一种抗肿瘤多肽及应用的制作方法

本技术属于生物医药领域，具体涉及一种抗肿瘤多肽及应用。

背景技术：

1、脊髓灰质炎病毒受体-4(poliovirus receptor-related-4,pvrl-4)，也被称作nectin-4，是一种i型跨膜蛋白，一种肿瘤标记物，是相关免疫球蛋白样粘附分子家族的成员。不同于细胞粘附分子(cell adhesion molecules,cams)中的钙粘蛋白，nectin-4是钙独立的细胞粘附分子igsf成员之一，它主要参与细胞间的粘附并存在于人类上皮细胞和成纤维细胞粘附连接处和神经突触中。nectins家族成员主要有4个(nectin-1,2,3,4)，分别由pvrl1、pvrl2、pvrl3和pvrl4基因编码。前三种(nectin-1,2,3)常见于成人组织中，nectin-4只在胎盘和胚胎组织中表达。但最近研究表明，nectin-4在乳腺癌、肺癌、结肠直肠癌、胰腺癌、卵巢癌等多种恶性肿瘤中过表达，并作为肿瘤相关诱导剂(hatterjee s,sinha s,kundu cn.nectin cell adhesion molecule-4(nectin-4):a potential targetfor cancer therapy.eur jpharmacol.2021nov 15；911:174516.)。

2、nectin-4的过表达与肿瘤进展的各个阶段有关，如增殖、转移、淋巴管和血管生成、上皮细胞向间充质转化等。研究表明，nectin-4通过rac小g蛋白信号和wnt-β-连环蛋白信号激活pi3k-akt信号，促进肿瘤细胞增殖和转移(takano a,et al.identification ofnectin-4oncoprotein as a diagnostic and therapeutic target for lungcancer.cancer res.2009aug 15；69(16):6694-703.)。nectin-4通过调节cxcr4-lyve-1轴，在促进肿瘤诱导的淋巴管生成和淋巴转移中发挥主导作用(sethy c,goutam k,das b,dash sr,kundu cn.nectin-4promotes lymphangiogenesis and lymphatic metastasisin breast cancer by regulating cxcr4-lyve-1axis.vascul pharmacol.2021oct；140:106865.)。nectin4和p95erbb2协同调控hippo信号依赖的sox2基因表达，增强锚定不依赖的t47d细胞增殖(kedashiro s,kameyama t,mizutani k,takai y.nectin-4and p95-erbb2 cooperatively regulate hippo signaling-dependent sox2 gene expression,enhancing anchorage-independent t47d cell proliferation.sci rep.2021apr 1；11(1):7344.)。

3、nectin-4作为一个新颖的抗肿瘤靶点，尤其是作为抗乳腺癌的靶点分子，找到能抑制nectin-4活性的药物，可以有效的抑制肿瘤的发生。乳腺癌，是一类由于基因、激素紊乱等原因导致乳腺组织发生癌变，并不断无限增长的恶性肿瘤。随着乳腺癌的发展，肿瘤细胞可以通过淋巴和血液转移至身体其他部位。乳腺癌是最常见的癌症之一，已位列所有癌症发病率首位。2018年全球新增乳腺癌患者210万例，发病率11.6％。我国平均每年新增乳腺癌患者30.4万人，发病率约7.7％。在45-74岁的女性最高发(bray f,ferlay j,soerjomataram i,siegel rl,torre la,jemal a.global cancer statistics 2018:globocan estimates of incidence and mortality worldwide for 36cancers in185countries.ca cancer jclin.2018nov；68(6):394-424.孙可欣,郑荣寿,张思维,曾红梅,邹小农,陈茹,顾秀瑛,魏文强,赫捷.2015年中国分地区恶性肿瘤发病和死亡分析[j].中国肿瘤,2019,28(01):1-11.)。目前乳腺癌的普遍临床疗法为手术治疗(保乳手术或全乳切除)、内分泌治疗、靶向治疗、化疗和放疗等。其中手术治疗方法是非晚期乳腺癌的治疗方式，且经过手术治疗，部分女性可能会有乳房缺如，会产生一系列心理、生理和体型方面的不良影响，因此乳腺癌患者的术后生存质量是手术治疗方法最需应对的问题。其他的一些治疗方法旨在杀伤肿瘤细胞，但同时对正常细胞也存在较大的毒副作用，这些毒副作用会使得癌症复发率增高且影响健康的组织或器官，因此开发安全、有效及靶标专一的抗乳腺癌药物迫在眉睫。

4、多肽是由肽键连接的三个或三个以上氨基酸分子化合物。作为重要的生命物质之一，肽类物质广泛存在于生命体中调节体内各个系统器官和细胞的功能活动。近年来多肽类药物凭借其高靶向性、低免疫原性、高组织渗透性，及安全性等优点在抗肿瘤药物的研制中备受关注。2019年，全世界抗肿瘤多肽治疗的市场估值为86亿美元，并预期会在未来近十年保持稳定增长的趋势。

5、因此，如何开发一批以nectin-4为抗肿瘤靶点的具有潜在药用价值的多肽药物分子，也成为抗肿瘤药物研制的一大热点问题。

技术实现思路

1、本技术以nectin-4为靶点，通过多肽芯片技术筛选到一批能与nectin-4靶点有效结合的多肽片段，再通过肽段合成、细胞实验验证，最终获得了能有效抑制mda-mb-231(atcc)细胞活性的多肽，所述多肽对mda-mb-231(atcc)细胞活性的抑制效果均优于阳性对照药物，基于此，本技术提供了一种多肽及其在抗肿瘤中的应用。

2、本技术第一方面提供了一种多肽，其氨基酸序列如seq id no.1～7任一项所示；或其氨基酸序列与seq id no.1～7任一项相比具有至少一个或几个氨基酸的取代、插入和/或缺失，所述多肽能够结合nectin-4。

3、在一些实施方式中，所述多肽为修饰后的肽段。

4、本技术第二方面提供了一种多核苷酸，其编码本技术第一方面所提供的多肽。

5、本技术第三方面提供了一种核酸构建体，其包含本技术第二方面所提供的多核苷酸，以及与之可操作地连接、指导所述多肽在宿主细胞中表达的一个或多个调控序列。

6、本技术第四方面提供了一种宿主细胞，其中转化或转染了本技术第三方面所提供的核酸构建体。

7、本技术第五方面提供了一种多肽组合物，其包含本技术第一方面的多肽的至少一种。

8、本技术第六方面提供了一种多肽-载体蛋白偶联物，其包含本技术第一方面的多肽，以及与所述多肽偶联的载体蛋白。

9、本技术第七方面提供了一种药物组合物，其包含本技术第一方面的多肽、本技术第二方面的多核苷酸、本技术第三方面的核酸构建体、本技术第四方面的宿主细胞、本技术第五方面的多肽组合物、或本技术第六方面的多肽-载体蛋白偶联物的至少一种，以及任选地包含佐剂和/或药学上可接受的载体。

10、本技术第八方面提供了本技术第一方面的多肽、本技术第二方面的多核苷酸、本技术第三方面的核酸构建体、本技术第四方面的宿主细胞、本技术第五方面的多肽组合物、本技术第六方面的多肽-载体蛋白偶联物、或本技术第七方面的药物组合物用于制备治疗个体肿瘤或癌症的药物的用途。

11、本技术第九方面提供了本技术第一方面的多肽、本技术第二方面的多核苷酸、本技术第三方面的核酸构建体、本技术第四方面的宿主细胞、本技术第五方面的多肽组合物、本技术第六方面的多肽-载体蛋白偶联物、或本技术第七方面的药物组合物用于治疗个体肿瘤或癌症的用途。

12、本技术第十方面提供了一种治疗个体肿瘤或癌症的方法，其包括向有需要的个体施以有效量的本技术第一方面的多肽、本技术第二方面的多核苷酸、本技术第三方面的核酸构建体、本技术第四方面的宿主细胞、本技术第五方面的多肽组合物、本技术第六方面的多肽-载体蛋白偶联物、或本技术第七方面的药物组合物的至少一种。

13、在一些实施方式中，所述肿瘤或癌症选自肺癌、鼻咽癌、喉癌、胃癌、肝癌、食道癌、肠癌、胰腺癌、胆囊癌、肾癌、膀胱癌、前列腺癌、白血病、淋巴癌、血管瘤、骨癌、宫颈癌、子官癌、卵巢癌、脂肪癌、乳腺癌、脑瘤、鳞癌、皮肤癌、甲状腺癌、唇癌、黑色素癌、舌癌、胸腺癌以及脑或中枢神经系统癌症的至少一种。

14、本技术的有益效果：本技术提供的多肽能够识别、结合nectin-4，抑制nectin-4相关肿瘤(如乳腺癌)细胞活性，从而具有治疗个体肿瘤或癌症的作用；进一步地，本技术所提供的多肽靶标专一，具有低毒，低副作用的特点，一定程度上弥补了当前治疗手段的不足，为癌症(尤其是乳腺癌)的药物开发提供了有潜力的多肽。进一步地，编码所述多肽的多核苷酸、核酸构建体或载体、表达所述多肽的宿主细胞、多肽组合物、多肽-载体蛋白偶联物、药物组合物等也可应用于制备治疗个体肿瘤或癌症的药物。