转基因油菜品系MS11检测用的试剂、试剂盒和检测方法与流程

本发明涉及转基因食品安全检测，尤其涉及转基因油菜品系的检测技术。

背景技术：

1、转基因技术是世界上应用最为迅速的作物育种技术。1995年转基因作物商业化种植面积约170万公顷，但到了2015年，全球增加到1.797亿公顷，增长了将近100倍，相关收益超过了约1500亿美元。从1996年始，转基因作物在全球商业化应用，至2015年已有26种转基因作物共363项转化体获准商业化种植或环境释放。转基因技术本身蕴含的巨大应用潜力和无限商机，吸引各国高度重视和瞩目。和转基因商业潜力一样瞩目的，是转基因作物及相关产品带来的食品安全已知及潜在风险。从2006年以来，已经积累了不少转基因食品安全评估数据，部分结果表明，某些转基因食品可能存在毒性。随着转基因技术的发展与推广，有关转基因食品安全性的争论只会有增无减，且在短期内不会有明确的结论。在此争议性的社会舆论下，推广转基因作物检测技术，加强转基因食物的监管力度，科学有序的推进转基因产业的发展才是最佳策略。

2、转基因油菜品系ms11是由德国拜尔作物科学公司(bayer cropscience)研发，该品系受雄性花粉育性控制系统控制，同时表现出对谷草膦除草剂的耐受性。基于拜耳作物科学公司提供的证据表明，ms11基于其barnase蛋白的雄性不育性状、基于barstar蛋白的雄性不育性状和基于pat蛋白的除草剂耐受性性状，不会赋予油菜ms11品系任何可能的令人担忧的不安全性状，故已在澳大利亚、加拿大、新西兰、菲律宾、韩国、美国获准上市。然而，截至2021年，中国仍然未批准该品系的合法进口，因此仍维持着对ms11及其加工品的严密监控。

3、如今，荧光定量pcr技术以其高灵敏度、高特异性、高检测效率等优点，成为转基因检测的主流方法。研发一种能够实现对转基因油菜品系进行快速、准确检测的方法，满足我国国内以及进出口的农产品与食品中转基因检测与标识的法规需要，是具有重大意义的。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供转基因油菜品系ms11检测用的引物组、试剂、试剂盒和检测方法，以解决现有技术中缺乏针对转基因油菜品系ms11进行快速、准确检测技术的问题。

2、为了达到上述目的本发明采用如下技术方案：

3、本发明提供转基因油菜品系ms11检测用的引物组，包括：正向引物ms11-f，其序列如seq id no.1所示；反向引物ms11-r，其序列如seq id no.2所示；探针ms11-p，其序列如seq id no.3所示；

4、所述探针5’端修饰有荧光基团，3’端修饰有淬灭基团。

5、进一步地，所述探针5’端修饰有fam基团，3’端修饰有mgb基团。

6、本发明还提供转基因油菜品系ms11检测用的试剂，包括所述引物组、pcr buffer、taq dna聚合酶、udg酶。

7、本发明还提供转基因油菜品系ms11检测用的试剂盒，包括所述试剂、空白对照、阳性对照。当然，试剂盒中会附上说明书，用于叙述试剂盒的使用场景及具体步骤。所述试剂既可以预分装在pcr管中，也可以保存在棕色管中。

8、优选地，所述空白对照是超纯水，保存在0.5ml的保存管之中。

9、优选地，所述阳性对照是含有靶标序列的重组质粒，所述阳性对照的重组质粒浓度为10-100pg/μl，保存在0.5ml的保存管之中。

10、优选地，所述重组质粒是由靶标序列插入含有ampicillin抗性的载体上制得，靶标序列如seq id no.4所示。

11、本发明还提供转基因油菜品系ms11检测用的反应体系，所述反应体系共25μl，成分包括pcr buffer、0.04～0.06u/μl taq dna聚合酶、0.01～0.04u/μludg酶、0.2～0.6μm所述的正向引物、0.2～0.6μm所述的反向引物、0.05～0.3μm所述的探针，待测核酸添加体积5μl，余量为超纯水。

12、更优地，所述pcr buffer成分包括45～55mmol/l kcl、8～12mmol/ltris-hcl、1.4～1.6mmol/l mgcl2、90～110μg/ml牛血清白蛋白(bsa)、dntp各190～210μmol/l。

13、更优地，taq dna聚合酶的浓度为0.05u/μl，udg酶的浓度为0.01u/μl，所述的正向引物0.4μm，所述的反向引物0.4μm，所述的探针0.2μm。

14、更优地，所述待测核酸10～50ng/μl。

15、本发明还提供转基因油菜品系ms11检测方法，步骤包括：

16、(1)提取待测样品核酸；

17、(2)构建所述的反应体系；

18、(3)加入阳性对照、空白对照及待测样品核酸后，在实时荧光定量pcr仪上按如下程序进行pcr反应：去污染，37℃，10分钟，1个循环；预变性，95℃，5分钟，1个循环；扩增，95℃，15秒，60℃，1分钟，40个循环；荧光采集；

19、(4)根据扩增曲线及ct值判断待测样品核酸是否含有转基因油菜ms11成分。

20、本发明的优点包括：具有较高的特异性；灵敏度可达101copies/μl(0.1fg/μl)；检测效率高；结果准确可靠，稳定性好。

技术特征：

1.转基因油菜品系ms11检测用的引物组，其特征在于：

2.根据权利要求1所述的转基因油菜品系ms11检测用的引物组，其特征在于：

3.转基因油菜品系ms11检测用的试剂，其特征在于：

4.转基因油菜品系ms11检测用的试剂盒，其特征在于：

5.根据权利要求4所述的转基因油菜品系ms11检测用的试剂盒，其特征在于：

6.根据权利要求5所述的转基因油菜品系ms11检测用的试剂盒，其特征在于：

7.转基因油菜品系ms11检测用的反应体系，其特征在于：

8.根据权利要求7所述的转基因油菜品系ms11检测用的反应体系，其特征在于：

9.根据权利要求7-8任一所述的转基因油菜品系ms11检测用的反应体系，其特征在于：

10.一种应用如权利要求7-9任一所述的反应体系的转基因油菜品系ms11检测方法，其特征在于：

技术总结
本发明公开了转基因油菜品系MS11检测用的试剂、试剂盒和检测方法，试剂包括所述引物组、PCRbuffer、TaqDNA聚合酶、UDG酶，试剂盒包括试剂、空白对照、阳性对照，检测方法步骤包括：提取待测样品核酸、构建反应体系，按反应程序进行反应，结果判读。本发明优点包括：具有较高的特异性和灵敏度、检测结果准确可靠。

技术研发人员：张璜,韦涛,余嘉明,黄惠琳,李鑫,高金艳,林雪金,郭秋霞
受保护的技术使用者：广州双螺旋基因技术有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/11