1.本发明属于植物提取技术领域，更具体的说是涉及一种提高黄酮类化合物提取收率的方法。
背景技术：
2.黄酮类化合物是一类低分子量的天然物质，是植物体内的次级代谢产物，广泛分布于芸香科、唇形科、豆科、伞形科、银杏科与菊科等植物体内。黄酮类化合物具有c6-c3-c6基本构型，主要分为黄酮及黄酮醇类、二氢黄酮及二氢黄酮醇类、黄烷醇类、异黄酮及二氢异黄酮类、双黄酮类，以及查尔酮、花色苷等。研究表明，黄酮类化合物具有清除生物体内的自由基、抗肿瘤、抗菌、抗病毒、抗炎症、抗过敏、抗衰老等作用，且无毒无害，因此在食品、药品、保健品等方面得到广泛应用。
3.一些含活泼的酚羟基的黄酮类化合物，结构稳定性较差，易出现分子重排和降解，所以在食品加工过程中易损失，如在热处理、ph变化、氧化剂、金属离子、酶等作用下降解，从而失去活性。
4.因此，如何提供一种提高黄酮类化合物提取收率的方法是本领域技术人员亟需解决的问题。
技术实现要素：
5.有鉴于此，本发明提供了一种提高黄酮类化合物提取收率的方法。
6.为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
7.一种提高黄酮类化合物提取收率的方法，包括以下步骤：
8.(1)将糊精水溶液调节ph并加热，加入普鲁兰酶、麦芽寡糖基海藻糖合成酶、麦芽寡糖基海藻糖水解酶、糖化酶和粉碎后的植物原料组织，搅拌反应得料液a；
9.(2)将料液a加热，进行微波提取，得料液b；
10.(3)将料液b经过滤、浓缩、干燥即得黄酮类提取物。
11.本发明的有益效果：与现有技术相比，本发明公开提供了一种减少黄酮类提取物含量损失的方法，取得的技术优势在于以天然植物组织作为主要原料，原料天然，且利用水提法进行提取减少了有机溶剂残留的危害；通过微波辅助萃取，可以增加黄酮类活性物质的提取率；利用糊精与酶反应生成海藻糖可以减少黄酮类物质的损失；本发明的制备方法反应条件温和，生产过程易于控制，产品质量稳定，可以广泛用于食品、医药、日用化工等领域。
12.进一步，步骤(1)上述糊精水溶液的浓度为30～35wt％，糊精水溶液de值为7～9，调节ph为6.0～7.0，加热温度为37～40℃，搅拌转速为100～300r/min，搅拌时间为2～4h。
13.进一步，步骤(1)上述普鲁兰酶用量为糊精质量的1.6～2
‰
，麦芽寡糖基海藻糖合成酶用量为糊精质量的2～4％，麦芽寡糖基海藻糖水解酶用量为糊精质量的3～6％，糖化酶用量为糊精质量的0.4～1
‰
。
14.进一步，步骤(1)上述植物原料组织为蔓越莓、枸杞、沙棘、酸枣、蓝莓、桑葚中的一种或几种，植物原料组织和糊精水溶液的质量比为1:8～10。
15.植物原料组织为果实。
16.进一步，步骤(1)上述粉碎至粒径小于20-40目。
17.进一步，步骤(2)上述加热温度为58～60℃，微波功率为800w，提取时间为3～6min。
18.进一步，步骤(3)上述过滤使用滤膜微孔大小为0.45μm，浓缩至相对密度为1.05～1.2，干燥方法为喷雾冷冻干燥，预冻终温-40℃，干燥温度为-60℃～-40℃，压力为1000pa，干燥至含水量为0.1％～0.2％。
19.进一步，步骤(3)上述黄酮类提取物中黄酮类化合物为原花青素、花青素、花色糖苷、花色苷酸、芦丁、酸枣仁黄酮、杨梅素、二氢杨梅素、山奈酚和木犀草素。
具体实施方式
20.下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
21.本发明酶制剂均为市售取得，其中普鲁兰酶酶活为2000u/ml，麦芽寡糖基海藻糖合成酶酶活为150u/ml，麦芽寡糖基海藻糖水解酶酶活为350u/ml，糖化酶酶活为50000u/ml，对其来源、品牌无要求。
22.实施例1
23.提高黄酮类化合物提取收率的方法，包括以下步骤：
24.(1)将浓度为30wt％，de值为7的糊精水溶液调节ph为6.0，37℃加热，加入普鲁兰酶、麦芽寡糖基海藻糖合成酶、麦芽寡糖基海藻糖水解酶、糖化酶和粉碎后过20目筛的植物原料组织蔓越莓，植物原料组织和糊精水溶液的质量比为1:8，普鲁兰酶用量为糊精质量的1.6
‰
，麦芽寡糖基海藻糖合成酶用量为糊精质量的2％，麦芽寡糖基海藻糖水解酶用量为糊精质量的3％，糖化酶用量为糊精质量的0.4
‰
，搅拌反应得料液a，搅拌转速为100r/min，搅拌时间为2h；
25.(2)将料液a 58℃加热，进行微波提取，微波功率为800w，提取时间为3min，得料液b；
26.(3)将料液b使用微孔大小为0.45μm滤膜过滤、浓缩至相对密度为1.05，预冻至-40℃，-60℃，1000pa喷雾冷冻干燥至水分含量为0.1％，即得黄酮类提取物，黄酮类化合物收率为3.62％，测得黄酮类提取物中黄酮类化合物含量为43.62％。
27.本发明实施例中黄酮类化合物收率指黄酮类化合物总量占植物原料组织质量的百分比，黄酮类化合物为黄酮类提取物中黄酮类化合物为原花青素、花青素、花色糖苷、花色苷酸、芦丁、酸枣仁黄酮、杨梅素、二氢杨梅素、山奈酚和木犀草素。
28.实施例2
29.提高黄酮类化合物提取收率的方法，包括以下步骤：
30.(1)将浓度为32wt％，de值为8的糊精水溶液调节ph为6.5，38℃加热，加入普鲁兰
酶、麦芽寡糖基海藻糖合成酶、麦芽寡糖基海藻糖水解酶、糖化酶和粉碎后过30目筛的植物原料组织桑葚，植物原料组织和糊精水溶液的质量比为1:9，普鲁兰酶用量为糊精质量的1.7
‰
，麦芽寡糖基海藻糖合成酶用量为糊精质量的3％，麦芽寡糖基海藻糖水解酶用量为糊精质量的4％，糖化酶用量为糊精质量的0.6
‰
，搅拌反应得料液a，搅拌转速为200r/min，搅拌时间为3h；
31.(2)将料液a 59℃加热，进行微波提取，微波功率为800w，提取时间为4min，得料液b；
32.(3)将料液b使用微孔大小为0.45μm滤膜过滤、浓缩至相对密度为1.1，预冻至-40℃，-40℃，1000pa喷雾冷冻干燥至水分含量为0.2％，即得黄酮类提取物，黄酮类化合物收率为3.86％，测得黄酮类提取物中黄酮类化合物含量为44.32％。
33.实施例3
34.提高黄酮类化合物提取收率的方法，包括以下步骤：
35.(1)将浓度为35wt％，de值为9的糊精水溶液调节ph为7.0，39℃加热，加入普鲁兰酶、麦芽寡糖基海藻糖合成酶、麦芽寡糖基海藻糖水解酶、糖化酶和粉碎后过40目筛的植物原料组织酸枣和蓝莓(质量比为1:1)，植物原料组织和糊精水溶液的质量比为1:10，普鲁兰酶用量为糊精质量的2
‰
，麦芽寡糖基海藻糖合成酶用量为糊精质量的4％，麦芽寡糖基海藻糖水解酶用量为糊精质量的6％，糖化酶用量为糊精质量的1
‰
，搅拌反应得料液a，搅拌转速为300r/min，搅拌时间为4h；
36.(2)将料液a 60℃加热，进行微波提取，微波功率为800w，提取时间为6min，得料液b；
37.(3)将料液b使用微孔大小为0.45μm滤膜过滤、浓缩至相对密度为1.2，预冻至-40℃，-50℃，1000pa喷雾冷冻干燥至含水量为0.12％，即得黄酮类提取物，黄酮类化合物收率为3.54％，测得黄酮类提取物中黄酮类化合物含量为43.24％。
38.实施例4
39.提高黄酮类化合物提取收率的方法，包括以下步骤：
40.(1)将浓度为30wt％，de值为7的糊精水溶液调节ph为6.5，40℃加热，加入普鲁兰酶、麦芽寡糖基海藻糖合成酶、麦芽寡糖基海藻糖水解酶、糖化酶和粉碎后过30目筛的植物原料组织枸杞，植物原料组织和糊精水溶液的质量比为1:8，普鲁兰酶用量为糊精质量的1.6
‰
，麦芽寡糖基海藻糖合成酶用量为糊精质量的2％，麦芽寡糖基海藻糖水解酶用量为糊精质量的3％，糖化酶用量为糊精质量的0.5
‰
，搅拌反应得料液a，搅拌转速为150r/min，搅拌时间为2.5h；
41.(2)将料液a 60℃加热，进行微波提取，微波功率为800w，提取时间为4min，得料液b；
42.(3)将料液b使用微孔大小为0.45μm滤膜过滤、浓缩至相对密度为1.05，预冻至-40℃，-50℃，1000pa喷雾冷冻干燥至含水量为0.15％，即得黄酮类提取物，黄酮类化合物收率为3.71％，测得黄酮类提取物中黄酮类化合物含量为42.94％。
43.实施例5
44.提高黄酮类化合物提取收率的方法，包括以下步骤：
45.(1)将浓度为32wt％，de值为8的糊精水溶液调节ph为6.0，40℃加热，加入普鲁兰
酶、麦芽寡糖基海藻糖合成酶、麦芽寡糖基海藻糖水解酶、糖化酶和粉碎后过20目筛的植物原料组织沙棘，植物原料组织和糊精水溶液的质量比为1:10，普鲁兰酶用量为糊精质量的1.9
‰
，麦芽寡糖基海藻糖合成酶用量为糊精质量的3％，麦芽寡糖基海藻糖水解酶用量为糊精质量的5％，糖化酶用量为糊精质量的0.8
‰
，搅拌反应得料液a，搅拌转速为250r/min，搅拌时间为3h；
46.(2)将料液a 58℃加热，进行微波提取，微波功率为800w，提取时间为5min，得料液b；
47.(3)将料液b使用微孔大小为0.45μm滤膜过滤、浓缩至相对密度为1.1，预冻至-40℃，-40℃，1000pa喷雾冷冻干燥至含水量为0.16％，即得黄酮类提取物，黄酮类化合物收率为3.59％，测得黄酮类提取物中黄酮类化合物含量为43.78％。
48.对比例1
49.取粉碎后过40目筛的蔓越莓加入到水中，料液比为1:10，80℃，200r/min搅拌提取5h，0.45μm滤膜微孔过滤后，浓缩至相对密度为1.1，-20℃喷雾冷冻干燥至含水量0.10％，得黄酮类提取物。黄酮类化合物收率为2.17％，测得黄酮类提取物中黄酮类化合物含量为18.82％。
50.对比例2
51.取粉碎后过40目筛的蔓越莓加入到水中，料液比为1:10，80℃，200r/min搅拌提取5h，800w微波提取5min，0.45μm滤膜微孔过滤后，浓缩至相对密度为1.1，-30℃喷雾冷冻干燥至含水量为0.15％，制得黄酮类提取物。黄酮类化合物收率为2.58％，测得黄酮类提取物中黄酮类化合物含量为21.56％。
52.对比例3
53.(1)将浓度为32wt％，de值为8的糊精水溶液调节ph为6.0，40℃加热，加入普鲁兰酶、麦芽寡糖基海藻糖合成酶、麦芽寡糖基海藻糖水解酶、糖化酶和粉碎后过40目筛的植物原料组织沙棘，植物原料组织和糊精水溶液的质量比为1:10，普鲁兰酶用量为糊精质量的1.9
‰
，麦芽寡糖基海藻糖合成酶用量为糊精质量的3％，麦芽寡糖基海藻糖水解酶用量为糊精质量的5％，糖化酶用量为糊精质量的0.8
‰
，搅拌反应得料液a，搅拌转速为300r/min，搅拌时间为3h；
54.(2)将料液a使用微孔大小为0.45μm滤膜过滤、浓缩至相对密度为1.1、60℃干燥至含水量为0.2％，即得黄酮类提取物，黄酮类化合物收率为2.83％，测得黄酮类提取物中黄酮类化合物含量为29.96％。
55.对比例4
56.(1)将浓度为20wt％，de值为5的糊精水溶液调节ph为7.0，60℃加热，加入普鲁兰酶、麦芽寡糖基海藻糖合成酶、麦芽寡糖基海藻糖水解酶、糖化酶和粉碎后过40目筛的植物原料组织蓝莓，植物原料组织和糊精水溶液的质量比为1:20，普鲁兰酶用量为糊精质量的3
‰
，麦芽寡糖基海藻糖合成酶用量为糊精质量的1％，麦芽寡糖基海藻糖水解酶用量为糊精质量的1％，糖化酶用量为糊精质量的0.1
‰
，搅拌反应得料液a，搅拌转速为100r/min，搅拌时间为5h；
57.(2)将料液a 80℃加热，进行微波提取，微波功率为800w，提取时间为10min，得料液b；
58.(3)将料液b使用微孔大小为0.45μm滤膜过滤、浓缩至无水分蒸出，60℃干燥至含水量为0.2％，即得黄酮类提取物，黄酮类化合物收率为2.94％，测得黄酮类提取物中黄酮类化合物含量为27.07％。
59.对比例5
60.取粉碎后过40目筛的蔓越莓加入到75％乙醇水溶液中，料液比为1:10，80℃，200r/min搅拌提取4h，0.45μm滤膜微孔过滤后，浓缩至相对密度为1.1，-20℃喷雾冷冻干燥至含水量为0.16％，制得黄酮类提取物。黄酮类化合物收率为2.76％，测得黄酮类提取物中黄酮类化合物含量为25.65％。
61.结论：综上所述，与传统的热水提取及有机溶剂提取法相比，本发明的提取方法可以明显提高植物组织原料中总黄酮类化合物的提取收率，并且提取物中总黄酮类化合物的含量也较高，可以广泛用于食品，医药，日用化工等领域。
62.对所公开的实施例的说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。