼻气管炎疫苗，其特征在于，所述佐剂为gel02；所述免疫原性组合物和所述佐剂的体积比为20:1～5:1。

8.权利要求4-7任一项所述猫传染性鼻气管炎疫苗的制备方法，其特征在于，包括：

9.权利要求1-3任一项所述的免疫原性组合物在制备用于免疫猫传染性鼻气管炎的药物中的应用。

10.一种生物材料，其特征在于，所述生物材料包括如seq id no.1-3中任意一种或多种核苷酸序列；所述生物材料为表达盒、载体或者转基因细胞。

技术总结
本发明涉及生物制品技术领域，尤其涉及一种猫传染性鼻气管炎疫苗及其制备方法和应用。所述猫传染性鼻气管炎疫苗包括免疫原性组合物，所述免疫原性组合物包括：猫传染性鼻气管炎gB蛋白、猫传染性鼻气管炎gC蛋白和猫传染性鼻气管炎gD蛋白。本发明通过将gB‑PA3、gC‑PA3、gD‑PA3基因构建至质粒中，经过表达得到gB、gC和gD蛋白，配以佐剂得到猫传染性鼻气管炎疫苗。本发明提供的猫传染性鼻气管炎疫免疫动物后能刺激机体产生良好的体液和细胞免疫反应，具有免疫原性好和安全性高等优势。

技术研发人员：王化磊,焦翠翠,夏振强,金宏丽,张海丽,李媛媛,黄培,张梦瑶,石晶,卢继龙,刘迪,戴佳昕,龚志远,陈宪平
受保护的技术使用者：吉林大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12