缓解化疗诱导的免疫应激和肠黏膜损伤金枪鱼肽的制备方法与应用与流程

本发明属于海产品加工，更具体地，涉及一种缓解化疗诱导的免疫应激和肠黏膜损伤金枪鱼肽的制备方法与应用。

背景技术：

1、免疫应激和肠黏膜炎是接受放化疗的肿瘤患者常见的副作用，出现消化不良、腹泻、脱水等症状，严重患者的生活质量，降低抗癌治疗耐受性。临床上主要通过给予免疫营养支持来改善免疫低下和肠黏膜损伤，然而大多数合成的免疫调节肽都表现出毒性和副作用，限制了它们在慢性疾病中的使用，相比之下，大多数天然衍生的免疫调节蛋白，蛋白水解物或蛋白肽不会显示副作用并且成本较低，具有用于免疫营养治疗的潜力。

2、金枪鱼是一种具有很高经济价值的海洋鱼类，其中黄鳍金枪鱼(thunnusalbacares)是金枪鱼第二重要物种。然而金枪鱼的一些加工副产品，如鱼尾、鱼头、内脏、骨架、鱼皮、鳍和鱼子，约占总重量50-70％以上。这些副产物被认为是优质的蛋白质资源，金枪鱼副产物蛋白质含量高达80％以上，使其成为开发生物活性肽功能营养食品，提高其商业价值的潜在资源。越来越多的研究表明鱼蛋白中的免疫调剂肽易于吸收，对人类健康具有很好的效价比。因此本发明从金枪鱼糜中酶解获得免疫调节肽，并表征特征免疫调节肽，明确作用物质基础，该酶解物能有效预防或降低放化疗诱导的免疫应激和肠黏膜损伤，以维持机体的生活质量并提高治疗耐受性具有应用前景。

技术实现思路

1、本发明的第一个目的是提供一种缓解化疗诱导的免疫应激和肠黏膜炎的金枪鱼肽。

2、本发明的第二个目的是提供上述金枪鱼肽的制备方法。

3、本发明的第三个目的是提供上述金枪鱼肽的应用。

4、本发明的目的通过以下技术方案实现：

5、所述的缓解化疗诱导的免疫应激和肠黏膜炎的金枪鱼肽，包含以下氨基酸序列ala-thr-tyr-leu-gly-ser-ser-phe、phe-gly-gly-ala-ala-lys-pro-pro和val-ser-ser-val-gly-asn-ser的一种或二种以上。

6、所述的缓解化疗诱导的免疫应激和肠黏膜炎的金枪鱼肽分子量小于1kda比例为95％以上，鉴定的所有肽序列都含有gln，tyr，trp，val，leu，ile，lys，arg或glu一种或二种以上促进免疫活性的氨基酸，

7、本发明的第二个目的是提供一种上述缓解化疗诱导的免疫应激和肠黏膜炎的金枪鱼肽的制备方法，包括以下步骤：金枪鱼肉糜，加入3倍体积的蒸馏水，用匀浆机搅至无明显颗粒的糜状匀浆液后，调节ph至8，预热至50℃后加入3000u/g碱性蛋白酶，在恒温条件下酶解4h完成后置于沸水浴中10min灭酶活，待冷却后过滤，滤过液17700×g，4℃离心30min，取上清液用0.2um滤膜抽滤，滤过液10k和3k mwco超滤膜处理，取<3kda滤过液浓缩，冷冻干燥得金枪鱼肽。

8、所述的蛋白酶为碱性蛋白酶或中性蛋白酶，酶添加量为1500～4000u/g。

9、所述的蒸馏水加入量为2～4倍。

10、所述的酶解温度为45-60℃，酶解ph为7.0～8.5，酶解时间为3～6h。

11、所述的灭酶是沸水浴灭酶8-12min。

12、所述的离心是在17700×g，4℃离心30min。

13、所述的上清液超滤是用0.2um滤膜抽滤，滤过液10k和3k mwco超滤膜处理。

14、本发明第三个目的是提供上述缓解化疗诱导的免疫应激和肠黏膜损伤的金枪鱼肽在制备提高免疫和保护肠道粘膜屏障功能的制剂中应用。

15、优选，所述金枪鱼肽在制备提高免疫和保护肠道粘膜屏障功能的功能营养食品或肿瘤患者特殊医学用途配方食品或保健品。

16、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

17、本发明首次公开从金枪鱼糜中酶解分离获得能够缓解5-fu诱导的免疫低下和肠道黏膜损伤的金枪鱼肽，与5-fu组相比，联用金枪鱼肽能显著提高5-fu的抑制率，并且小肠绒毛高度、隐窝深度、黏膜厚度和绒毛面积均较5-fu组显著增加，而且s180小鼠血清的总蛋白、白蛋白、前蛋白和免疫球蛋白m的含量均增加，因此，所述的金枪鱼肽在制备提高免疫和保护肠道粘膜屏障功能的功能营养食品或肿瘤患者特殊医学用途配方食品或保健品具有很好的开发价值和应用前景。

技术特征：

1.一种缓解化疗诱导的免疫应激和肠黏膜损伤的金枪鱼肽，其特征在于，所述的金枪鱼肽分子量小于1kda比例为95％以上，鉴定的所有肽序列都含有gln，tyr，trp，val，leu，ile，lys，arg或glu一种或二种以上促进免疫活性的氨基酸，并包含以下肽序列ala-thr-tyr-leu-gly-ser-ser-phe、phe-gly-gly-ala-ala-lys-pro-pro和val-ser-ser-val-gly-asn-ser的一种或二种以上。

2.权利要求1所述的缓解化疗诱导的免疫应激和肠黏膜损伤的金枪鱼肽的制备方法，其特征在于，金枪鱼肉糜，加入3倍体积的蒸馏水，用匀浆机搅至无明显颗粒的糜状匀浆液后，调节ph至8，预热至50℃后加入3000u/g碱性蛋白酶，在恒温条件下酶解4h完成后置于沸水浴中10min灭酶活，待冷却后过滤，滤过液17700×g，4℃离心30min，取上清液用0.2um滤膜抽滤，滤过液10k和3k mwco超滤膜处理，取<3kda滤过液浓缩，冷冻干燥得金枪鱼肽。

3.权利要求1所述的缓解化疗诱导的免疫应激和肠黏膜损伤的金枪鱼肽在制备提高免疫和保护肠道粘膜屏障功能的制剂中应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述金枪鱼肽能减轻5-fu诱导的免疫低下和肠黏膜损伤。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述金枪鱼肽增加化疗小鼠血清的总蛋白、白蛋白、前白蛋白和免疫球蛋白水平。

6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述金枪鱼肽在制备提高免疫和保护肠道粘膜屏障功能的功能营养食品或肿瘤患者特殊医学用途配方食品或保健品。

技术总结
本发明属于海产品加工技术领域，公开了一种缓解化疗诱导的免疫应激和肠黏膜损伤金枪鱼肽的制备方法与应用，所述的金枪鱼肽分子量小于1kDa比例为95％以上，鉴定的所有肽序列都含有Gln，Tyr，Trp，Val，Leu，Ile，Lys，Arg或Glu一种或二种以上促进免疫活性的氨基酸，并包含以下肽序列ATYLGSSF、FGGAAKPP和VSSVGNS的一种或二种以上。本发明所述的金枪鱼肽的制备分离纯化包括酶解，超滤，鉴定，分子对接和动物功效评价获得。该金枪鱼肽提高5‑FU的肿瘤抑制率，同时缓解5‑FU导致的肠道黏膜损伤和免疫低下，维持S180荷瘤小鼠正常的生理生化功能，可以改善机体营养状况，提升化疗耐受力。可应用于功能营养制品，特殊医学用途配方食品和保健食品领域的研制与开发。

技术研发人员：潘剑宇,蔡冰娜,陈华,万鹏,陈得科,赵祥弹,孙恢礼
受保护的技术使用者：南方海洋科学与工程广东省实验室（广州）
技术研发日：
技术公布日：2024/1/14