用于治疗由于ND4突变造成的莱伯氏遗传性视神经病变的组合物和方法与流程

本发明涉及一种编码线粒体蛋白的重组核酸及其相关的药物组合物，以及用其治疗眼科疾病(如莱伯氏遗传性视神经病变)的用途。

背景技术：

1、莱伯氏遗传性视神经病变(leber’s hereditary optic neuropathy,lhon)是一种线粒体遗传(由母亲传给后代)的视网膜神经节细胞(rgc)及其轴突变性，其导致急性或亚急性中心视力丧失；这主要影响年轻的成年男性。lhon仅通过母亲传播，因为其主要是由于线粒体(而不是细胞核)基因组中的突变所致，并且仅卵子将线粒体贡献给胚胎。lhon通常是由于三种致病性线粒体dna(mtdna)点突变之一所致。这些突变分别在线粒体中的氧化磷酸化链的复合体i的nadh脱氢酶亚基-4蛋白(nd4)、nadh脱氢酶亚基-1蛋白(nd1)和nadh脱氢酶亚基-6蛋白(nd6)亚基基因中的核苷酸位置11778g至a(g11778a)、3460g至a(g3460a)和14484t至c(t14484c)处。每种突变都被认为有永久性视力丧失的重大风险。其通常在数周至数月内进展而没有疼痛，直到双眼视力恶化至0.1以下，这严重影响到患者的生活质量。两种lhon突变体g3460a和t14484c导致患者血小板分离的线粒体nadh脱氢酶活性降低80％。百分之九十的中国lhon患者携带g11778a突变。g11778a突变将nd4蛋白中的精氨酸变成组氨酸，导致lhon患者的功能障碍和视神经损伤。有必要开发转染效率和治疗功效更高的治疗lhon的组合物和方法。

技术实现思路

1、本文公开了一种重组核酸，包含(由5’端至3’端依次排列)线粒体靶向序列和线粒体蛋白编码序列；可选地，所述线粒体编码蛋白编码nd4蛋白；可选地，所述nd4蛋白包含与seq id no:160至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列。

2、在一些实施方案中，所述的重组核酸包含与seq id no:180和174-176所示的任一条序列至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。在一些实施方案中，所述的重组核酸包含与seq id no:180至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。在一些实施方案中，所述的重组核酸包含seq id no:180所示的序列。

3、在一些实施方案中，所述的重组核酸包括kozak序列，所述kozak序列置于所述线粒体靶向序列的5’端前；可选地，所述kozak序列为seq id no:171；可选地，所述kozak序列与所述线粒体靶向序列之间无多余的核苷酸。

4、在一些实施方案中，所述的重组核酸包括内含子序列；可选地，所述内含子序列置于所述线粒体靶向序列的5’端前；可选地，所述内含子序列置于所述kozak序列的5’端前；可选地，所述内含子序列包含与seq id no:170所示的序列至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。

5、在一些实施方案中，所述的重组核酸包括启动子序列；可选地，所述启动子序列置于所述线粒体靶向序列、所述kozak序列、和/或所述内含子序列的5’端前；可选地，所述启动子序列包含与seq id no:169所示的序列至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。

6、在一些实施方案中，所述的重组核酸包括3’utr序列；可选地，所述3’utr序列置于所述线粒体蛋白编码序列的3’端后；可选地，所述3’utr序列包含与seq id no:13所示的序列至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。

7、在一些实施方案中，所述的重组核酸包括聚腺苷酸尾序列；可选地，所述聚腺苷酸尾序列置于所述线粒体蛋白编码序列和/或所述3’utr序列的3’端后；可选地，所述聚腺苷酸尾序列包含与seq id no:172或173所示的序列至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列；可选地，所述聚腺苷酸尾序列包含与seq idno:173所示的序列至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。

8、在一些实施方案中，所述3’utr序列和所述聚腺苷酸尾序列之间包含与seq idno:185所示的间隔序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％相同的序列。

9、在一些实施方案中，所述线粒体靶向序列包含与seq id no:1所示的序列至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。

10、在一些实施方案中，所述线粒体蛋白编码序列包含与seq id no:6所示的序列至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。

11、在一些实施方案中，所述的重组核酸包括第一末端反向重复(itr)序列和第二itr序列。在一些实施方案中，所述第一itr序列包含与seq id no:178所示的序列至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。在一些实施方案中，所述第二itr序列包含与seq id no:179所示的序列至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。

12、本文公开了一种重组核酸，包含(由5’端至3’端依次排列)：线粒体靶向序列、线粒体蛋白编码序列、3’utr序列、聚腺苷酸尾序列；其中，所述聚腺苷酸尾序列包含与seq idno:173所示的序列至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。

13、在一些实施方案中，所述3’utr序列包含与seq id no:13所示的序列至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。

14、在一些实施方案中，由所述重组核酸转录产生的包含所述线粒体蛋白编码序列的mrna的表达量比缺乏所述聚腺苷酸尾序列的对照重组核酸的mrna的表达量高；优选地，比所述对照重组核酸的mrna的表达量高至少10％、至少15％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少100％、至少150％、至少200％、或至少300％。在一些实施方案中，所述对照重组核酸在所述聚腺苷酸尾序列的位置上由包含seq id no:172的序列取代；优选地，所述重组核酸转录产生的mrna的表达量比所述对照重组核酸产生的mrna的表达量高至少10％、至少15％、或至少20％。

15、在一些实施方案中，由所述重组核酸翻译产生的所述线粒体蛋白的表达量比缺乏所述聚腺苷酸尾序列的对照重组核酸的所述线粒体蛋白的表达量高；优选地，比所述对照重组核酸的所述线粒体蛋白的表达量高至少10％、至少15％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少100％、至少150％、至少200％、或至少300％。在一些实施方案中，所述对照重组核酸在所述聚腺苷酸尾序列的位置上由包含seq id no:172的序列取代；优选地，所述重组核酸翻译产生的所述线粒体蛋白的表达量比所述对照重组核酸产生的所述线粒体蛋白的表达量高至少10％、至少15％、或至少20％。

16、在一些实施方案中，所述聚腺苷酸尾序列的长度不多于122个碱基对、不多于125个碱基对、不多于130个碱基对、不多于140个碱基对、不多于150个碱基对、不多于160个碱基对、不多于170个碱基对、不多于180个碱基对、不多于190个碱基对、或不多于200个碱基对。

17、在一些实施方案中，所述的重组核酸包括kozak序列，所述kozak序列置于所述线粒体靶向序列的5’端前；可选地，所述kozak序列为seq id no:171；可选地，所述kozak序列与所述线粒体靶向序列之间无多余的核苷酸。

18、在一些实施方案中，所述3’utr序列和所述聚腺苷酸尾序列之间包含与seq idno:185所示的间隔序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％相同的序列。

19、本文公开了一种重组核酸，包括(由5’端至3’端依次排列)：kozak序列、线粒体靶向序列、线粒体蛋白编码序列、3’utr序列，其特征在于：所述kozak序列为seq id no:171；所述3’utr序列包含与seq id no:13所示的序列至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列；所述kozak序列与所述线粒体靶向序列之间无多余的核苷酸。

20、在一些实施方案中，所述的重组核酸包括聚腺苷酸尾序列，所述聚腺苷酸尾序列包含与seq id no:172或173所示的序列至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。

21、在一些实施方案中，所述的重组核酸包括内含子序列；可选地，所述内含子序列置于所述kozak序列的5’端前；可选地，所述内含子序列包含与seq id no:170所示的序列至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。

22、在一些实施方案中，所述的重组核酸包括启动子序列；可选地，所述启动子序列包含与seq id no:169所示的序列至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。在一些实施方案中，所述启动子序列置于所述内含子序列的5’端前。

23、本文公开了一种重组核酸，包括(由5’端至3’端依次排列)：启动子序列、内含子序列、kozak序列、线粒体靶向序列、线粒体蛋白编码序列；所述内含子序列包含与seq id no:170所示的序列至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列；可选的，所述序列还包括3’utr序列；可选的，所述序列还包括聚腺苷酸尾序列。

24、在一些实施方案中，所述的重组核酸还包括第一末端反向重复(itr)序列和第二itr序列。在一些实施方案中，所述第一itr序列包含与seq id no:178所示的序列至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。在一些实施方案中，所述第二itr序列包含与seq id no:179所示的序列至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。

25、在一些实施方案中，所述线粒体蛋白编码序列与所述3’utr序列之间无多余的核苷酸。

26、在一些实施方案中，所述线粒体靶向序列包含与seq id no:1所示的序列至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。

27、在一些实施方案中，所述线粒体蛋白编码序列包含与seq id no:6所示的序列至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。

28、在一些实施方案中，所述线粒体靶向序列与所述线粒体蛋白编码序列之间无多余的核苷酸。

29、在一些实施方案中，所述的重组核酸包含(由5’端至3’端依次排列)：第一itr序列、启动子序列、内含子序列、kozak序列、线粒体靶向序列、线粒体蛋白编码序列、3’utr序列、聚腺苷酸尾序列，第二itr序列；优选地，所述第一itr序列包含与seq id no:178所示的序列至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列，所述启动子序列包含与seq id no:169所示的序列至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列，所述内含子序列包含与seq id no:170所示的序列至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列，所述kozak序列为seq id no:171，所述线粒体靶向序列包含与seq id no:1所示的序列至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列，所述线粒体蛋白编码序列包含与seq id no:6所示的序列至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列，所述3’utr序列包含与seq id no:13所示的序列至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列，所述聚腺苷酸尾序列包含与seq id no:173所示的序列至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列，所述第二itr序列包含与seq id no:179所示的序列至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。

30、在一些实施方案中，所述的重组核酸包含(由5’端至3’端依次排列)：第一itr序列、启动子序列、内含子序列、kozak序列、线粒体靶向序列、线粒体蛋白编码序列、3’utr序列、聚腺苷酸尾序列，第二itr序列；优选地，所述第一itr序列包含与seq id no:178所示的序列至少99％、至少99.5％或100％相同的序列，所述启动子序列包含与seq id no:169所示的序列至少99％、至少99.5％或100％相同的序列，所述内含子序列包含与seq id no:170所示的序列至少99％、至少99.5％或100％相同的序列，所述kozak序列为seq id no:171，所述线粒体靶向序列包含与seq id no:1所示的序列至少99％、至少99.5％或100％相同的序列，所述线粒体蛋白编码序列包含与seq id no:6所示的序列至少99％、至少99.5％或100％相同的序列，所述3’utr序列包含与seq id no:13所示的序列至少99％、至少99.5％或100％相同的序列，所述聚腺苷酸尾序列包含与seq id no:173所示的序列至少99％、至少99.5％或100％相同的序列，所述第二itr序列包含与seq id no:179所示的序列至少99％、至少99.5％或100％相同的序列。

31、在一些实施方案中，所述的重组核酸包含(由5’端至3’端依次排列)：第一itr序列、启动子序列、内含子序列、kozak序列、线粒体靶向序列、线粒体蛋白编码序列、3’utr序列、聚腺苷酸尾序列、第二itr序列；优选地，所述第一itr序列包含seq id no:178所示的序列，所述启动子序列包含seq id no:169所示的序列，所述内含子序列包含seq id no:170所示的序列，所述kozak序列为seq id no:171，所述线粒体靶向序列包含seq id no:1所示的序列，所述线粒体蛋白编码序列包含seq id no:6所示的序列，所述3’utr序列包含seqid no:13所示的序列，所述聚腺苷酸尾序列包含seq id no:173所示的序列，所述第二itr序列包含seq id no:179所示的序列。

32、在一些实施方案中，所述的重组核酸包含与seq id no:174-176、180所示的任一条序列至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。在一些实施方案中，所述的重组核酸包含与seq id no:180至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。在一些实施方案中，所述的重组核酸包含seq id no:180的序列。

33、本文公开了一种病毒载体，其包含本文所述的一种重组核酸。在一些实施方案中，所述病毒载体是重组腺相关病毒(raav)载体。在一些实施方案中，所述raav载体是raav2载体。

34、本文公开了一种药物组合物，其包含本文所述的一种重组核酸。本文公开了一种药物组合物，其包含本文所述的一种病毒载体。本文公开了一种药物组合物，其包含本文所述的一种重组腺相关病毒(raav)载体。

35、本文公开了一种药物组合物，其包含本文所述的一种病毒。在一些实施方案中，所述的病毒是一种腺相关病毒(aav)。在一些实施方案中，所述病毒包含本文所述的一种重组核酸。

36、在一些实施方案中，所述的药物组合物，其进一步包含其药学上可接受的赋形剂。在一些实施方案中，所述药学上可接受的赋形剂包括磷酸盐缓冲盐水(pbs)、α,α-海藻糖脱水物、l-组氨酸盐酸盐一水合物、聚山梨酯20、nacl、nah2po4、na2hpo4、kh2po4、k2hpo4、泊洛沙姆188或其任意组合。在一些实施方案中，所述药学上可接受的赋形剂选自于磷酸盐缓冲盐水(pbs)、α,α-海藻糖脱水物、l-组氨酸盐酸盐一水合物、聚山梨酯20、nacl、nah2po4、na2hpo4、kh2po4、k2hpo4、泊洛沙姆188或其任意组合。在一些实施方案中，所述药学上可接受的赋形剂包括泊洛沙姆188。在一些实施方案中，所述药学上可接受的赋形剂包含0.0001％-0.01％泊洛沙姆188。在一些实施方案中，所述药学上可接受的赋形剂包含0.001％泊洛沙姆188。在一些实施方案中，所述药学上可接受的赋形剂还包含一种或多种盐。在一些实施方案中，所述一种或多种盐包括nacl、na2hpo4和kh2po4。在一些实施方案中，所述药物组合物的特征在于，a)所述nacl的浓度为5-15mg/ml；优选的，所述nacl的浓度为9mg/ml；b)所述kh2po4的浓度为0.1-0.5mg/ml；优选的，所述kh2po4的浓度为0.144mg/ml；和/或c)所述na2hpo4的浓度为0.5-1mg/ml；优选的，所述na2hpo4的浓度为0.795mg/ml。在一些实施方案中，所述药物组合物的ph为7.2-7.4。在一些实施方案中，所述药物组合物的ph为7.3。

37、在一些实施方案中，所述药物组合物的病毒滴度为至少1.0×1010vg/ml、至少3.0×1010vg/ml、至少6.0×1010vg/ml。在一些实施方案中，所述药物组合物的病毒滴度为至少9.0×1010vg/ml。

38、在一些实施方案中，当所述药物组合物经过五个冷冻/解冻循环后，与所述五个冷冻/解冻循环之前的病毒效价相比，所述药物组合物保留了至少60％的病毒滴度。

39、本文公开了一种根据本文所述的药物组合物在制备用于治疗眼部疾病的药物中的用途。

40、本文公开了一种治疗眼部疾病的方法，包含向患者施用有效剂量的根据本文所述的药物组合物。

41、在一些实施方案中，所述眼部疾病是莱伯氏遗传性视神经病变(lhon)。在一些实施方案中，通过眼内或玻璃体内注射来施用所述药物组合物。在一些实施方案中，所述药物组合物通过玻璃体内注射给药。在一些实施方案中，在每个眼中施用0.01-0.1ml的所述药物组合物。在一些实施方案中，在每个眼中施用0.045-0.055ml的所述药物组合物。在一些实施方案中，在每个眼中施用至少1.5×109vg剂量的腺相关病毒；优选地，施用至少3.0×109vg剂量的腺相关病毒。在一些实施方案中，在每个眼中施用至少4.5×109vg剂量的腺相关病毒。

42、在一些实施方案中，所述的用途或方法包括对患者施用皮质类固醇。在一些实施方案中，所述皮质类固醇包含泼尼松或甲基泼尼松。在一些实施方案中，所述皮质类固醇为泼尼松。在一些实施方案中，在施用所述药物组合物之前大约2天开始施用所述皮质类固醇。在一些实施方案中，口服所述皮质类固醇。在一些实施方案中，在开始施用所述皮质类固醇后，持续施用大约28天。在一些实施方案中，在开始施用所述类固醇后，每天施用，并且每次持续一周施用后减少施用剂量。在一些实施方案中，所述皮质类固醇的用量为：在开始施用时，每日给药40mg，持续一周，然后每日给药30mg，持续一周，然后每日给药20mg，持续一周，然后每日给药10mg，持续一周。

43、在一些实施方案中，所述的用途或方法包括对患者施用磷酸肌酸钠。在一些实施方案中，所述磷酸肌酸钠是通过静脉注射给药的。在一些实施方案中，与没有施用含有所述重组核酸的药物组合物相比，施用所述药物组合物产生更高的平均视力恢复水平。

44、另一方面，本文公开了用于治疗lhon的重组核酸、药物组合物和方法。

45、一方面，本文公开了一种重组核酸，其包含：线粒体靶向序列；线粒体蛋白编码序列，其包含与选自由seq id no:7、8、10和12组成的组的序列具有至少99％同一性的序列；和3’utr核酸序列。

46、在一些情况下，所述线粒体靶向序列编码多肽，所述多肽包含与选自由seq idno:129-159组成的组的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的肽序列。在一些情况下，所述线粒体靶向序列包含与seq id no:2中列出的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。在一些情况下，所述线粒体靶向序列包含与seq id no:3中列出的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。在一些情况下，所述线粒体靶向序列包含与seq id no:4中列出的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。在一些情况下，所述线粒体靶向序列包含与seq id no:5中列出的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。

47、在一些情况下，所述线粒体蛋白编码序列包含与seq id no:7或8中列出的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。在一些情况下，所述线粒体蛋白编码序列包含与seq id no:10中列出的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。在一些情况下，所述线粒体蛋白编码序列包含与seq idno:12中列出的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。

48、在一些情况下，所述3’utr核酸序列包含与选自由seq id no:111-125组成的组的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。在一些情况下，所述3’utr核酸序列包含与seq id no:13或seq id no:14中列出的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。

49、在一些情况下，所述重组核酸包含与选自由seq id no:17-20、23-24、27-28、31-34、37-38、41-42、45-48、51-52、55-56、59-62、65-66、69-70、73-76、79-80和83-84组成的组的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。

50、另一方面，本文公开了一种重组核酸，其包含：线粒体靶向序列，其包含与选自由seq id no:2、3、4和5组成的组的序列具有至少90％同一性的序列；线粒体蛋白编码序列，其中所述线粒体蛋白编码序列编码包含线粒体蛋白的多肽；和3’utr核酸序列。

51、在一些情况下，所述线粒体靶向序列包含与seq id no:2中列出的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。在一些情况下，所述线粒体靶向序列包含与seq id no:3中列出的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。在一些情况下，所述线粒体靶向序列包含与seq id no:4中列出的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。在一些情况下，所述线粒体靶向序列包含与seq id no:5中列出的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。

52、在一些情况下，所述线粒体蛋白选自由以下组成的组：nadh脱氢酶4(nd4)、nadh脱氢酶6(nd6)、nadh脱氢酶1(nd1)及其变体。在一些情况下，所述线粒体蛋白包括nadh脱氢酶4(nd4)或其变体。在一些情况下，所述线粒体蛋白包含与seq id no:160中列出的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的肽序列。在一些情况下，所述线粒体蛋白编码序列包含与seq id no:6、7或8中列出的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。在一些情况下，所述线粒体蛋白包括nadh脱氢酶6(nd6)或其变体。在一些情况下，所述线粒体蛋白包含与seq id no:161中列出的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。在一些情况下，所述线粒体蛋白编码序列包含与seq id no:9或10中列出的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。在一些情况下，所述线粒体蛋白包括nadh脱氢酶1(nd1)或其变体。在一些情况下，所述线粒体蛋白包含与seq id no:162中列出的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。在一些情况下，所述线粒体蛋白编码序列包含与seq id no:11或12中列出的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。

53、在一些情况下，所述3’utr核酸序列位于所述线粒体靶向序列的3’。在一些情况下，所述3’utr核酸序列包含选自由以下组成的组的序列：hsaco2、hsatp5b、hsak2、hsaldh2、hscox10、hsuqcrfs1、hsndufv1、hsndufv2、hssod2、hscox6c、hsirp1、hsmrps12、hsatp5j2、rnsod2和hsoxa1l。在一些情况下，所述3’utr核酸序列包含与选自由seq id no:111-125组成的组的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。在一些情况下，所述3’utr核酸序列包含与seq id no:13或seq id no:14中列出的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。

54、在一些情况下，所述线粒体靶向序列位于所述3’utr核酸序列的5’。在一些情况下，所述线粒体靶向序列位于所述线粒体靶向序列的3’。

55、在一些情况下，所述重组核酸包含与选自由seq id no:29-84组成的组的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。

56、另一方面，本文公开了一种重组核酸，其包含：线粒体靶向序列；线粒体蛋白编码序列，其包含与选自由seq id no:7、8、10和12组成的组的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列；和3’utr核酸序列。

57、在一些情况下，所述线粒体靶向序列包含编码选自由以下组成的组的多肽的序列：hscox10、hscox8、scrpm2、lcsirt5、tbndus7、ncqcr2、hsatp5g2、hslactb、spilv1、gmcox2、cratp6、hsopa1、hssdhd、hsadck3、osp0644b06.24-2、粗糙脉孢菌(neurosporacrassa)atp9(ncatp9)、hsghitm、hsndufab1、hsatp5g3、cratp6_hsadck3、ncatp9_ncatp9、zmloc100282174、ncatp9_zmloc100282174_spilv1_ncatp9、zmloc100282174_hsadck3_cratp6_hsatp5g3、zmloc100282174_hsadck3_hsatp5g3、ncatp9_zmloc100282174、hsadck3_zmloc100282174_cratp6_hsatp5g3、cratp6_hsadck3_zmloc100282174_hsatp5g3、hsadck3_zmloc100282174、hsadck3_zmloc100282174_cratp6、ncatp9_zmloc100282174_spilv1_gnfp_ncatp9和ncatp9_zmloc100282174_spilv1_lcsirt5_osp0644b06.24-2_hsatp5g2_ncatp9。在一些情况下，所述线粒体靶向序列编码多肽，所述多肽包含与选自由seq id no:129-159组成的组的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的肽序列。在一些情况下，所述线粒体靶向序列包含与seqid no:2或3中列出的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。在一些情况下，所述线粒体靶向序列包含与seq id no:4中列出的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。在一些情况下，所述线粒体靶向序列包含与seq id no:5中列出的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。

58、在一些情况下，所述线粒体蛋白编码序列包含与seq id no:7或8中列出的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。在一些情况下，所述线粒体蛋白编码序列包含与seq id no:10中列出的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。在一些情况下，所述线粒体蛋白编码序列包含与seq idno:12中列出的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。

59、在一些情况下，所述3’utr核酸序列位于所述线粒体靶向序列的3’。在一些情况下，所述3’utr核酸序列包含选自由以下组成的组的序列：hsaco2、hsatp5b、hsak2、hsaldh2、hscox10、hsuqcrfs1、hsndufv1、hsndufv2、hssod2、hscox6c、hsirp1、hsmrps12、hsatp5j2、rnsod2和hsoxa1l。在一些情况下，所述3’utr核酸序列包含与选自由seq id no:111-125组成的组的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。在一些情况下，所述3’utr核酸序列包含与seq id no:13或seq id no:14中列出的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。

60、在一些情况下，所述线粒体靶向序列位于所述3’utr核酸序列的5’。在一些情况下，所述线粒体靶向序列位于所述线粒体靶向序列的3’。

61、在一些情况下，所述重组核酸包含与选自由seq id no:17-20、23-24、27-28、31-34、37-38、41-42、45-48、51-52、55-56、59-62、65-66、69-70、73-76、79-80和83-84组成的组的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。

62、另一方面，本文公开了一种重组核酸，其包含与选自由seq id no:2、3和4组成的组的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的线粒体靶向序列。在一些情况下，所述线粒体靶向序列包含与seq id no:2中列出的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。在一些情况下，所述线粒体靶向序列包含与seq id no:3中列出的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。在一些情况下，所述线粒体靶向序列包含与seq id no:4中列出的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。

63、在一些情况下，所述重组核酸进一步包含线粒体蛋白编码序列，其中所述线粒体蛋白编码序列编码包含线粒体蛋白的多肽。在一些情况下，所述线粒体蛋白选自由以下组成的组：nadh脱氢酶4(nd4)、nadh脱氢酶6(nd6)、nadh脱氢酶1(nd1)及其变体。在一些情况下，所述线粒体蛋白包括nadh脱氢酶4(nd4)或其变体。在一些情况下，所述线粒体蛋白包含与seq id no:160中列出的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的肽序列。在一些情况下，所述线粒体蛋白编码序列包含与seq id no:6、7或8中列出的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。在一些情况下，所述线粒体蛋白包括nadh脱氢酶6(nd6)或其变体。在一些情况下，所述线粒体蛋白包含与seq id no:161中列出的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。在一些情况下，所述线粒体蛋白编码序列包含与seq id no:9或10中列出的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。在一些情况下，所述线粒体蛋白包括nadh脱氢酶1(nd1)或其变体。在一些情况下，所述线粒体蛋白包含与seq idno:162中列出的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。在一些情况下，所述线粒体蛋白编码序列包含与seq id no:11或12中列出的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。

64、在一些情况下，所述重组核酸进一步包含3’utr核酸序列。在一些情况下，所述3’utr核酸序列位于所述线粒体靶向序列的3’。在一些情况下，所述3’utr核酸序列包含选自由以下组成的组的序列：hsaco2、hsatp5b、hsak2、hsaldh2、hscox10、hsuqcrfs1、hsndufv1、hsndufv2、hssod2、hscox6c、hsirp1、hsmrps12、hsatp5j2、rnsod2和hsoxa1l。在一些情况下，所述3’utr核酸序列包含与选自由seq id no:111-125组成的组的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。在一些情况下，所述3’utr核酸序列包含与seq id no:13或seq id no:14中列出的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。在一些情况下，所述线粒体靶向序列位于所述3’utr核酸序列的5’。在一些情况下，所述线粒体靶向序列位于所述线粒体靶向序列的3’。

65、在一些情况下，所述重组核酸包含与选自由seq id no:29-70组成的组的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。

66、另一方面，本文公开了一种重组核酸，其包含线粒体蛋白编码序列，其中所述线粒体蛋白编码序列编码包含线粒体蛋白的多肽，其中所述线粒体蛋白编码序列包含与选自由seq id no:7、8、10和12组成的组的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。

67、在一些情况下，所述重组核酸进一步包含线粒体靶向序列。在一些情况下，所述线粒体靶向序列包含编码选自由以下组成的组的多肽的序列：hscox10、hscox8、scrpm2、lcsirt5、tbndus7、ncqcr2、hsatp5g2、hslactb、spilv1、gmcox2、cratp6、hsopa1、hssdhd、hsadck3、osp0644b06.24-2、粗糙脉孢菌atp9(ncatp9)、hsghitm、hsndufab1、hsatp5g3、cratp6_hsadck3、ncatp9_ncatp9、zmloc100282174、ncatp9_zmloc100282174_spilv1_ncatp9、zmloc100282174_hsadck3_cratp6_hsatp5g3、zmloc100282174_hsadck3_hsatp5g3、ncatp9_zmloc100282174、hsadck3_zmloc100282174_cratp6_hsatp5g3、cratp6_hsadck3_zmloc100282174_hsatp5g3、hsadck3_zmloc100282174、hsadck3_zmloc100282174_cratp6、ncatp9_zmloc100282174_spilv1_gnfp_ncatp9和ncatp9_zmloc100282174_spilv1_lcsirt5_osp0644b06.24-2_hsatp5g2_ncatp9。在一些情况下，所述线粒体靶向序列编码多肽，所述多肽包含与选自由seq id no:129-159组成的组的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的肽序列。在一些情况下，所述线粒体靶向序列包含与seq id no:2中列出的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。在一些情况下，所述线粒体靶向序列包含与seq id no:3中列出的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。在一些情况下，所述线粒体靶向序列包含与seq id no:4中列出的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。在一些情况下，所述线粒体靶向序列包含与seqid no:5中列出的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。

68、在一些情况下，所述线粒体蛋白编码序列包含与seq id no:7或8中列出的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。在一些情况下，所述线粒体蛋白编码序列包含与seq id no:10中列出的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。在一些情况下，所述线粒体蛋白编码序列包含与seq idno:12中列出的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。

69、在一些情况下，所述重组核酸进一步包含3’utr核酸序列。在一些情况下，所述3’utr核酸序列位于所述线粒体靶向序列的3’。在一些情况下，所述3’utr核酸序列包含选自由以下组成的组的序列：hsaco2、hsatp5b、hsak2、hsaldh2、hscox10、hsuqcrfs1、hsndufv1、hsndufv2、hssod2、hscox6c、hsirp1、hsmrps12、hsatp5j2、rnsod2和hsoxa1l。在一些情况下，所述3’utr核酸序列包含与选自由seq id no:111-125组成的组的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。在一些情况下，所述3’utr核酸序列包含与seq id no:13或seq id no:14中列出的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。在一些情况下，所述线粒体靶向序列位于所述3’utr核酸序列的5’。在一些情况下，所述线粒体靶向序列位于所述线粒体靶向序列的3’。

70、在一些情况下，所述重组核酸包含与选自由seq id no:17-20、23-24、27-28、31-34、37-38、41-42、45-48、51-52、55-56、59-62、65-66、69-70、73-76、79-80和83-84组成的组的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。

71、另一方面，本文公开了包含本文公开的重组核酸的病毒载体。在一些情况下，所述病毒载体是腺相关病毒(aav)载体。在一些情况下，所述aav载体选自由以下组成的组：aav1载体、aav2载体、aav3载体、aav4载体、aav5载体、aav6载体、aav7载体、aav8载体、aav9载体、aav10载体、aav11载体、aav12载体、aav13载体、aav14载体、aav15载体和aav16载体。在一些情况下，所述aav载体是重组aav(raav)载体。在一些情况下，所述raav载体是raav2载体。

72、另一方面，本文公开了治疗眼部病症的方法，其包括向有需要的患者施用本文公开的任何药物组合物。在一些情况下，所述眼部病症是莱伯氏遗传性视神经病变(lhon)。在一些情况下，所述方法包括向所述患者的单眼或双眼施用所述药物组合物。在一些情况下，经由眼内注射或玻璃体内注射施用所述药物组合物。在一些情况下，经由玻璃体内注射施用所述药物组合物。在一些情况下，经由玻璃体内注射施用约0.01-0.1ml的所述药物组合物。在一些情况下，经由玻璃体内注射施用约0.05ml的所述药物组合物。

73、在一些情况下，所述方法进一步包括向所述患者施用甲泼尼龙。在一些情况下，在所述药物组合物的玻璃体内注射之前施用甲泼尼龙。在一些情况下，口服施用甲泼尼龙。在一些情况下，在所述药物组合物的玻璃体内注射之前每日施用甲泼尼龙持续至少1天、2天、3天、4天、5天、6天或7天。在一些情况下，每日施用甲泼尼龙。在一些情况下，施用约32mg/60kg的甲泼尼龙的日剂量。在一些情况下，在所述药物组合物的玻璃体内注射后施用甲泼尼龙。在一些情况下，所述方法进一步包括向所述患者施用磷酸肌酸钠。在一些情况下，静脉内施用磷酸肌酸钠。在一些情况下，静脉内或口服施用甲泼尼龙。在一些情况下，所述方法包括静脉内施用甲泼尼龙持续至少一天，接着口服施用甲泼尼龙持续至少一周。在一些情况下，所述方法包括静脉内施用甲泼尼龙持续约3天，接着口服施用甲泼尼龙持续至少约6周。在一些情况下，以约80mg/60kg的日剂量静脉内施用甲泼尼龙。在一些情况下，施用所述药物组合物比没有所述重组核酸的相当的药物组合物产生更高的平均视力恢复。在一些情况下，施用所述药物组合物比包含seq id no:15中列出的重组核酸的相当的药物组合物产生更高的平均视力恢复。

74、在一些实施方案中，本公开提供了治疗眼部病症的方法，其包括向有需要的患者施用(a)包含腺相关病毒(aav)的第一药物组合物，所述腺相关病毒包含重组核酸，所述重组核酸包含：(i)编码线粒体靶向肽的核酸序列；(ii)编码线粒体蛋白的核酸序列，所述核酸序列包含与选自由seq id no:6-12组成的组的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的核酸序列；和(iii)3’utr核酸序列；以及(b)包含类固醇的第二药物组合物。

75、在一些实施方案中，编码所述线粒体蛋白的所述核酸序列编码多肽，所述多肽包含与选自由seq id no:160-162组成的组的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，编码线粒体靶向肽的核酸序列编码多肽，所述多肽包含与选自由seq id no:126-159组成的组的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，编码线粒体靶向肽的核酸序列包含与选自由seq id no:1-5组成的组的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些实施方案中，所述3’utr核酸序列包含与选自由seq id no:13、14和111-125组成的组的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的核酸序列(nucleic sequence)。

76、在一些实施方案中，本公开提供了治疗眼部病症的方法，其包括向有需要的患者施用(a)包含腺相关病毒(aav)的第一药物组合物，所述腺相关病毒包含重组核酸，所述重组核酸包含：(i)编码线粒体靶向肽的核酸序列，所述线粒体靶向肽包含与选自由seq idno:126-159组成的组的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列(amino sequence)；(ii)编码线粒体蛋白的核酸序列；和(iii)3’utr核酸序列；以及(b)包含类固醇的第二药物组合物。

77、在一些实施方案中，所述线粒体蛋白选自由以下组成的组：nadh脱氢酶4(nd4)、nadh脱氢酶6(nd6)、nadh脱氢酶1(nd1)及其变体。在一些实施方案中，编码线粒体蛋白的核酸序列包含与选自由seq id no:6-12组成的组的核酸序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些实施方案中，编码线粒体蛋白的核酸序列编码多肽，所述多肽包含与选自由seq id no:160-162组成的组的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，编码线粒体靶向肽的核酸序列包含与选自由seq id no:1-5组成的组的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些实施方案中，所述3’utr核酸序列包含与选自由seq id no:13、14和111-125组成的组的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。

78、在一些实施方案中，本公开提供了治疗眼部病症的方法，包括向有需要的患者施用(a)包含腺相关病毒(aav)的第一药物组合物，所述腺相关病毒包含重组核酸，所述重组核酸包含：(i)编码线粒体靶向肽的核酸序列，所述线粒体靶向肽包含与选自由seq id no:126-159组成的组的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；(ii)编码线粒体蛋白的核酸序列，所述核酸序列包含与选自由seq id no:6-12组成的组的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的核酸序列；和(iii)与选自由seq id no:13、14和111-125组成的组的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的3’utr核酸序列；以及(b)包含类固醇的第二药物组合物。

79、在一些实施方案中，本公开提供了治疗眼部病症的方法，其包括向有需要的患者施用(a)包含腺相关病毒(aav)的第一药物组合物，所述腺相关病毒包含重组核酸，所述重组核酸包含：(i)编码线粒体靶向肽的核酸序列；和(ii)编码线粒体蛋白的核酸序列；以及(b)包含类固醇的第二药物组合物。在一些实施方案中，所述线粒体蛋白选自由以下组成的组：nadh脱氢酶4(nd4)、nadh脱氢酶6(nd6)、nadh脱氢酶1(nd1)及其变体。在一些实施方案中，所述3’utr核酸序列包含与选自由seq id no:13、14和111-125组成的组的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的核酸序列。

80、在一些实施方案中，所述重组核酸包含与选自由seq id no:15-84组成的组的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。在一些实施方案中，所述重组核酸包含与seq id no:15具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。

81、在一些实施方案中，经由眼内注射或玻璃体内注射施用所述第一药物组合物。在一些实施方案中，经由玻璃体内注射施用约0.01-0.1ml的所述第一药物组合物。在一些实施方案中，经由玻璃体内注射施用约0.05ml的所述第一药物组合物。在一些实施方案中，向所述患者的单眼或双眼施用所述第一药物组合物。

82、在一些实施方案中，所述类固醇选自由以下组成的组：二丙酸阿氯米松、安西奈德、二丙酸倍氯米松、倍他米松、苯甲酸倍他米松、二丙酸倍他米松、倍他米松磷酸钠、倍他米松磷酸钠和醋酸钠、戊酸倍他米松、丙酸氯倍他索、新戊酸氯可托龙、皮质醇(氢化可的松)、醋酸皮质醇(氢化可的松)、丁酸皮质醇(氢化可的松)、环戊丙酸皮质醇(氢化可的松)、皮质醇(氢化可的松)磷酸钠、皮质醇(氢化可的松)琥珀酸钠、戊酸皮质醇(氢化可的松)、醋酸可的松、地奈德、去氧米松、地塞米松、醋酸地塞米松、地塞米松磷酸钠、二醋酸二氟拉松、醋酸氟氢可的松、氟尼缩松、醋酸肤轻松、氟轻松醋酸酯、氟米龙、氟氢缩松、哈西奈德、甲羟松、甲泼尼龙、醋酸甲泼尼龙、甲泼尼龙琥珀酸钠、糠酸莫米松、醋酸帕拉米松、泼尼松龙、醋酸泼尼松龙、泼尼松龙磷酸钠、丁乙酸泼尼松龙、泼尼松、曲安西龙、曲安奈德、二醋酸曲安西龙和己曲安奈德或其合成类似物。

83、在一些实施方案中，所述类固醇是糖皮质激素。在一些实施方案中，所述糖皮质激素是甲泼尼龙或泼尼松。

84、在一些实施方案中，甲泼尼龙被配制为片剂或用于静脉内施用的液体。在一些实施方案中，口服或静脉内施用所述类固醇。

85、在一些实施方案中，在施用所述第一药物组合物之前施用所述类固醇。在一些实施方案中，在施用所述第一药物组合物之前每日施用所述类固醇持续至少1天、2天、3天、4天、5天、6天或7天。在一些实施方案中，所述类固醇是甲泼尼龙，并且以约30mg/60kg至约40mg/60kg或约30mg至约40mg的日剂量施用。在一些实施方案中，甲泼尼龙的日剂量为约32mg/60kg或32mg。在一些实施方案中，所述类固醇是泼尼松，并且以约50mg/60kg至约70mg/60kg的日剂量施用。在一些实施方案中，泼尼松的日剂量为约60mg/60kg。

86、在一些实施方案中，在施用所述第一药物组合物后施用所述类固醇。在一些实施方案中，在施用所述第一药物组合物后每日施用所述类固醇持续至少1天、至少2天、至少3天、至少4天、至少5天、至少6天、至少7天、至少8天、至少9天、至少10天、至少1周、至少2周、至少3周、至少4周、至少5周、至少6周、至少7周、至少8周、至少9周、至少10周、至少11周、至少12周、至少13周、至少14周或至少15周。

87、在一些实施方案中，所述类固醇是甲泼尼龙，并且以介于约70mg/60kg与90mg/60kg之间或介于约70mg与90mg之间的日剂量施用。在一些实施方案中，甲泼尼龙的日剂量为约80mg/60kg或80mg。在一些实施方案中，在施用所述第一药物组合物后施用甲泼尼龙持续至少两天。在一些实施方案中，在施用所述第一药物组合物后每日施用甲泼尼龙的后续剂量持续至少7周，并且其中甲泼尼龙的剂量逐周减少。

88、在一些实施方案中，所述类固醇是泼尼松，并且以介于约50mg/60kg与70mg/60kg之间或介于约50mg与约70mg之间的日剂量施用。在一些实施方案中，泼尼松的日剂量为约60mg/60kg或约60mg。在一些实施方案中，在施用所述第一药物组合物后施用泼尼松持续至少七天。在一些实施方案中，其中七天后，以介于约30mg/60kg与约50mg/60kg之间或介于约30mg与50mg之间的日剂量施用泼尼松。在一些实施方案中，泼尼松的日剂量为约40mg/60kg或40mg。在一些实施方案中，每日施用泼尼松的后续剂量持续至少4天，并且其中泼尼松的剂量逐日减少。

89、在一些实施方案中，在施用所述第一药物化合物之前和之后施用所述类固醇。

90、在一些实施方案中，所述类固醇是甲泼尼龙，并且在施用所述第一药物化合物之前每日施用持续至少七天，并且在施用所述第一药物化合物后每日施用持续至少7周。在一些实施方案中，在施用所述第一药物化合物之前以约32mg/60kg或32mg的日剂量施用甲泼尼龙。在一些实施方案中，在施用所述第一药物化合物后以约80mg/60kg或80mg的日剂量施用甲泼尼龙持续至少2天。在一些实施方案中，在施用所述第一药物化合物后三天开始，以约40mg/60kg或40mg的日剂量施用甲泼尼龙持续至少4天。在一些实施方案中，在施用所述第一药物化合物后一周开始，以约32mg/60kg或32mg的日剂量施用甲泼尼龙持续至少一周。在一些实施方案中，在施用所述第一药物化合物后两周开始，以约24mg/60kg或24mg的日剂量施用甲泼尼龙持续至少一周。在一些实施方案中，在施用所述第一药物化合物后三周开始，以约16mg/60kg或16mg的日剂量施用甲泼尼龙持续至少一周。在一些实施方案中，在施用所述第一药物化合物后四周开始，以约8mg/60kg或8mg的日剂量施用甲泼尼龙持续至少一周。在一些实施方案中，在施用所述第一药物化合物后五周开始，以约6mg/60kg或6mg的日剂量施用甲泼尼龙持续至少一周。在一些实施方案中，在施用所述第一药物化合物后六周开始，以约4mg/60kg或4mg的日剂量施用甲泼尼龙持续至少一周。

91、在一些实施方案中，所述类固醇是泼尼松，并且在施用所述第一药物化合物之前每日施用持续至少两天，并且在施用所述第一药物化合物后每日施用持续至少十一天。在一些实施方案中，在施用所述第一药物化合物之前以约60mg/60kg或60mg的日剂量施用泼尼松。在一些实施方案中，在施用所述第一药物化合物后以约60mg/60kg或60mg的日剂量施用泼尼松持续至少七天。在一些实施方案中，在施用所述第一药物化合物后八天，以约40mg/60kg或40mg的日剂量施用泼尼松持续至少一天。在一些实施方案中，在施用所述第一药物化合物后九天，以约20mg/60kg或20mg的日剂量施用泼尼松持续至少一天。在一些实施方案中，在施用所述第一药物化合物后十天，以约10mg/60kg或10mg的日剂量施用泼尼松持续至少一天。

92、在一些实施方案中，所述方法进一步包括向所述患者施用磷酸肌酸钠。在一些实施方案中，在施用所述第一药物组合物之前和/或之后静脉内施用磷酸肌酸钠。

93、在一些实施方案中，施用所述第一药物组合物和第二药物组合物比在没有所述第二药物组合物情况下施用的相当的药物组合物产生更高的平均视力恢复。在一些实施方案中，施用所述第一药物组合物和第二药物组合物比在没有所述第二药物组合物情况下施用的相当的药物组合物产生更低的不良事件发生率。在一些实施方案中，所述不良事件选自前房炎症、玻璃体炎、高眼压、白内障摘除、角膜炎、玻璃体出血、过敏性结膜炎和眼痛。在一些实施方案中，在患有所述眼部病症的患者群体中确定所述更高的平均视力恢复和所述更低的不良事件发生率。在一些实施方案中，所述患者群体是种族匹配的。在一些实施方案中，所述患者群体是中国人或阿根廷人。

94、在一些实施方案中，所述眼部病症是莱伯氏遗传性视神经病变(lhon)。在一些实施方案中，所述aav选自aav1、aav2、aav3、aav4、aav5、aav6、aav7、aa8、aav9和aav10。在一些实施方案中，所述aav是aav2。

95、在一些实施方案中，本公开提供了筛选治疗眼部病症的患者的方法，所述方法包括：(a)获得来自患者的血清样品；(b)在所述血清样品存在下将靶细胞群与包含腺相关病毒(aav)的组合物一起培养，所述腺相关病毒包含编码可检测标记的重组核酸；并且(c)在所述培养后检测所述靶细胞群中所述可检测标记的表达水平，其中如果所述靶细胞群中所述可检测标记的表达水平高于预定阈值，则选择所述患者进行所述治疗。

96、在一些实施方案中，本公开提供了筛选治疗眼部病症的患者的方法，所述方法包括：(a)在来自患者的血清样品存在下将靶细胞群与包含腺相关病毒(aav)的组合物一起培养，所述腺相关病毒包含编码可检测标记的重组核酸；并且(b)在所述培养后检测所述靶细胞群中所述可检测标记的表达水平，其中如果所述靶细胞群中所述可检测标记的表达水平高于预定阈值，则选择所述患者进行所述治疗。

97、在一些实施方案中，本公开提供了治疗有需要的患者的眼部病症的方法，其包括：(a)获得来自患者的血清样品；(b)在所述血清样品存在下将靶细胞群与包含第一腺相关病毒(aav)的组合物一起培养，所述第一腺相关病毒包含编码可检测标记的第一重组核酸；(c)检测所述靶细胞群中所述可检测标记的表达水平；并且(d)向所述患者施用包含第二aav的药物组合物，所述第二aav包含第二重组核酸，其中所述靶细胞群中所述可检测标记的表达水平高于预定阈值。

98、在一些实施方案中，本公开提供了治疗有需要的患者的眼部病症的方法，其包括：(a)在来自患者的血清样品存在下将靶细胞群与包含第一腺相关病毒(aav)的组合物一起培养，所述第一腺相关病毒包含编码可检测标记的第一重组核酸；(b)检测所述靶细胞群中所述可检测标记的表达水平；并且(c)向所述患者施用包含第二aav的药物组合物，所述第二aav包含第二重组核酸，其中所述靶细胞群中所述可检测标记的表达水平高于预定阈值。

99、在一些实施方案中，所述可检测标记是荧光蛋白。在一些实施方案中，所述荧光蛋白是绿色荧光蛋白(gfp)。在一些实施方案中，通过流式细胞术或qpcr检测所述可检测标记。在一些实施方案中，所述培养步骤为至少12小时、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天或更长。

100、在一些实施方案中，当通过流式细胞术检测时，所述预定阈值是表达所述可检测标记的细胞的约40％。在一些实施方案中，当通过qpcr检测时，所述预定阈值是约0.6的所述可检测标记的相对表达水平。在一些实施方案中，所述靶细胞是hek-293t细胞。

101、在一些实施方案中，所述治疗是包含编码线粒体蛋白的核酸序列的重组aav。在一些实施方案中，所述线粒体蛋白选自由以下组成的组：nadh脱氢酶4(nd4)、nadh脱氢酶6(nd6)、nadh脱氢酶1(nd1)及其变体。在一些实施方案中，所述患者包含选自以下的突变：nd4基因中的g11778a、nd1基因中的g3460a和nd6基因中的t14484c。

102、在一些实施方案中，本公开提供了一种试剂盒，其包含：包含编码可检测标记的重组核酸的腺相关病毒(aav)、靶细胞群和一种或多种用于检测所述可检测标记的试剂。在一些实施方案中，所述试剂盒进一步包含用于用所述aav转染所述靶细胞群的转染试剂。在一些实施方案中，所述试剂盒进一步包含第二aav，所述第二aav包含编码线粒体蛋白的重组核酸。在一些实施方案中，用于检测可检测标记的一种或多种试剂选自与所述可检测标记结合的抗体和一种或多种对编码所述可检测标记的所述重组核酸具有特异性的引物寡核苷酸。