Taq酶突变体及其在SNP相关研究上的应用的制作方法

本发明属于生物化学领域，具体涉及taq酶突变体及其在snp相关研究上的应用。

背景技术：

1、单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphisms，snp）主要指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的dna序列多态性。这种变异主要由单个碱基的转换、颠换、插入和缺失等导致。这是人类可遗传的变异中最常见的一种，占所有已知多态性的90%以上。snp具有密度高、更高的遗传稳定性，在人群中主要以二态形式存在，具有易于分型等特点；其作为第三代分子标记物被广泛用于分子遗传学、法医物证检验、疾病诊断和指导个性化用药等众多领域。研究发现：某些snp位点的多态性与个体对药物的敏感性存在关联，通过对相应位点进行snp分型检测可以指导患者根据自身不同基因型进行个性化用药。

2、目前常用的snp检测的方法有测序、pcr荧光探针法、arms-pcr、高分辨率溶解曲线等。pcr荧光探针法因其操作简单、快速、结果易于判读等特点应用最为广泛。pcr荧光探针法需要设计两条在snp位点分别与野生型和突变型互补配对的探针进行基因分型检测。因长度比较长，普通taqman探针容易出现单碱基错配，从而探针也能与模板结合，进而导致扩增结果有非特异，影响结果判读。mgb修饰能与小沟结合而提高探针tm值从而缩短探针长度，提高特异性，在snp分型上得到广泛应用。但mgb探针的成本更高，且同样需要频繁调整，才能筛选到错配探针起峰低、不影响分型判读的探针。

3、因此，亟需开发一款普适强、区分度较大、适用于snp分型的产品以降低研发成本。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种通用性snp扩增酶及其应用。

2、为实现上述发明目的，本发明所采用的技术方案是：一种taq酶突变体，所述taq酶突变体由野生型c-taq酶突变而来，野生型c-taq酶的氨基酸序列如seq id no:1所示，在野生型c-taq酶基础上至少进行如下突变：将所述野生型c-taq酶的506号位点的苏氨酸突变为赖氨酸。

3、相应的，一种taq酶突变体，所述taq酶突变体由野生型c-taq酶突变而来，野生型c-taq酶的氨基酸序列如seq id no:1所示，在野生型c-taq酶基础上至少进行如下突变：将所述野生型c-taq酶的506号位点的苏氨酸突变为赖氨酸，将所述野生型c-taq酶的510号位点的甘氨酸突变为精氨酸。

4、相应的，所述taq酶突变体在snp研究中的非疾病诊断、治疗上的应用。

5、优选的，在区分单碱基错配中的应用。

6、优选的，在筛选mgb探针中的应用。

7、本发明具有以下有益效果：本发明通过对野生型c-taq酶的关键活性位点进行的分析并进行定点突变，并使用高低gc目的片段的多对snp分型引物探针对候选突变酶进行测试，筛选到两个对单碱基错配有更好区分能力的酶。本发明提供的突变体酶的单碱基错配探针起峰更低，分型准确度更高。本发明提供的突变体酶对中高低gc位点都能很好扩增，普适应广；使用这些突变体酶可以有效节省筛选mgb探针的成本。

技术特征：

1.一种taq酶突变体，其特征在于：所述taq酶突变体由野生型c-taq酶突变而来，野生型c-taq酶的氨基酸序列如seq id no:1所示，在野生型c-taq酶基础上至少进行如下突变：将所述野生型c-taq酶的506号位点的苏氨酸突变为赖氨酸。

2.一种taq酶突变体，其特征在于：所述taq酶突变体由野生型c-taq酶突变而来，野生型c-taq酶的氨基酸序列如seq id no:1所示，在野生型c-taq酶基础上至少进行如下突变：将所述野生型c-taq酶的506号位点的苏氨酸突变为赖氨酸，将所述野生型c-taq酶的510号位点的甘氨酸突变为精氨酸。

3.权利要求1或2所述taq酶突变体在snp研究中的非疾病诊断、治疗上的应用。

4.根据权利要求3所述应用，其特征在于：在区分单碱基错配中的应用。

5.根据权利要求4所述应用，其特征在于：在筛选mgb探针中的应用。

技术总结
本发明属于生物化学领域，具体涉及Taq酶突变体及其在SNP相关研究上的应用。具体技术方案为：一种Taq酶突变体，所述Taq酶突变体由野生型C‑Taq酶突变而来，野生型C‑Taq酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，在野生型C‑Taq酶基础上至少进行如下突变：将所述野生型C‑Taq酶的506号位点的苏氨酸突变为赖氨酸。本发明通过对野生型C‑Taq酶的关键活性位点进行的分析并进行定点突变，并使用高低GC目的片段的多对SNP分型引物探针对候选突变酶进行测试，筛选到两个对单碱基错配有更好区分能力的酶。本发明提供的突变体酶的单碱基错配探针起峰更低，分型准确度更高。本发明提供的突变体酶对中高低GC位点都能很好扩增，普适应广；使用这些突变体酶可以有效节省筛选MGB探针的成本。

技术研发人员：宋东亮,黄淑云,柴常升,顾玲,卢瑶,孙晓亮,李俊辉
受保护的技术使用者：翌圣生物科技（上海）股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/11