用于美味猕猴桃鉴定的21个分子标记引物组合及应用的制作方法

本发明属于分子生物学及遗传育种，具体涉及用于美味猕猴桃鉴定的21个分子标记引物组合及应用。

背景技术：

1、我国猕猴桃栽植区域主要分布于南方的四川、贵州、湖北等省和北方的陕西、河南两省。40多年来，我国对野生种质资源的探索利用和创新育种促进了猕猴桃产业的快速发展，共培育出156个新品种，其中种植果园面积超过10万亩的品种有8个：‘红阳’、‘徐香’、‘翠香’、‘东红’、‘贵长’、‘金艳’、‘米良1号’和‘金桃’。根据猕猴桃栽培品种果肉颜色，绿肉、黄肉和红肉的栽培面积占比分别为49.87、15.80和32.56％，其中，绿肉猕猴桃占总面积接近一半。

2、绿肉猕猴桃多为美味猕猴桃种。在猕猴桃新品种选育方面，中心上世纪八十年代选育出“秦美”品种，成为我国第一代猕猴桃品种中推广面积最大的品种，荣获10多项大奖。‘碧玉’、‘瑞玉’和‘甜玉’均由陕西省农村科技开发中心与陕西佰瑞猕猴桃研究院有限公司选育而成的优质美味猕猴桃品种。‘碧玉’果实长圆柱形、果形整齐一致、平均单果种95克、最大果重138克、果肉绿色、汁液多、肉质细嫩、酸甜适口，含可溶性固形物15.3％～17.6％,维生素c158.7毫克/100克，果实耐贮藏运输、货架期长、室温下可贮藏30天左右。‘瑞玉’猕猴桃平均单果重90g，最大单果重128g；果皮褐色，被金黄色硬毛，果肉绿色，细腻多汁，风味香甜；含可溶性固形物18.3％～21.6％，干物质含量20％-25％，维生素c 174.3mg/100g，可滴定酸0.83％，可溶性糖12.09％。常温下后熟期25-30天，冷藏可贮藏5个月左右。‘瑞玉’树势强健，早果丰产，盛果期产量2000kg/mu以上。‘甜玉’是由‘翠香’作为母本，授‘毛花’雄株花粉(父本)，进行种间杂交育种，选育而成的美味猕猴桃新品种。果实圆柱形，平均单果重90克、最大果重130克，果肉绿色、细腻、多汁、风味浓郁、酸甜可口、含糖量高、含可溶性固形物17.3％～19.6％，含总酸0.75％～1.42％。综合表现为：树势强健，早果丰产稳产，抗溃疡病，适应性广；果形美观整齐、风味浓厚、酸甜适口、耐贮藏运输。是优质高产抗病中熟的美味猕猴桃新品种。

3、品种的纯度与真实性直接影响农作物的产量和品质。对种质纯度与真实性鉴定的本质就是对基因型的鉴定。目前鉴定方法主要包括形态学法、生物化学法以及分子标记法，但前两种方法容易受到环境及材料本身影响，而分子标记鉴定法不受外部条件影响，相较于前两种方法准确性更高。猕猴桃产业中品种乱杂现象相对较多，田间测试鉴定难以满足时效性及准确性的要求，并且费时费力。

4、开发适用于美味猕猴桃品种的分子鉴定标记，有利于从分子水平上明确界定专利品种，利于对猕猴桃品种进行鉴定和品种保护。

技术实现思路

1、本发明的目的在于利用分子标记技术，提供一种用于美味猕猴桃鉴定的21个分子标记引物组合。

2、本发明的另一个目的在于提供了用于美味猕猴桃鉴定的分子标记引物组合在猕猴桃育种中的应用。

3、为了达到上述目的，本发明采取以下技术措施：

4、用于美味猕猴桃鉴定的分子标记引物组合的获得：申请人从猕猴桃基因组网站(http://kiwifruitgenome.org/)下载最新版本的猕猴桃v3全基因序列。通过ssr finder软件在全基因组范围内开发ssr标记，根据基因结构注释结果，选择基因位点设计ssr标记引物。利用设计合成的引物，对16个美味猕猴桃品种进行pcr扩增，筛选得到21个分子标记用于美味猕猴桃的鉴定，具体引物见具体实施方式实施例1。

5、用于美味猕猴桃鉴定的21个分子标记引物在猕猴桃育种中的应用，包括利用本发明的引物用于猕猴桃育种，或是利用本发明的引物对美味猕猴桃品种‘碧玉’、‘晨光’、‘翠香’、‘贵长’、‘华美’、‘海沃德’、‘金福’、‘金魁’、‘米良’、‘秦美’、‘秋明’、‘瑞玉’、‘甜玉’、‘徐香’、‘哑特’、‘郁香’根据不同条带的大小和数目进行鉴定区分。

6、与现有技术相比，本发明的优点：

7、1.形态标记简单直观，但是数量少、多态性差、易受环境条件影响。分子标记操作简便，在植物体的各个组织和发育时期，均可检测，不受季节和环境限制。数量多，遍及整个基因组。多态性高，品种间存在许多等位变异。

8、2.本发明的引物可在猕猴桃系列品种中扩增得到不同大小的dna片段。该分子标记扩增稳定性，能用于进行美味猕猴桃品种的鉴定。

9、3.本发明提供的分子标记引物特异性高，适用范围广。

10、4.可根据条带大小和数目对‘碧玉’、‘晨光’、‘翠香’、‘贵长’、‘华美’、‘海沃德’、‘金福’、‘金魁’、‘米良’、‘秦美’、‘秋明’、‘瑞玉’、‘甜玉’、‘徐香’、‘哑特’、‘郁香’猕猴桃品种进行区分。

技术特征：

1.用于美味猕猴桃鉴定的21个分子标记引物组合：

2.权利要求1所述的引物组合在猕猴桃育种中的应用。

3.权利要求1所述的引物组合在猕猴桃品种鉴定中的应用。

4.权利要求1所述的引物组合在猕猴桃‘碧玉’、‘晨光’、‘翠香’、‘贵长’、‘华美’、‘海沃德’、‘金福’、‘金魁’、‘米良’、‘秦美’、‘秋明’、‘瑞玉’、‘甜玉’、‘徐香’、‘哑特’、‘郁香’猕猴桃品种鉴定中的应用。

技术总结
本发明属于分子生物学及遗传育种技术领域，公开了用于美味猕猴桃鉴定的21个分子标记引物组合及应用。利用本发明提供的21对引物对16个常见美味猕猴桃DNA进行扩增，可特异性的扩增出大小不同的条带；根据不同条带的大小和数目，可对：‘碧玉’、‘晨光’、‘翠香’、‘贵长’、‘华美’、‘海沃德’、‘金福’、‘金魁’、‘米良’、‘秦美’、‘秋明’、‘瑞玉’、‘甜玉’、‘徐香’、‘哑特’、‘郁香’等猕猴桃进行区分。

技术研发人员：雷玉山,徐明,田娜
受保护的技术使用者：陕西省农村科技开发中心
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12