抗结缔组织生长因子抗体及其应用的制作方法

本公开属于生物医药领域，具体涉及结合结缔组织生长因子(connective tissuegrowth factor，ctgf)的抗体及其应用。

背景技术：

1、这里的陈述仅提供与本公开有关的背景信息，而不必然地构成现有技术。

2、ctgf表达由转化生长因子β(tgfβ)超家族的成员诱导。该超家族包括tgfβ-1、-2、和-3、骨形态发生蛋白(bmp)-2和活化素。许多调节剂包括地塞米松、凝血酶、血管内皮生长因子(vegf)和血管紧张肽ii；以及环境刺激包括高血糖和高血压也诱导ctgf的表达(参见例如，franklin(1997)int j biochem cell biol 29：79-89；wunderlich(2000)graefesarch clin exp ophthalmol 238：910-915；denton and abraham(2001)curr opinrheumatol 13：505-511；和riewald(2001)blood 97：3109-3116；riser等人(2000)j amsocnephrol 11：25-38；和国际公开wo 00/13706)。

3、tgfβ对ctgf表达的刺激是快速且长期的，无需持久施加tgfβ(igarashi等人(1993)mol biolcell 4：637-645)。tgfβ通过ctgf启动子中的dna调控元件进行的转录激活，导致的ctgf的增强表达(grotendorst等人(1996)cell growth differ 7：469-480；grotendorst和bradham，u.s.专利no.6,069，006；holmes等人(2001)j biol chem 276：10594-10601)。

4、在肾小球性肾炎、iga肾病、间灶性和节段性肾小球硬化症和糖尿病性肾病中，ctgf的表达被上调(参见例如，riser等人(2000)j am soc nephrol 11：25-38)。在慢性肾小管间质(tubulointerstitial)损伤部位也观察到表达ctgf的细胞数增加，并且ctgf水平与损伤程度相关(ito等人(1998)kidney int 53：853-861)。另外，在与肾实质瘢痕化和硬化相关的各种肾病中，ctgf在肾小球和肾小管间质中的表达也增加。ctgf的升高水平也与肝纤维化、心肌梗死和肺纤维化相关。例如，在患有自发性肺纤维化(ipf)患者中，在生物活检和支气管肺泡灌洗液细胞中，ctgf被强烈上调(ujike等人(2000)biochem biophys rescommun 277：448-454；abou-shady等人(2000)liver 20：296-304；williams等人(2000)jhepatol 32：754-761)。因此，在如上所述的疾病中，ctgf代表了有效的治疗靶。

5、然而，目前仍无有效靶向ctgf的抗体药物应用于临床，仍需研发新的安全、有效的ctgf抗体药物。

技术实现思路

1、本公开提供一种抗ctgf抗体。所述的抗ctgf抗体包括抗人ctgf全长抗体及其抗原结合片段。

2、在一些实施方案中，该抗ctgf抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，其中：

3、i)所述重链可变区包含与如seq id no:6所示的重链可变区相同序列的hcdr1、hcdr2和hcdr3，所述轻链可变区包含与如seq id no:7所示的轻链可变区相同序列的lcdr1、lcdr2和lcdr3；或

4、ii)所述重链可变区包含与如seq id no:8所示的重链可变区相同序列的hcdr1、hcdr2和hcdr3，所述轻链可变区包含与如seq id no:9所示的轻链可变区相同序列的lcdr1、lcdr2和lcdr3。

5、在一些实施方案中，该抗ctgf抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，其中：

6、ii-i)所述重链可变区包含与如seq id no:69所示的重链可变区相同序列的hcdr1、hcdr2和hcdr3，所述轻链可变区包含与如seq id no:70所示的轻链可变区相同序列的lcdr1、lcdr2和lcdr3；或

7、ii-ii)所述重链可变区包含与如seq id no:85所示的重链可变区相同序列的hcdr1、hcdr2和hcdr3，所述轻链可变区包含与如seq id no:70所示的轻链可变区相同序列的lcdr1、lcdr2和lcdr3。

8、在一些实施方案中，该抗ctgf抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，其中：

9、iii)所述重链可变区包含分别如seq id no:10、seq id no:11和seq id no:12所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3，所述轻链可变区包含分别如seq id no:13、seq id no:14和seqid no:15所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3；或

10、iv)所述重链可变区包含分别如seq id no:16、seq id no:17和seq id no:18所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3，所述轻链可变区包含分别如seq id no:19、seq id no:20和seqid no:21所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3。

11、在一些实施方案中，该抗ctgf抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，其中：

12、iv-i)所述重链可变区包含分别如seq id no:71、seq id no:72和seq id no:73所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3，所述轻链可变区包含分别如seq id no:74、seq id no:75和seq id no:76所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3；或

13、iv-ii)所述重链可变区包含分别如seq id no:102、seq id no:103和seq id no:104所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3，所述轻链可变区包含分别如seq id no:74、seq id no:75和seq id no:76所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3。

14、在一些实施方案中，该抗ctgf抗体是鼠源抗体、嵌合抗体或人源化抗体。

15、在一些实施方案中，该抗ctgf抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，其中：

16、(v-1)所述重链可变区，其氨基酸序列与seq id no:6、27、28或29具有至少90％的序列同一性，和所述轻链可变区，其氨基酸序列与seq id no:7、22、23、24、25或26具有至少90％的序列同一性：

17、(vi-1)所述重链可变区，其氨基酸序列与seq id no:8、33、34、35或36具有至少90％的序列同一性，和所述轻链可变区，其氨基酸序列与seq id no:9、30、31或32具有至少90％的序列同一性；或

18、(vi-i)所述重链可变区，其氨基酸序列与seq id no:69、81、82、83、84或85具有至少90％的序列同一性，和所述轻链可变区，其氨基酸序列与seq id no:70、77、78、79或80具有至少90％的序列同一性。

19、在一些实施方案中，该抗ctgf抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，其中：

20、(v)所述重链可变区与seq id no:6、27、28或29中所示的重链可变区具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性，和所述轻链可变区与seq id no:7、22、23、24、25或26中所示的轻链可变区具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性；或

21、(vi)所述重链可变区与seq id no:8、33、34、35或36所示的重链可变区具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性，和所述轻链可变区与seq id no:9、30、31或32所示的轻链可变区具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性；或

22、所述重链可变区与seq id no:6中所示的重链可变区具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性，和所述轻链可变区与seq idno:7中所示的轻链可变区具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性；

23、所述重链可变区与seq id no:27、28或29中所示的重链可变区具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性，和所述轻链可变区与seq id no:22、23、24、25或26中所示的轻链可变区具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性；

24、所述重链可变区与seq id no:8所示的重链可变区具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性，和所述轻链可变区与seq idno:9所示的轻链可变区具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性；

25、所述重链可变区与seq id no:33、34、35或36所示的重链可变区具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性，和所述轻链可变区与seq id no:30、31或32所示的轻链可变区具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性。

26、在一些实施方案中，该抗ctgf抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，其中：

27、(vi-ii)所述重链可变区与seq id no:69、81、82、83、84或85中所示的重链可变区具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性，和所述轻链可变区与seq id no:70、77、78、79或80中所示的轻链可变区具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性。

28、在一些实施方案中，该抗ctgf抗体，其中所述抗ctgf抗体为人源化抗体，所述人源化抗体包含人抗体的框架区或其框架区变体，所述框架区变体在人抗体的轻链框架区和/或重链框架区上分别具有至多10个的回复突变。

29、在一些实施方案中，该抗ctgf抗体，其包含如下所述的重链可变区和轻链可变区：

30、(a)所述轻链可变区，其包含分别如seq id no:13、seq id no:14和seq id no:15所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3，并且包含选自4l、36f、43s、45k、47w、58v或71y中的一个或更多个氨基酸回复突变，和/或所述重链可变区，其包含序列分别如seq id no:10、seq idno:11和seq id no:12所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3，并且包含选自28s、30n、49a、75e、76s、93v、94e或104d中的一个或更多个氨基酸回复突变；或

31、(b)所述轻链可变区，其包含分别如seq id no:19、seq id no:20和seq id no:21所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3的轻链可变区中包含选自36v、44f、46g或49g中的一个或更多个回复突变，和/或所述重链可变区，其包含序列分别如seq id no:16、seq id no:17和seqid no:18所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3，并且包含44g、49g、27f、48l、67l、71k、78v或80f中的一个或更多个回复突变。

32、在一些实施方案中，该抗ctgf抗体，其包含如下所述的重链可变区和轻链可变区：

33、(b-i)轻链可变区，其包含分别如seq id no:74、seq id no:75和seq id no:76所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3，以及选自45p、46w、48y、69s或70y中的一个或更多个回复突变，和重链可变区，其包含分别如seq id no:71、seq id no:72和seq id no:73所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3，以及27f、38k、48i、67k、68a、70l或72f中的一个或更多个回复突变；或

34、(b-ii)轻链可变区，其包含分别如seq id no:74、seq id no:75和seq id no:76所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3，且包含选自45p、46w、48y、69s或70y中的一个或更多个回复突变，和重链可变区，其包含分别如seq id no:102、seq id no:103和seq id no:104所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3，且包含27f、38k、48i、67k、68a、70l或72f中的一个或更多个回复突变。

35、在一些实施方案中，该抗ctgf抗体，其包含如下所示的重链可变区和轻链可变区：

36、(vii)所述重链可变区序列如seq id no:6所示和所述轻链可变区序列如seq idno:7所示；

37、(viii)所述重链可变区序列如seq id no:27、28或29所示和所述轻链可变区序列如seq id no:22、23、24、25或26所示；

38、(ix)所述重链可变区序列如seq id no:8所示和所述轻链可变区序列如seq idno:9所示；或

39、(x)所述重链可变区序列如seq id no:33、34、35或36所示和所述轻链可变区序列如seq id no:30、31或32所示。

40、在一些实施方案中，该抗ctgf抗体，其包含如下所示的重链可变区和轻链可变区：

41、(xi)所述重链可变区，其氨基酸序列如seq id no:69所示；和所述轻链可变区，其氨基酸序列如seq id no:70所示；或

42、(xii)所述重链可变区，其氨基酸序列如seq id no:81、82、83、84或85所示；和所述轻链可变区，其氨基酸序列如seq id no:77、78、79或80所示。

43、在一些实施方案中，该抗ctgf抗体，其包含如下表a、表b和表c所示的重链可变区和轻链可变区：

44、表a：mab147来源的人源化抗体轻链可变区和重链可变区组合

45、

46、

47、表b：mab164人源化抗体轻链可变区和重链可变区组合

48、

49、表c：mab95人源化抗体轻链可变区和重链可变区组合

50、

51、在一些实施方案中，该抗ctgf抗体，其包含如下所示的重链可变区和轻链可变区：

52、(xiii)所述重链可变区，其氨基酸序列如seq id no:27所示；和所述轻链可变区，其氨基酸序列如seq id no:22所示；

53、(xiv)所述重链可变区，其氨基酸序列如seq id no:34所示；和所述轻链可变区，其氨基酸序列如seq id no:30所示；或

54、(xv)所述重链可变区，其氨基酸序列如seq id no:85所示；和所述轻链可变区，其氨基酸序列如seq id no:77所示。

55、在一些实施方案中，该抗ctgf抗体，其中所述抗体进一步包含抗体重链恒定区和轻链恒定区；优选地，所述重链恒定区选自人igg1、igg2、igg3和igg4恒定区及其常规变体，所述轻链恒定区选自人抗体κ和λ链恒定区及其常规变体；更优选地，所述抗体包含序列如seq id no:37或38所示的重链恒定区和序列如seq id no:39或40所示的轻链恒定区。

56、在一些实施方案中，该抗ctgf抗体，其包含：

57、(c)与序列如seq id no:41、43、44、45、46、47或48所示的重链具有至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性的重链和与序列如seq id no:42、49、50、51、52或53所示的轻链具有至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性的轻链；

58、(d)与序列如seq id no:54、56、57、58、59、60、61、62或63所示的重链具有至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性的重链和与序列如seq id no:55、64、65或66所示的轻链具有至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性的轻链；

59、(e)序列如seq id no:41、43、44、45、46、47或48所示的重链和序列如seq id no:42、49、50、51、52或53所示的轻链；或

60、(f)序列如seq id no:54、56、57、58、59、60、61、62或63所示的重链和序列如seqid no:55、64、65或66所示的轻链。

61、在一些实施方案中，该抗ctgf抗体，其包含：

62、(g)与seq id no:86、88、89、90、91、92、93、94、95、96或97具有至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的重链，和与seqid no:87、98、99、100或101具有至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链；或

63、(h)如seq id no:86、88、89、90、91、92、93、94、95、96或97所示的重链和如seq idno:87、98、99、100或101所示的轻链。

64、在一些实施方案中，该抗ctgf抗体，其包含：

65、(j)如seq id no:46所示的重链和如seq id no:49所示的轻链；

66、(k)如seq id no:61所示的重链和如seq id no:64所示的轻链；或

67、(l)如seq id no:97所示的重链和如seq id no:98所示的轻链。

68、本公开另一些方面提供一种抗ctgf抗体，该抗体与如前所述的抗ctgf抗体或其抗原结合片段竞争性结合人ctgf。

69、本公开另一些方面提供一种核酸分子，其编码如前所述的抗ctgf抗体。

70、本公开另一些方面提供一种宿主细胞，其包含如前所述的核酸分子。

71、本公开另一些方面提供一种药物组合物，其含有治疗有效量或预防有效量的如前所述的抗ctgf抗体，或如前所述的核酸分子，以及一种或更多种药学上可接受的载体、稀释剂、缓冲剂或赋形剂。

72、在一些具体的实施方案中，所述治疗有效量或预防有效量为单位剂量的组合物中含有0.1-3000mg或1-1000mg如前所述的抗ctgf抗体。

73、本公开另一些方面提供一种用于免疫检测或测定ctgf的方法，所述方法包括使用如前所述的抗ctgf抗体的步骤。

74、本公开另一些方面提供一种用于免疫检测或测定ctgf的方法，所述方法包括使如前所述的抗ctgf抗体接触受试者或其样品的步骤。

75、本公开另一些方面提供一种试剂盒，其包含如前所述的抗ctgf抗体。

76、本公开另一些方面提供一种治疗与ctgf相关的疾病的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的如前所述的抗ctgf抗体，或如前所述的核酸分子，或如前所述的药物组合物，其中所述疾病优选为纤维性疾病(纤维性疾病优选自发性肺纤维化、糖尿病性肾病、糖尿病性视网膜病骨关节炎、硬皮病、慢性心力衰竭、肝硬化或肾纤维化)、高血压、糖尿病、心肌梗死、关节炎、ctgf相关细胞增殖性疾病、动脉粥样硬化、青光眼或癌症(癌症优选急性淋巴母细胞性白血病、皮肤纤维瘤、乳腺癌、血管脂肪瘤、血管平滑肌瘤、结缔组织生成性癌症、前列腺癌、卵巢癌、结肠直肠癌、胰腺癌、胃肠道癌症或肝癌)。

77、本公开另一些方面提供如前所述的抗ctgf抗体，或如前所述的核酸分子，或如前所述的药物组合物在制备用于治疗ctgf相关疾病的药物中的用途，所述ctgf相关疾病包括纤维性疾病(纤维性疾病优选自发性肺纤维化、糖尿病性肾病、糖尿病性视网膜病骨关节炎、硬皮病、慢性心力衰竭、肝硬化或肾纤维化)、高血压、糖尿病、心肌梗死、关节炎、ctgf相关细胞增殖性疾病、动脉粥样硬化、青光眼或癌症(癌症优选急性淋巴母细胞性白血病、皮肤纤维瘤、乳腺癌、血管脂肪瘤、血管平滑肌瘤、结缔组织生成性癌症、前列腺癌、卵巢癌、结肠直肠癌、胰腺癌、胃肠道癌症或肝癌)。

78、本公开另一些方面提供用于治疗ctgf相关疾病的如前所述的抗ctgf抗体，或编码如前所述的抗ctgf抗体的核酸分子，或如前所述的药物组合物；所述ctgf相关疾病包括纤维性疾病(纤维性疾病优选自发性肺纤维化、糖尿病性肾病、糖尿病性视网膜病骨关节炎、硬皮病、慢性心力衰竭、肝硬化或肾纤维化)、高血压、糖尿病、心肌梗死、关节炎、ctgf相关细胞增殖性疾病、动脉粥样硬化、青光眼或癌症(癌症优选急性淋巴母细胞性白血病、皮肤纤维瘤、乳腺癌、血管脂肪瘤、血管平滑肌瘤、结缔组织生成性癌症、前列腺癌、卵巢癌、结肠直肠癌、胰腺癌、胃肠道癌症或肝癌)。