hsa_circ_0005756在制备诊断胃癌的试剂盒中的应用

本发明属于分子诊断，具体涉及hsa_circ_0005756在制备诊断胃癌的试剂盒中的应用。

背景技术：

1、胃癌是全球第五大常见恶性肿瘤，是我国第二大癌症死亡原因，其确诊依赖于病理活检，早期患者常无特殊症状，临床上确诊时，患者大多已处于晚期，预后较差。因此，急需一种便捷准确的诊断方法来帮助临床进行胃癌的早期诊断。

2、外泌体是一种直径在40～160nm之间的细胞来源的囊泡，其中含有丰富的蛋白质、核酸、脂质等物质，是细胞间通讯的重要媒介。由于其广泛分布于人体多种体液中，近年来基于外泌体的检测成为液体活检的新靶标。

3、circrna是一类具有共价环状结构的新型非编码rna，由于其环状结构，它的稳定性更好，半衰期更长，并且具有组织特异性分布的优势，广泛参与肿瘤的进程，与肿瘤的增殖、凋亡、迁移、耐药、预后息息相关，作为肿瘤的诊断标志物具有良好的应用价值。目前受限于技术，对于血浆外泌体circrna的检测尚不成熟，而外泌体circrna具有稳定性更强、丰度更高的优势，很适合于肿瘤的早期诊断。

4、然而，目前还未有用于胃癌早期诊断的circrna的报道，严重延误了临床上胃癌早诊断、早治疗的时机。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的在于提供一种hsa_circ_0005756在制备诊断胃癌的试剂盒中的应用，所述hsa_circ_0005756在胃癌与健康人群中差异表达，hsa_circ_0005756作为胃癌诊断标志物实现胃癌的早期诊断目的。

2、本发明提供了hsa_circ_0005756作为胃癌诊断标志物在制备诊断胃癌的试剂盒中的应用。

3、本发明提供了一种检测hsa_circ_0005756表达量的试剂在在制备诊断胃癌的试剂盒中的应用。

4、优选的，所述hsa_circ_0005756的核苷酸序列如seq id no：1所示。

5、优选的，所述hsa_circ_0005756的来源为外泌体。

6、优选的，所述检测hsa_circ_0005756表达量的试剂为qpcr扩增hsa_circ_0005756用引物对；

7、所述qpcr扩增hsa_circ_0005756用引物对为核苷酸序列如seq id no:2的正向引物和核苷酸序列如seq id no:3的反向引物。

8、优选的，所述试剂盒还包括qpcr扩增用试剂和/或逆转录试剂。

9、优选的，所述诊断胃癌的方法，包括以下步骤：

10、提取待测样本中外泌体circrna分子；

11、将提取的外泌体rna分子进行逆转录反应，得到cdna；

12、将所述cdna为模板，采用所述qpcr扩增hsa_circ_0005756用引物对进行qpcr扩增，得到扩增结果；

13、根据待测样本的扩增结果判断是否有患胃癌的风险。

14、优选的，所述qpcr扩增的反应体系为20μl，具体包括以下组分：2×aceq qpcrsybr greenmastermix 10μl、10μm正向引物0.4μl、10μm反向引物0.4μl、cdna2μl、rnasefree ddh2o 7.2μl；

15、所述qpcr扩增的反应程序为95℃5min；95℃10s，54℃30s，75℃1s，40个循环；60℃15s，95℃15s。

16、优选的，所述判断的方法为若血浆外泌体中hsa_circ_0005756的相对表达量≥-1.54395时，则该样本有来自胃癌患者的风险，结合临床病理活检的结果综合判断。

17、本发明提供了一种胃癌诊断标志物hsa_circ_0005756的筛选方法，包括以下步骤：

18、分别提取确诊的胃癌患者人群样本和健康人群样本中外泌体；

19、将不同人群来源的外泌体进行circrna芯片检测，得到不同人群的聚类图和火山图；

20、对所述不同人群的聚类图和火山图分析，筛选不同人群内呈显著性差异且差异倍数fc≥2的候选circrna分子；

21、以所述候选circrna分子为靶点，以健康人群和胃癌患者人群的样本为检测对象，分别检测不同候选circrna分子在健康人群或胃炎患者人群和胃癌患者人群中的表达水平差异情况，筛选表达水平呈显著性差异的circrna分子，得到hsa_circ_0005756。

22、优选的，检测hsa_circ_0005756表达量的试剂为qpcr扩增用引物对；

23、所述qpcr扩增用引物对为核苷酸序列如seq id no:2的正向引物和核苷酸序列如seq id no:3的反向引物。

24、本发明提供了hsa_circ_0005756作为胃癌诊断标志物在制备诊断胃癌的试剂盒中的应用。本发明分别以胃镜检查和病理切片为依据由医师确诊的胃癌以及健康人群的样本为研究对象，利用血浆外泌体circrna芯片检测结果，以p值和差异倍数为指标筛选得到在胃癌患者以及健康人群中差异表达的外泌体circrna，即hsa_circ_0005756。然后通过检测胃癌患者人群和健康人群样本中外泌体hsa_circ_0005756的表达量验证该分子在两个不同人群中差异性表达，得到hsa_circ_0005756作为理想的胃癌诊断标志物的结论。本发明还对未知样本中外泌体hsa_circ_0005756表达水平进行检测，根据判断标准预测未知样本是否有患胃癌的风险，并得到预判结果与胃镜检测和病例切片结果一致，说明hsa_circ_0005756作为胃癌诊断标志物在制备诊断胃癌的试剂盒中的应用。

技术特征：

1.hsa_circ_0005756作为胃癌诊断标志物在制备诊断胃癌的试剂盒中的应用。

2.一种检测hsa_circ_0005756表达量的试剂在在制备诊断胃癌的试剂盒中的应用。

3.根据权利要求1或2所述应用，其特征在于，所述hsa_circ_0005756的核苷酸序列如seq id no：1所示。

4.根据权利要求3所述应用，其特征在于，所述hsa_circ_0005756的来源为外泌体。

5.根据权利要求2所述应用，其特征在于，所述检测hsa_circ_0005756表达量的试剂为qpcr扩增hsa_circ_0005756用引物对；

6.根据权利要求5所述应用，其特征在于，所述诊断胃癌的方法，包括以下步骤：

7.根据权利要求6所述应用，其特征在于，所述判断的方法为若血浆外泌体中hsa_circ_0005756的相对表达量≥-1.54395时，则该样本有来自胃癌患者的风险，结合临床病理活检的结果综合判断。

8.一种胃癌诊断标志物hsa_circ_0005756的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：

9.根据权利要求8所述筛选方法，其特征在于，检测hsa_circ_0005756表达量的试剂为qpcr扩增用引物对；

技术总结
本发明提供了hsa_circ_0005756在制备诊断胃癌的试剂盒中的应用，属于分子诊断技术领域。本发明基于血浆外泌体circRNA芯片测序结果，以P值和差异倍数为指标筛选得到hsa_circ_0005756作为候选circRNA分子，并用大量健康人群和胃癌患者样本验证hsa_circ_0005756作为胃癌诊断标志物的可行性。因此，检测hsa_circ_0005756表达量的试剂在制备诊断胃癌的试剂盒中的应用，同时hsa_circ_0005756的筛选方法同样适用于其他疾病的血浆外泌体circRNA标志物，具有广泛应用前景。

技术研发人员：许文荣,张帆,钱晖,王冬丽,邱双洋
受保护的技术使用者：江苏大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/11