一种广地龙特征肽及其应用的制作方法

本发明属于生物医药，具体涉及一种广地龙特征肽及其应用。

背景技术：

1、广地龙被收载于2020年版《中国药典》，品种单一，为钜蚓科动物参环毛蚓 pheretima aspergillum（e. perrier）；广地龙主要来源于广东、广西和福建等地。广地龙性咸，味寒，归肝、脾、膀胱经，具有清热定惊、通络、平喘、利尿作用。现代药理研究表明：地龙具有止咳平喘，纤溶抗凝，抗肝纤维化，降压减脂，抗炎镇痛，抗肿瘤，镇静抗惊厥等作用。广地龙物质基础研究表明，蛋白质类、肽类、氨基酸类、核苷类、脂肪酸类、无机元素类等为其主要成分。广地龙质量标准并不完善，广地龙药材、复方广地龙颗粒、含广地龙的成方制剂缺少专属性鉴别、含量测定的方法，药材市场存在以其它地龙混售的现象。

2、有研究表明基于coi序列的dna条形码技术可用于鉴别广地龙药材混伪品，但是中药高温提取过程会影响dna的完整性，进而影响dna条形码鉴定的准确性，相较于dna分子，蛋白质、肽类成分的一级序列信息在高温提取条件下保存较好。本发明通过检测广地龙特征肽来检测广地龙成分，该方法为广地龙质量研究提供了参考与依据，有利于广地龙及其制品质量标准进一步完善。

技术实现思路

1、解决的技术问题：针对上述技术问题，本发明提供了一种广地龙特征肽及其应用，该特征肽专属性强，检测方法操作简单、灵敏度高，可以准确鉴定地龙动物药中是否含有广地龙成分，为保证广地龙及其制品的质量提供科学方法。

2、技术方案：一种广地龙特征肽，所述特征肽为：leu-leu-asn-tyr-val-asp-tyr-lys、glu-phe-thr-glu-glu-gln-leu-arg、leu-gln-ala-glu-leu-ala-arg、ala-leu-glu-thr-gln-val-lys、phe-val-val-leu-lys、ala-arg-asp-asp-pro-his-cys-cys-ser-ala-gln-asp-arg或gly-ile-leu-ala-ala-asp-glu-ser-thr-ala-thr-ile-gly-lys。

3、一种广地龙特征肽在检测广地龙中的应用。

4、优选的，所述应用包括步骤如下：

5、（1）将所述广地龙特征肽配制为溶液作为对照品；

6、（2）将待检测地龙样品用胰蛋白酶酶切后得到酶解液，将酶解液与步骤（1）中的对照品溶液分别注入液质联用质谱仪，采用多反应监测模式进行检测；如果酶解液中检测出与对照品相同的离子对，且离子的保留时间与对照品一致，其子离子与对照品的子离子一致，则所述待检测地龙样品中含有广地龙成分。

7、优选的，所述液质联用仪采用的液相色谱条件为：流动相a为甲酸，流动相b为甲酸乙腈；0~15min，5%b~25%b线性梯度洗脱，15~20min ，25%~50%b线性梯度洗脱，20~21min ，50%~5%b线性梯度洗脱。

8、优选的，所述液质联用仪采用三重四极杆质谱检测。

9、优选的，所述液质联用仪采用的母离子为514.27、526.25、400.73、394.72、303.20、529.88或673.86。

10、优选的，所述待检测地龙样品为地龙动物药，所述地龙动物药包括广地龙、通俗环毛蚓、威廉环毛蚓、栉盲环毛蚓和海南大蚯蚓。

11、有益效果：本发明筛选出的7条广地龙特征肽，具有很高的专属性，可用于鉴定含有广地龙药材的药品。

12、本发明提供的广地龙特征肽的检测方法，操作简单，判断准确，能准确区分广地龙特征肽，有利于广地龙药品的质量控制，对保证含有广地龙药品的质量具有重要的意义。

技术特征：

1.一种广地龙特征肽，其特征在于，所述特征肽为：leu-leu-asn-tyr-val-asp-tyr -lys、glu-phe-thr-glu-glu-gln-leu-arg、leu-gln-ala-glu-leu-ala-arg、ala-leu-glu-thr-gln-val-lys、phe-val-val-leu-lys、ala-arg-asp-asp-pro-his-cys-cys-ser-ala-gln-asp-arg或gly-ile-leu-ala-ala-asp-glu-ser-thr-ala-thr-ile-gly-lys。

2.权利要求1所述的一种广地龙特征肽在检测广地龙中的应用。

3.根据权利要求2所述的一种广地龙特征肽在检测广地龙中的应用，其特征在于，所述应用包括步骤如下：

4.根据权利要求3所述的一种广地龙特征肽在检测广地龙中的应用，其特征在于，所述液质联用仪采用的液相色谱条件为：流动相a为甲酸，流动相b为甲酸乙腈；0~15min，5%b~25%b线性梯度洗脱，15~20min ，25%~50%b线性梯度洗脱，20~21min ，50%~5%b线性梯度洗脱。

5.根据权利要求3所述的一种广地龙特征肽在检测广地龙中的应用，其特征在于，所述液质联用仪采用三重四极杆质谱检测。

6.根据权利要求3所述的一种广地龙特征肽在检测广地龙中的应用，其特征在于，所述液质联用仪采用的母离子为514.27、526.25、400.73、394.72、303.20、529.88或673.86。

7.根据权利要求3所述的一种广地龙特征肽在检测广地龙中的应用，其特征在于，所述待检测地龙样品为地龙动物药，所述地龙动物药包括广地龙、通俗环毛蚓、威廉环毛蚓、栉盲环毛蚓和海南大蚯蚓。

技术总结
本发明公开了一种广地龙特征肽及其应用，属于生物医药技术领域。所述特征肽为：LLNYVDYK、EFTEEQLR、LQAELAR、ALETQVK、FVVLK、ARDDPHCCSAQDR或GILAADESTATIGK。本发明特征肽专属性强，检测方法操作简单、灵敏度高，可以准确鉴定地龙动物药中是否含有广地龙成分，为保证广地龙及其制品的质量提供科学方法。

技术研发人员：文红梅,刘睿,胡靓君,崔小兵,李松,陈盛君
受保护的技术使用者：江阴天江药业有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/14