用于成像TAU蛋白聚集体的化合物的制作方法

用于成像tau蛋白聚集体的化合物
1.申请人于2017年7月21日提交发明名称为“用于成像tau蛋白聚集体的化合物”的pct申请pct/ep2017/068509，所述pct申请于2019年1月21日进入中国国家阶段，申请号为201780045187.9。本技术为该中国申请的分案申请。
技术领域
2.本发明涉及新的式(ii)化合物，其可用于选择性检测与tau聚集体相关的病症和异常如阿尔茨海默氏病(ad)和其他tau病变，例如，使用正电子发射断层摄影(pet)成像。本发明还涉及可用于制备这类成像化合物的中间体。使用上述化合物的诊断组合物以及成像或诊断方法和可用于制备放射性药物制品的试剂盒也是本发明的主题。


背景技术：

3.阿尔茨海默病是一种神经系统疾病，主要被认为是由淀粉样蛋白斑块引起的，淀粉样蛋白斑块是大脑或眼睛中淀粉样蛋白-β(aβ)聚集体异常沉积的细胞外积聚。ad中的其他主要神经病理学标志是细胞内神经原纤维缠结(nft)，其源自过度磷酸化的tau(微管蛋白相关单位)蛋白、磷酸化tau或病理性tau及其构象异构体的聚集。ad与许多神经退行性tau病变尤其是特定类型的额颞叶痴呆(ftd)共享这种病理。在ad脑中，tau病理学(tau病变)发展晚于淀粉样蛋白病理学，但aβ蛋白是否是ad中的致病因子(这构成了所谓的淀粉样蛋白级联假说的本质)仍然存在争议(hardy等人,science 1992,256,184-185,以及最近，musiek等人,nature neurosciences2015,18(6),800-806,“three dimensions of the amyloid hypothesis:time,space and'wingmen'”)。
4.目前，诊断ad的唯一明确方法是活组织检查或通过个体死亡后尸检材料的组织学分析来识别脑组织中的斑块和缠结。除ad外，tau在其他(非ad)神经退行性疾病中起重要作用。这种非ad tau病变包括例如核上性麻痹(psp)、皮克病(pid)和皮质基底节变性(cbd)。
5.因此，对体内tau病理学的检测存在很大兴趣。tau pet成像有望对人类大脑中tau聚集体的沉积提供新的见解，并可能允许非侵入性地检查tau病理学的程度，量化tau沉积随时间的变化，评估其与认知的相关性并分析抗tau疗法的功效。最近的综述参见shah等人,j nucl med.2014,55(6),871-874:“molecular imaging insights into neurodegeneration:focus on tau pet radiotracers”,jovalekic等人,ejnmmi radiopharmacy and chemistry 2016,1:11,“new protein deposition tracers in the pipeline”,和ariza等人,j med chem 2015,58(11),4365-82:“tau pet imaging:past,present and future”。此外，近期还出版了一些专利申请，例如：wo 2013/176698、wo 2009/102498、wo 2011/119565、us 8,932,557 b2和us 8,691,187,b2(siemens medical solutions,lilly)、wo 2012/067863和wo 2012/068072(ge healthcare)wo 2014/026881、wo 2014/177458、wo 2014/187762、wo 2015/044095、wo 2015/052105、wo 2015/173225(hoffmann-la roche ag)、wo 2015/188368(merck sharp&dohme)和wo 2016/124508(ucb biopharma sprl)，它声称用于tau成像的新化合物。
selective tau tracer,binds with nanomolar affinity to monoamine oxidase a)。
14.据报道，无论患者的诊断如何，化合物
18
f-1在脑的基底神经节的部分例如纹状体和黑质中具有相当强的信号。皮质中
18
f-1的信号未达到“稳态”(时间窗口，期间在目标区域中的结合与参照组织(即小脑)中的结合的比率是稳定的)。此外，
18
f-1在各种脑区域的动力学是不同的，并且在150分钟的扫描期间从未稳定(s.baker,human amyloid imaging meeting,2015)。
15.通过放射自显影证实化合物
18
f-1与ad脑切片的结合。然而，化合物
18
f-1在与具有非ad tau病变的病理学的脑切片的结合中显示出局限性a)lowe vj,等人an autoradiographic evaluation of av-1451tau pet in dementia.acta neuropathologica communications.2016；4:58；b)marquie m,等人validating novel tau positron emission tomography tracer[f-18]-av-1451(t807)on postmortem brain tissue.annals of neurology.2015；78:787；c)gomez f,等人quantitative assessment of[
18
f]av-1451distribution in ad,psp and pid post-mortem brain tissue sections relative to that of the anti-tau antibody at8.journal of nuclear medicine.2016；57,s2:348，d)sander k,等人characterization of tau positron emission tomography tracer av1451 binding to postmortem tissue in alzheimer’s disease,primary tauopathies,and other dementias.alzheimers dementia 2016,12(11):116-1124e)smith r,等人increased basal ganglia binding of 18
f-av-1451in patients with progressive supranuclear palsy.movement disorders 2016。
[0016]
临床上，
18
f-1似乎对psp个体中tau的检测价值有限a)smith r等人,tau neuropathology correlates with fdg-pet,but nor with av-1451-pet,in progressive supranuclear palsy.acta neuropathologica 2017,133:149-151；b)smith r,等人increased basal ganglia binding of 18
f-av-1451in patients with progressive supranuclear palsy.movement disorders 2017,32(1),108-114。
[0017]
这些研究的最终结论表明，t807/av1451可能无法可靠地区分psp患者和对照。这主要归因于中脑结构如基底神经节的非特异性结合增加。在大脑皮层和白质中观察到的摄取并未反映psp中的tau病理学。
[0018]
化合物
18
f-2公开在wo 2015/052105中。
[0019][0020]
wo 2015/052105仅公开了一种
18
f-标记的化合物和相应的氚标记的化合物。该化合物包含2,5-二取代的吡啶部分(化合物
18
f-2)。wo2015/052105未提供关于与非ad tau病变中的tau-同种型结合，与mao a结合(或关于对tau的选择性的其它方面)、脑摄取、脑冲洗(washout)或健康脑中的保留的任何数据或关于体内脱氟任何数据。
[0021]
18
f-2被发现不与非ad tau病变例如皮克病(pid)和进行性核上性麻痹(psp)患者的脑组织结合(honer m等人,in vitro binding of 3
h-ro6958948,3h-av-1451,3h-thk5351 and 3
h-t808 to tau aggregates in non-ad tauopathies.human amyloid imaging 2017,摘要99)。
[0022]
鉴于上述现有技术，本发明的一个目的是提供对tau具有高亲和力和选择性的化合物，因此适合作为pet成像剂。优选地，本发明的化合物显示出对tau聚集体的高亲和力，与脑中的其他靶标相比对病理性tau的高选择性和没有脱氟的有利的药代动力学性质。期望的tau pet成像剂应结合3r和4r tau以解决ad和非ad tau病变，包括pid、cbd和psp。


技术实现要素：

[0023]
因此，本发明涉及以下项目：
[0024]
1.式(ii)化合物及其可药用盐、水合物、溶剂化物、前药和多晶型物；
[0025][0026]
其中
[0027]
r1选自
18
f、f和lg；
[0028]
r2是h或pg；
[0029]
pg是保护基团；
[0030]
lg是离去基团，
[0031]
其中式ii的任一个h都可以是h、2h或3h。
[0032]
2.项1所述的化合物，其是
[0033][0034]
3.项1所述的化合物，其是
[0035][0036]
4.项1、2或3所述的化合物，其中r1是
18
f且r2是h。
[0037]
5.项1、2或3所述的化合物，其中r1是f且r2是h。
[0038]
6.项1、2或3所述的化合物，其中r1是lg且r2是h或pg。
[0039]
7.项1、2或3所述的化合物，其中r1是lg且r2是h。
[0040]
8.项1、2或3所述的化合物，其中r1的lg且r2是pg。
[0041]
9.项1、2、3、6、7或8所述的化合物，其中lg是硝基、卤素或三甲基铵。
[0042]
10.项9所述的化合物，其中lg是硝基或三甲基铵。
[0043]
11.项1、2、3、6、8、9或10所述的化合物，其中pg是叔丁氧基羰基(boc)、三苯基甲基(trityl)或二甲氧基三苯甲基(dmt)。
[0044]
12.项11所述的化合物，其中pg是叔丁氧基羰基(boc)。
[0045]
13.项1、2或3所述的化合物，其中化合物被可检测地标记。
[0046]
14.项13所述的化合物，其中可检测的标记选自2h、3h和
18
f。
[0047]
15.项14所述的化合物，其中可检测的标记是
18
f。
[0048]
16.一种诊断组合物，其包含项4、13、14或15中任一项所定义的化合物和任选的可药用载体、稀释剂、辅料或赋形剂。
[0049]
17.项4或15所定义的化合物，其用于诊断。
[0050]
18.项4或15所定义的化合物，其用于tau聚集体的成像，特别是用于tau聚集体的正电子发射断层摄影成像。
[0051]
19.项4或15所定义的化合物，其用于诊断与tau聚集体相关的病症或用于诊断tau病变，特别是其中诊断通过正电子发射断层摄影进行。
[0052]
20.如项19所述使用的化合物，其中tau病变是3r tau病变。
[0053]
21.如项19所述使用的化合物，其中tau病变是4r tau病变。
[0054]
22.如项19所述使用的化合物，其中所述病症选自阿尔茨海默病(ad)、家族性ad、creutzfeldt-jacob病、拳击痴呆症(dementia pugilistica)、唐氏(down’s)综合征、病、包涵体肌炎、朊蛋白脑淀粉样血管病、创伤性脑损伤(tbi)、肌萎缩侧索硬化症、关岛帕金森病-痴呆综合征(parkinsonism-dementia complex of guam)、伴有神经原纤维缠结的非关岛运动神经元疾病、嗜银颗粒病、皮质基底节变性(cbd)、伴有钙化的弥漫性神经原纤维缠结、与17号染色体相关的伴有帕金森综合征的额颞叶痴呆、hallervorden-spatz疾病、多系统萎缩、尼曼-皮克病(niemann-pick)c型、苍白球-脑桥-黑质变(pallido-ponto-nigral degeneration)、皮克病(pid)、进行性皮质下神经胶质增生、进行性核上性麻痹(psp)、亚急性硬化性全脑炎、仅缠结性痴呆、脑炎后帕金森病、肌强直性营养不良、tau全脑病(panencephalopathy)、具有星形胶质细胞的ad样病、某些朊蛋白疾病(具有tau的gss)、lrrk2突变、慢性创伤性脑病、家族性英国痴呆、家族性丹麦痴呆、额颞叶变性、瓜德罗普(guadeloupean)帕金森病、具有脑铁积聚的神经变性、slc9a6相关智力迟钝、具有球状神经胶质包涵体的白质tau病变、创伤性应激综合征、癫痫、路易体痴呆(lbd)、伴有淀粉样变性的遗传性脑出血(荷兰型)、轻度认知障碍(mci)、多发性硬化症、帕金森病、hiv相关性痴呆、成人发病型糖尿病、老年心脏淀粉样变性、内分泌肿瘤、青光眼、眼部淀粉样变性、原发性视网膜变性、黄斑变性(如年龄相关性黄斑变性(amd))、视神经玻璃疣、视神经病变、视神经炎和格子状营养不良(lattice dystrophy)；优选阿尔茨海默病。
[0055]
23.如项22所述使用的化合物，其中所述病症是阿尔茨海默病(ad)。
[0056]
24.如项22所述使用的化合物，其中所述病症是帕金森病或非典型帕金森症。
[0057]
25.如项22所述使用的化合物，其中所述病症是进行性核上性麻痹(psp)。
[0058]
26.如项22所述使用的化合物，其中所述病症是皮克病(pid)。
[0059]
27.如项18-26中任一项所述使用的化合物，其中tau聚集体在脑中或在眼睛中成像，优选其中可检测的标记是
18
f并且成像是正电子发射断层摄影术。
[0060]
28.一种tau聚集体的成像方法，特别是tau聚集体的正电子发射断层摄影成像方法，其中将有效量的如项4或15中定义的化合物向患者施用。
[0061]
29.一种诊断与tau聚集体或tau病变相关的病症的方法，其中将有效量的如项4或15中所定义的化合物施用于患者，特别是其中诊断通过正电子发射断层摄影进行。
[0062]
30.项29所述的方法，其中tau病变是3r tau病变。
[0063]
31.项29所述的方法，其中tau病变是4r tau病变。
[0064]
32.项29所述的方法，其中所述病症选自阿尔茨海默病(ad)、家族性ad、creutzfeldt-jacob病、拳击痴呆症、唐氏综合征、病、包涵体肌炎、朊蛋白脑淀粉样血管病、创伤性脑损伤、肌萎缩侧索硬化症、关岛帕金森病-痴呆综合征、伴有神经原纤维缠结的非关岛运动神经元疾病、嗜银颗粒病、皮质基底节变性、伴有钙化的弥漫性神经原纤维缠结、与17号染色体相关的伴有帕金森综合征的额颞叶痴呆、hallervorden-spatz疾病、多系统萎缩、尼曼-皮克病c型、苍白球-脑桥-黑质变性、皮克病(pid)、进行性皮质下神经胶质增生、进行性核上性麻痹(psp)、亚急性硬化性全脑炎、仅缠结性痴呆、脑炎后帕金森病、肌强直性营养不良、tau全脑病、具有星形胶质细胞的ad样病、某些朊蛋白疾病(具有tau的gss)、lrrk2突变、慢性创伤性脑病、家族性英国痴呆、家族性丹麦痴呆、额颞叶变性、瓜德罗普帕金森病、具有脑铁积聚的神经变性、slc9a6相关智力迟钝、具有球状神经胶质包涵体的白质tau病变、创伤性应激综合征、癫痫、路易体痴呆(lbd)、伴有淀粉样变性的遗传性脑出血(荷兰型)、轻度认知障碍(mci)、多发性硬化症、帕金森病、hiv相关性痴呆、成人发病型糖尿病、老年心脏淀粉样变性、内分泌肿瘤、青光眼、眼部淀粉样变性、原发性视网膜变性、黄斑变性(如年龄相关性黄斑变性(amd))、视神经玻璃疣、视神经病变、视神经炎和格子状营养不良；优选阿尔茨海默病。
[0065]
33.项32所述的方法，其中所述病症是阿尔茨海默病(ad)。
[0066]
34.项32所述的方法，其中所述病症是帕金森病或非典型帕金森症。
[0067]
35.项32所述的方法，其中所述病症是进行性核上性麻痹(psp)。
[0068]
36.项32所述的方法，其中所述病症是皮克病(pid)。
[0069]
37.如项28-36中任一项所述的方法，其中tau聚集体在脑中或在眼睛中成像，优选其中可检测的标记是
18
f并且成像是正电子发射断层摄影术。
[0070]
38.如项4或15中所定义的化合物在制备用于tau聚集体成像、特别是用于tau聚集体的正电子发射断层摄影成像的诊断剂中的用途。
[0071]
39.如项4或15中所定义的化合物在制备用于诊断与tau聚集体相关的病症或用于诊断tau病变的诊断剂中的用途，特别是其中诊断通过正电子发射断层摄影进行。
[0072]
40.项39所述的用途，其中tau病变是3r tau病变。
[0073]
41.项39所述的用途，其中tau病变是4r tau病变。
[0074]
42.项39所述的用途，其中所述病症选自阿尔茨海默病(ad)、家族性ad、creutzfeldt-jacob病、拳击痴呆症、唐氏综合征、
病、包涵体肌炎、朊蛋白脑淀粉样血管病、创伤性脑损伤、肌萎缩侧索硬化症、关岛帕金森病-痴呆综合征、伴有神经原纤维缠结的非关岛运动神经元疾病、嗜银颗粒病、皮质基底节变性、伴有钙化的弥漫性神经原纤维缠结、与17号染色体相关的伴有帕金森综合征的额颞叶痴呆、hallervorden-spatz疾病、多系统萎缩、尼曼-皮克病c型、苍白球-脑桥-黑质变性、皮克病(pid)、进行性皮质下神经胶质增生、进行性核上性麻痹(psp)、亚急性硬化性全脑炎、仅缠结性痴呆、脑炎后帕金森病、肌强直性营养不良、tau全脑病、具有星形胶质细胞的ad样病、某些朊蛋白疾病(具有tau的gss)、lrrk2突变、慢性创伤性脑病、家族性英国痴呆、家族性丹麦痴呆、额颞叶变性、瓜德罗普帕金森病、具有脑铁积聚的神经变性、slc9a6相关智力迟钝、具有球状神经胶质包涵体的白质tau病变、创伤性应激综合征、癫痫、路易体痴呆(lbd)、伴有淀粉样变性的遗传性脑出血(荷兰型)、轻度认知障碍(mci)、多发性硬化症、帕金森病、hiv相关性痴呆、成人发病型糖尿病、老年心脏淀粉样变性、内分泌肿瘤、青光眼、眼部淀粉样变性、原发性视网膜变性、黄斑变性(如年龄相关性黄斑变性(amd))、视神经玻璃疣、视神经病变、视神经炎和格子状营养不良；优选阿尔茨海默病。
[0075]
43.项42所述的用途，其中所述病症是阿尔茨海默病(ad)。
[0076]
44.项42所述的用途，其中所述病症是帕金森病或非典型帕金森症。
[0077]
45.项42所述的用途，其中所述病症是进行性核上性麻痹(psp)。
[0078]
46.项42所述的用途，其中所述病症是皮克病(pid)。
[0079]
47.如项38-46中任一项所述的方法，其中tau聚集体在脑中或在眼睛中成像，优选其中可检测的标记是
18
f并且成像是正电子发射断层摄影术。
[0080]
48.项5的化合物作为分析参照的用途。
[0081]
49.项5的化合物作为体外筛选工具的用途。
[0082]
50.一种制备如项4所定义的化合物的方法，包括将项6中定义的化合物与[
18
f]氟化剂反应，其中该方法还包括裂解保护基团pg(如果存在的话)。
[0083]
51.如项50所述的方法，其中[
18
f]氟化剂选自k
18
f、h
18
f、cs
18
f、na
18
f和
18
f的四(c1–6烷基)铵盐。
[0084]
52.制备如项16中所定义的诊断组合物的方法，包括将项6中所定义的化合物与[
18
f]氟化剂反应，其中该方法还包括裂解保护基团pg(如果存在的话)，并随后任选地混合可药用载体、稀释剂、辅料或赋形剂。
[0085]
53.一种用于制备放射性药物制品的试剂盒，所述试剂盒包括密封的小瓶，所述小瓶含有预定量的如项6中所定义的化合物。
[0086]
54.如项53所述的试剂盒，其进一步包含至少一种选自以下的组分：反应溶剂、固相萃取柱、用于裂解保护基团的试剂、用于纯化的溶剂、用于制剂的溶剂和用于制剂的可药用载体、稀释剂、辅料或赋形剂。
[0087]
55.一种收集用于诊断样品或患者中与tau聚集体相关的病症的数据的方法，其包括：
[0088]
(a)使怀疑含有tau聚集体的样品或特定身体部位或身体区域与项13-15中所定义的化合物接触；
[0089]
(b)使所述化合物与tau聚集体结合；
[0090]
(c)检测与tau聚集体结合的化合物；和
3a、f-3b、
18
f-3a和
18
f-3b)与现有技术的化合物
18
f-1或
18
f-2相比具有显著改善的性质。
[0117][0118]
本文中，f-3a和f-3b共同地称作"f-3"，且
18
f-3a和
18
f-3b将共同地称作"
18
f-3"。其中，化合物f-3a和
18
f-3a是优选的。
附图说明
[0119]
图1：用化合物
18
f-3a对ad和hc脑切片进行放射自显影。在ad脑切片中，可检测到强烈的点状染色，其可以通过添加过量的相应冷化合物来阻断。在健康对照(hc)切片中，没有可见的特定信号。
[0120]
图2：描绘了小鼠中化合物
18
f-1、
18
f-2和
18
f-3a从正常脑的活性的清除的冲洗(washout)曲线。
[0121]
图3：在非痴呆的人类对照个体中
18
f-3a的脑摄取和洗除。
[0122]
图4：a)具有轴向、矢状和冠状投影的非痴呆的人类对照个体的
18
f-3a pet图像，b)具有轴向、矢状和冠状投影的ad个体的
18
f-3a pet图像。
[0123]
图5：psp个体中的
18
f-3a pet图像，轴向、矢状和冠状投影：a)在黑质的水平，b)在苍白球的水平。
[0124]
发明详述
[0125]
本发明涉及可检测标记的式(ii)化合物
[0126][0127]
优选的本发明化合物是
[0128][0129]
更加优选的本发明化合物是
[0130][0131]
甚至更加优选的本发明化合物是
[0132][0133]
甚至更加优选的本发明化合物是
[0134][0135]
可检测标记的本发明化合物可用于选择性检测与tau聚集体相关联的病症和异常，如阿尔茨海默病和其他tau病变，例如，通过使用正电子发射断层摄影(pet)成像。本发明还涉及可用于制备此类成像化合物的中间体。本发明化合物对tau具有高亲和力并且与阿尔茨海默氏病(ad)以及非ad tau病变例如进行性核上性麻痹(psp)和皮克病(pid)中都存在的tau-同种型结合。由于它们对淀粉样蛋白-β和mao a具有低亲和力，因此它们可以用作结合病理性tau的高选择性分子探针，从而避免检测其他病变和误诊。
[0136]
本发明
18
f标记的化合物还导致健康大脑中的低信号，从而它们可以减少背景信号干扰，从而提供低检测限。
[0137]
由于它们良好的大脑摄取，从健康大脑的快速洗除，健康大脑中的低的长期保留以及缺乏体内脱氟作用，本发明
18
f标记的化合物提供了良好的信噪比。
[0138]
此外，本发明化合物可以容易地以高产率可检测地标记，例如用
18
f标记。
[0139]
定义
[0140]
本文所用的术语“保护基团”(pg)是适用于在设想的化学反应过程中保护胺基团的任何保护基团。合适的保护基团的实例是本领域技术人员公知的。合适的保护基团例如在教科书greene和wuts，protecting groups in organic synthesis，第三版，第494-653页中所讨论，其通过引用并入本文。保护基团可以选自氨基甲酸酯、酰胺、酰亚胺、n-烷基胺、n-芳基胺、亚胺、烯胺、硼烷、n-p保护基、n-亚磺酰基、n-磺酰基和n-甲硅烷基。保护基团(pg)的具体优选实例是苄氧羰基(cbz)、对甲氧基苄基羰基(moz或meoz)、叔丁氧基羰基(boc)、9-芴基甲氧基羰基(fmoc)、苄基(bn)、对甲氧基苄基(pmb)、3,4-二甲氧基苄基(dmpm)、对甲氧基苯基(pmp)、三苯基甲基(三苯甲基)、甲氧基苯基二苯基甲基(mmt)或二甲氧基三苯甲基(dmt)。更优选的保护基pg的实例包括叔丁氧基羰基(boc)、二甲氧基三苯甲基(dmt)和三苯基甲基(三苯甲基)。保护基pg的一个更优选的实例是叔丁氧基羰基(boc)。
[0141]
本文所用的术语“离去基团”(lg)是任何离去基团，并且意指原子或原子组能够被另一个原子或原子组替换。实例如以下中所列：synthesis(1982)，第85-125页，表2，carey and sundberg，organische synthese，(1995)，第279-281页，表5.8；或netscher，recent res.dev.org.chem.，2003,7,71-83，方案1、2、10和15等)。(coenen，fluorine-18labeling methods：features and possibilities of basic reactions，(2006)，in：schubiger p.a.,friebe m.,lehmann l.,(eds),pet-chemistry-the driving force in molecular imaging.springer,berlin heidelberg，第15-50页，明确：第25页方案4，第28页方案5，第30页表4，第33页图7)。优选地，“离去基团”(lg)是硝基、卤素或三甲基铵。更优选地，“离去基团”(lg)是硝基或三甲基铵。在一个优选的实施方案中，“离去基团”(lg)是硝基。在另一个优选的实施方案中，“离去基团”(lg)是三甲基铵。
[0142]
本文所用的tau是指主要在神经元中发现的高度可溶的微管结合蛋白，包括主要的6种同种型、切割或截短形式以及其他修饰形式，例如由磷酸化、糖基化、糖化、脯氨酰异构化、硝化、乙酰化、聚胺化、泛素化，sumo(sumoylation)和氧化。如本文所用的病理性tau或tau聚集体(神经原纤维缠结，nft)是指含有成对螺旋长丝和直丝的过度磷酸化tau蛋白的不溶性聚集体。他们的存在是ad和已知为tau病变的其他疾病的标志。
[0143]
术语“多晶型物”是指本发明化合物的各种晶体结构。这可以包括但不限于晶体形态(和无定形材料)和所有晶格形式。本发明的盐可以是结晶的并且可以作为多于一种多晶型物存在。
[0144]
本发明还包括本发明化合物的溶剂化物、水合物以及无水形式。溶剂化物中包含的溶剂没有特别限制，可以是任何可药用溶剂。实例包括水和c
1-4
醇(例如甲醇或乙醇)。
[0145]
如下文在本发明的说明书和权利要求中所使用的，术语“前药”是指由于体内生物转化而释放活性母体药物的任何共价键合的化合物。一般性描述前药的goodman和gilman的参考文献(the pharmacological basis of therapeutics,第8版,mcgraw-hill,int.ed.1992,"biotransformation of drugs",p 13-15)在此引入作为参考。
[0146]
如下文在本发明的说明书和权利要求中所用，术语“可药用盐”涉及所公开化合物的无毒衍生物，其中母体化合物通过制备其无机和有机酸的盐来修饰。无机酸包括但不限于酸，例如羧酸、盐酸、硝酸或硫酸。有机酸包括但不限于酸，例如脂族酸、脂环族酸、芳族酸、芳脂族酸、杂环酸、羧酸和磺酸。本发明的可药用盐可以通过常规化学方法由含有碱性
或酸性部分的母体化合物合成。一般而言，此类盐可以通过使这些化合物的游离酸或碱形式与化学计量的适当的碱或酸在水中或在有机溶剂中或在两者的混合物中反应来制备。合适的盐的列表可以在remington’s pharmaceutical sciences,第18版,mack publishing company,easton,pa,1990,p.1445中找到，其公开内容在此引入作为参考。
[0147]“可药用”定义为在合理的医学判断范围内适合与人类和动物组织接触而没有过多毒性、刺激性、过敏反应或其他问题或并发症、具有合理的利益/风险比的那些化合物、材料、组合物和/或剂型。
[0148]
本发明中的患者或个体通常是动物，特别是哺乳动物，更特别是人。
[0149]
tau基因含有16个外显子，主要的tau蛋白同种型由其中的11个编码。外显子10的可变剪接产生tau同种型，其中三个(外显子10缺失)或四个(外显子10存在)重复结构域，分别称为3r和4r tau(a.andreadis等人,biochemistry 31,(1992)10626
–
10633；m.tolnay等人,iubmb life,55(6):299
–
305,2003)。在阿尔茨海默病中，3r和4r同种型的比例相似。与此相反，在一些tau病变中，主要存在两种同种型中的一种。本文中，术语“3r tau病变”是指tau病变(例如皮克病(pid))，其中主要存在3r同种型。本文中，术语“4r tau病变”是指tau病变(例如进行性核上性麻痹(psp)和皮质基底节变性(cbd))，其中主要存在4r同种型。
[0150]
除非另有说明，否则“定义”部分中给出的优选定义适用于本文所述的所有实施方案。
[0151]
诊断方法
[0152]
可检测标记的本发明化合物(特别是
18
f-3，更特别是
18
f-3a)特别适用于tau蛋白聚集体的成像。关于tau蛋白，可检测标记的本发明化合物(特别是
18
f-3，更特别是
18
f-3a)能够结合各种类型的tau聚集体，例如病理性聚集的tau、过度磷酸化的tau、神经原纤维缠结、成对螺旋长丝(paired helical filaments)、直丝、神经毒性可溶性低聚物、聚合物和原纤维。
[0153]
由于上述结合特征，可检测标记的本发明化合物(特别是
18
f-3，更特别是
18
f-3a)适用于诊断与tau聚集体相关的病症。可检测标记的本发明化合物(特别是
18
f-3，更特别是
18
f-3a)特别适用于tau沉积物的正电子发射断层摄影(pet)成像。如果要将化合物施用于患者，通常使用
18
f标记的式(ii)化合物作为可检测标记的化合物。
[0154]
在tau聚集体的成像中，施用可检测标记的式(ii)化合物(优选
18
f-3，更特别是
18
f-3a)，并检测源自与tau聚集体特异性结合的化合物的信号。特异性结合是式(ii)化合物与tau聚集体的高结合亲和力的结果。
[0155]
在一个优选的实施方案中，使用可检测标记的式(ii)化合物(优选
18
f-3，更特别是
18
f-3a)来诊断是否存在tau病变(优选阿尔茨海默氏病)。在该方法中，将可检测标记的式(ii)化合物(优选
18
f-3，更特别是
18
f-3a)施用于怀疑患有tau病变(优选阿尔茨海默病)的患者或从此类患者获得的样品，优选通过正电子发射断层摄影(pet)检测源自可检测标记的信号。
[0156]
如果没有检测到源自可检测标记的信号，那么本方法可以用于排除tau病变，其表明存在除了tau病变之外的神经病症。
[0157]
在诊断与tau蛋白聚集体相关的病症如阿尔茨海默氏病或其在个体中的易感性的方法中，该方法包括：
[0158]
a)向哺乳动物施用诊断有效量的可检测标记的本发明化合物(特别是
18
f-3，更特别是
18
f-3a)；
[0159]
b)使得可检测标记的本发明化合物(特别是
18
f-3，更特别是
18
f-3a)分布到感兴趣的组织(例如脑组织、眼睛或体液例如脑脊髓液(csf))中；并
[0160]
c)对感兴趣的组织成像，其中与正常对照结合水平相比，可检测标记的本发明化合物(特别是
18
f-3，更特别是
18
f-3a)与感兴趣组织的结合增加表明个体患有或有风险患上与tau蛋白聚集体相关的病症。
[0161]
可检测标记的本发明化合物(特别是
18
f-3，更特别是
18
f-3a)可用于在怀疑含有tau蛋白聚集体的患者的任何样品或特定身体部位或身体区域中对tau蛋白聚集体成像。可检测标记的本发明化合物(特别是
18
f-3，更特别是
18
f-3a)能够通过血脑屏障并能够进入眼内。因此，它们特别适用于脑部、眼部(眼科和/或视网膜成像)以及体液(例如脑脊液(csf))中的tau蛋白聚集体的成像。
[0162]
在诊断应用中，可检测标记的本发明化合物(特别是
18
f-3，更特别是
18
f-3a)优选在诊断组合物中施用。
[0163]
可以通过检测可检测标记的本发明的化合物(特别是
18
f-3，更特别是
18
f-3a)与样品中或原位的tau蛋白聚集体的特异性结合来诊断患者的tau病症或tau相关病症的易感性，其包括：
[0164]
(a)使怀疑含有tau蛋白质聚集体的样品或特定身体部位或身体区域与可检测标记的本发明化合物(特别是
18
f-3，更特别是
18
f-3a)接触，其与tau蛋白质聚集体结合；
[0165]
(b)使可检测标记的本发明化合物(特别是
18
f-3，更特别是
18
f-3a)与tau蛋白质聚集体结合以形成化合物/tau蛋白质聚集体复合物(下文“化合物/tau蛋白质聚集体复合物”缩写为“化合物/蛋白质聚集体复合物”)；
[0166]
(c)检测化合物/蛋白质复合物的形成，
[0167]
(d)任选地将化合物/蛋白质复合物的存在或不存在与样品或特定身体部位或区域中tau蛋白聚集体的存在或不存在相关联；且
[0168]
(e)任选地将化合物/蛋白质的量与正常对照值进行比较，其中与正常对照值相比化合物/蛋白质的量的增加可以表明患者罹患tau相关病症或有罹患tau相关病症的风险。
[0169]
在样品或特定的身体部位或身体区域与可检测标记的本发明化合物(特别是
18
f-3，更特别是
18
f-3a)接触后，使得该化合物与tau蛋白聚集体结合。结合所需的时间量取决于测试类型(例如，体外或体内)，并且可由本领域技术人员通过常规实验确定。
[0170]
随后可以通过任何合适的方法检测已经与tau蛋白聚集体结合的化合物。优选的方法是正电子发射断层摄影(pet)。
[0171]
然后任选地将化合物/蛋白质的存在或不存在与样品或特定身体部位或区域中tau蛋白聚集体的存在或不存在相关联。最后，可以将化合物/蛋白质的量与在健康个体的样品或特定身体部位或身体区域中测定的正常对照值进行比较，其中与正常对照值相比化合物/蛋白质的量增加可以指示患者罹患tau相关病症或有罹患tau相关病症的风险。
[0172]
本发明还涉及测定组织和/或体液中tau蛋白聚集体的量的方法。该方法包括以下步骤：
[0173]
(a)提供代表被研究的组织和/或体液的样品；
[0174]
(b)用可检测标记的本发明化合物(特别是
18
f-3，更特别是
18
f-3a)就tau蛋白聚集体的存在测试样品；
[0175]
(c)测定与tau蛋白质聚集体结合的可检测标记的本发明的化合物(特别是
18
f-3，更特别是
18
f-3a)的量；且
[0176]
(d)计算组织和/或体液中tau蛋白聚集物的量。
[0177]
如下所述用可检测标记的本发明化合物(特别是
18
f-3，更特别是
18
f-3a)测试样品中tau蛋白聚集体的存在：使样品与可检测标记的本发明化合物(特别是
18
f-3，更特别是
18
f-3a)接触，使得可检测标记的本发明化合物(特别是
18
f-3，更特别是
18
f-3a)与tau蛋白质聚集体结合以形成化合物/蛋白质聚集体复合物，并检测如上文所述的化合物/蛋白质复合物的形成。
[0178]
用可检测标记的本发明化合物(特别是
18
f-3，更特别是
18
f-3a)监测已用药物治疗过的罹患与tau蛋白聚集体相关的病症的患者中低限度的残留病症，可以如下实现：
[0179]
(a)使怀疑含有tau蛋白质聚集体的样品或特定身体部位或身体区域与可检测标记的本发明化合物(特别是
18
f-3，更特别是
18
f-3a)接触；
[0180]
(b)使可检测标记的本发明化合物(特别是
18
f-3，更特别是
18
f-3a)与tau蛋白质聚集体结合以形成化合物/蛋白质聚集体复合物；
[0181]
(c)检测化合物/蛋白质聚集体复合物的形成，
[0182]
(d)任选地将化合物/蛋白质聚集体复合物的存在或不存在与样品或特定身体部位或身体区域中tau蛋白聚集体的存在或不存在相关联；且
[0183]
(e)任选地将化合物/蛋白质聚集体的量与正常对照值进行比较，其中与正常对照值相比聚集体的量的增加可以表明患者仍可能罹患低限度的残留病症。
[0184]
上文已经解释了如何进行步骤(a)-(e)。
[0185]
预测患有与tau蛋白聚集体相关的病症并正用药物治疗的患者的响应性可如下实现：
[0186]
(a)使怀疑含有tau蛋白质聚集体的样品或特定身体部位或身体区域与可检测标记的本发明化合物(特别是
18
f-3，更特别是
18
f-3a)接触；
[0187]
(b)使可检测标记的本发明化合物(特别是
18
f-3，更特别是
18
f-3a)与tau蛋白质聚集体结合以形成化合物/蛋白质聚集体复合物；
[0188]
(c)检测化合物/蛋白质聚集体复合物的形成，
[0189]
(d)任选地将化合物/蛋白质聚集体复合物的存在或不存在与样品或特定身体部位或身体区域中tau蛋白聚集体的存在或不存在相关联；且
[0190]
(e)任选地将化合物/蛋白质聚集体的量与正常对照值进行比较。
[0191]
上文已经解释了如何进行步骤(a)-(e)。
[0192]
在用于预测响应性的方法中，化合物/蛋白质复合物的量可任选地在治疗期间的不同时间点比较，例如，在治疗开始之前和之后或在治疗开始后的不同时间点。化合物/蛋白质复合物的量的变化，尤其是减少，可以表明患者具有对各自的治疗有响应的高潜力。
[0193]
本发明的化合物也可以掺入用于检测tau蛋白聚集体的检测试剂盒中。检测试剂盒通常包含容纳一种或多种本发明化合物的容器和使用该化合物用于结合tau蛋白聚集体以形成化合物/蛋白质复合物并检测化合物/蛋白质复合物形成，从而化合物/蛋白质复合
物的存在或不存在与tau蛋白质聚集体的存在或不存在相关联的说明书。
[0194]
术语“检测试剂盒”通常是指本领域已知的任何诊断试剂盒。更具体地，后一术语是指如zrein等人,clin.diagn.lab.immunol.,1998,5,45-49中所述的诊断试剂盒。
[0195]
诊断组合物
[0196]“诊断组合物”在本发明中定义为包含可检测标记的本发明化合物(优选
18
f标记；特别是
18
f-3，更特别是
18
f-3a)的组合物。对于体内应用，诊断组合物应该是适于施用至哺乳动物如人类的形式。优选地，诊断组合物还包含生理学上可接受的载体、稀释剂、辅料或赋形剂。向患者施用优选通过将该组合物作为水溶液注射来进行。这种组合物可任选含有其它成分，如溶剂、缓冲剂；可药用增溶剂；和可药用稳定剂或抗氧化剂。
[0197]
可药用赋形剂在制药领域是公知的，并且描述于例如remington's pharmaceutical sciences,第15版,mack publishing co.,new jersey(1975)中。可根据预期的施用途径和标准药学实践选择药物赋形剂。赋形剂在对其接受者无害的意义上必须是可接受的。
[0198]
可在本发明诊断组合物的制剂中使用的药学上有用的赋形剂可包括，例如，载体、溶媒、稀释剂、溶剂和食用油、油性酯、粘合剂、辅料、增溶剂、增稠剂、稳定剂、崩解剂、助流剂、润滑剂、缓冲剂、乳化剂、润湿剂、助悬剂、甜味剂、着色剂、调味剂、包衣剂、防腐剂、抗氧化剂、加工剂、药物递送调节剂和增强剂。
[0199]
如果胃肠外施用可检测标记的本发明化合物(优选
18
f标记；特别是
18
f-3，更特别是
18
f-3a)，则这种施用的实例包括以下一种或多种：静脉内、动脉内、腹膜内、鞘内、心室内、尿道内、胸骨内、颅内、肌肉内或皮下施用所述化合物；和/或通过使用输注技术。对于胃肠外施用，化合物最好以无菌水溶液的形式使用，其可含有其它赋形剂。如果需要，该水溶液应适当缓冲(优选ph为3-9)。在无菌条件下制备合适的胃肠外制剂可通过本领域技术人员熟知的标准制药技术容易地完成。
[0200]
可检测标记的本发明化合物(优选
18
f标记；特别是
18
f-3，更特别是
18
f-3a)的剂量将根据施用的确切化合物、患者的体重、大小和样品类型以及其他对本领域技术人员显而易见的变量而不同。通常情况下，剂量可以优选地在0.001μg/kg至10μg/kg的范围内，优选0.01μg/kg至1.0μg/kg。放射性剂量可以是例如100至600mbq，更优选150至450mbq。
[0201]
本发明的诊断组合物可以以本领域技术人员已知的方式制备，例如，如remington's pharmaceutical sciences,第15版,mack publishing co.,new jersey(1975)中所述。
[0202]
例如，本发明化合物可用于如wo2016057812a1中所述的脂质体组合物，其包含式(ii)化合物作为配体，用于通过非放射性磁共振成像(mri)选择性检测与tau聚集体相关的病症和异常。
[0203]
特别地，在一个实施方案中，可以用可检测标记的本发明化合物(特别是
18
f-3，更特别是
18
f-3a)检测和监测的疾病或病症是与tau蛋白聚集体相关的疾病或疾患。
[0204]
用可检测标记的本发明化合物(特别是
18
f-3，更特别是
18
f-3a)检测和监测的疾病或疾患包括神经变性疾病，例如tau病变。可以检测和监测的疾病和疾患的实例由神经原纤维病变的形成引起或与之相关。这是tau病变中的主要脑病理学。所述疾病和疾患包括异质的一组神经变性疾病或疾患，包括显示tau和淀粉样病变共存的疾病或疾患。涉及tau聚集
体的疾病的实例通常被列为tau病变，这些包括但不限于阿尔茨海默病(ad)、creutzfeldt-jacob病、拳击痴呆症、唐氏综合症、病、包涵体肌炎、朊蛋白脑淀粉样血管病、创伤性脑损伤、肌萎缩侧索硬化症、关岛帕金森病-痴呆综合症、伴有神经原纤维缠结的非关岛运动神经元疾病、嗜银颗粒病、皮质基底节变性、伴有钙化的弥漫性神经原纤维缠结、与17号染色体相关的伴有帕金森综合征的额颞叶痴呆、hallervorden-spatz病、多系统萎缩、尼曼-皮克病c型、苍白球-脑桥-黑质变性、皮克病、进行性皮质下神经胶质增生、进行性核上性麻痹(psp)、亚急性硬化性全脑炎、仅缠结性痴呆、脑炎后帕金森病、营养不良性肌强直、tau全脑病、具有星形胶质细胞的ad样病、某些朊蛋白疾病(具有tau的gss)、lrrk2突变、慢性创伤性脑病、家族性英国痴呆、家族性丹麦痴呆、额颞叶变性、瓜德罗普帕金森病、具有脑铁积聚的神经变性、slc9a6相关智力迟钝、具有球状神经胶质包涵体的白质tau病变、创伤性应激综合征、癫痫、路易体痴呆(lbd)、伴有淀粉样变性的遗传性脑出血(荷兰型)、轻度认知障碍(mci)、多发性硬化症、帕金森病、hiv相关性痴呆、成人发病型糖尿病、老年心脏淀粉样变性、内分泌肿瘤、青光眼、眼部淀粉样变性、原发性视网膜变性、黄斑变性(如年龄相关性黄斑变性(amd))、视神经玻璃疣、视神经病变、视神经炎和格子状营养不良。优选地，可以检测和监测的疾病和疾患包括阿尔茨海默病(ad)、家族性ad、creutzfeldt-jacob病、拳击痴呆症、唐氏综合症、病、包涵体肌炎、朊蛋白脑淀粉样血管病、创伤性脑损伤(tbi)、肌萎缩侧索硬化、关岛帕金森病-痴呆综合征、伴有神经原纤维缠结的非关岛运动神经元疾病、嗜银颗粒病、皮质基底节变性(cbd)、弥漫性伴有钙化的神经原纤维缠结、与17号染色体相关的帕金森综合征的额颞叶痴呆、hallervorden-spatz病、多系统萎缩、尼曼-皮克病c型、苍白球-脑桥-黑质变性、皮克病(pid)、进行性皮质下神经胶质增生、进行性核上性麻痹(psp)、亚急性硬化性全脑炎、仅缠结性痴呆、脑炎后帕金森病、营养不良性肌强直、tau全脑病、具有星形胶质细胞的ad样病、某些朊蛋白疾病(带有tau的gss)、lrrk2突变、慢性创伤性脑病、家族性英国痴呆、家族性丹麦痴呆、额颞叶变性、瓜德罗普帕金森病、具有脑铁积聚的神经变性、slc9a6相关智力迟钝、具有球状神经胶质包涵体的白质tau病变，更优选阿尔茨海默病(ad)、creutzfeldt-jacob病、拳击痴呆症、肌萎缩侧索硬化、嗜银颗粒病、皮质基底节变性、与17号染色体相关的伴有帕金森综合征的额颞叶痴呆、皮克病、进行性核上性麻痹(psp)、仅缠结性痴呆、关岛帕金森痴呆综合征、hallervorden-spatz病和额颞叶变性。优选地，所述疾病或疾患是阿尔茨海默氏病。
[0205]
本发明的
18
f标记化合物的一般合成
[0206]
被
18
f标记的式(ii)化合物可以通过将式(ii)的化合物(其中r1是lg且r2是h或pg)与
18
f-氟化剂反应来制备，从而离去基团lg被
18
f替代。该制备包括保护基pg的裂解(如果存在的话)。
[0207]
可以使用任何合适的
18
f-氟化剂。典型实例包括h
18
f、碱金属或碱土金属
18
f-氟化物(例如k
18
f、rb
18
f、cs
18
f和na
18
f)。任选地，
18
f-氟化剂可用于与螯合剂例如穴状配体(例如：4,7,13,16,21,24-六氧杂-1,10-二氮杂双环[8.8.8]-二十六烷-)或冠醚(例如：18-冠-6)组合使用。或者，
18
f-氟化剂可以是
18
f的四烷基铵盐或
18
f的四烷基鏻盐；例如，
18
f的四(c1–6烷基)铵盐或
18
f的四(c1–6烷基)鏻盐。其实例包括四丁基铵[
18
f]氟化物和四
丁基鏻[
18
f]氟化物。优选地，
18
f-氟化剂是k
18
f、h
18
f、cs
18
f、na
18
f或四丁基铵[
18
f]氟化物。
[0208]
可用于
18
f-氟化的试剂、溶剂和条件是本领域技术人员公知的(l.cai,s.lu,v.pike,eur.j.org.chem 2008,2853-2873；j.fluorine chem.,27(1985):177-191；coenen,fluorine-18labeling methods:features and possibilities of basic reactions,(2006),in:schubiger p.a.,friebe m.,lehmann l.,(eds),pet-chemistry-the driving force in molecular imaging.springer,berlin heidelberg,pp.15-50)。优选地，
18
f-氟化中使用的溶剂是dmf、dmso、乙腈、dma或其混合物，优选溶剂是乙腈或dmso。
[0209]
如果需要，具有式(ii)的化合物可具有r1为lg且r2为pg，其中保护基pg在
18
f-氟化反应期间保护胺。随后可以除去该胺保护基团。除去胺保护基团的方法是本领域已知的，包括但不限于酸性裂解。
[0210]
如果需要，可在使用前进一步分离和/或纯化式(ii)化合物。相应的操作在本领域中是众所周知的。
[0211]
其中r1为lg且r2为h或pg的具有式(ii)的前体化合物可以提供在适合于通过与
18
f-氟化剂反应制备式(ii)化合物的试剂盒中。在一个实施方案中，试剂盒包含含有预定量的本发明前体化合物的密封小瓶。例如，试剂盒可含有1.5至75μmol，优选7.5至50μmol，更优选10至30μmol的本发明的前体化合物(ii)。任选地，试剂盒可以含有其他组分，例如反应溶剂、固相萃取柱、用于获得
18
f-氟化剂的试剂、用于裂解保护基的试剂、用于纯化的溶剂、用于制剂的溶剂和用于制剂的可药用载体、稀释剂、辅料或赋形剂。
[0212]
其中r1为f且r2为h的本发明化合物可用作分析参照或体外筛选工具。
[0213]
其中r1为f且r2为h的本发明化合物可用作其中r1为
18
f且r2为h的本发明化合物的质量控制和释放的分析参照。
[0214]
其中r1是f且r2是h的本发明化合物可以用作体外筛选工具，用于表征具有tau病理学的组织和用于测试在这种组织上靶向tau病理学的化合物。
具体实施方式
[0215]
通过以下实施例说明本发明，但不应将其解释为限制性的。
[0216]
实施例
[0217]
所有试剂和溶剂均从商业来源获得，并且无需进一步纯化即可使用。质子(1h)谱在bruker drx-400mhz nmr波谱仪上或在bruker av-400mhz nmr波谱仪上在氘代溶剂中记录。在advion cms质谱仪上记录质谱(ms)。使用硅胶(fluka：硅胶60,0.063-0.2mm)和具体实施例中所示的合适溶剂进行色谱法。使用biotage isolera one快速纯化系统，使用hp-sil(biotage)或puriflash柱(interchim)和具体实施例中指示的溶剂梯度进行快速纯化。在具有uv检测的硅胶板上进行薄层色谱(tlc)。
[0218]
尽管本发明的一些实施例并未指明各种化合物被可检测地标记，但应当理解，可以容易地制备相应的可检测标记的化合物，例如通过使用可检测标记的起始材料，例如含有3h原子的起始材料。
[0219]
缩写
[0220]
[0221][0222]
制备实施例a
[0223][0224]
步骤a
[0225]
将市售的2,6-二溴吡啶(4.12g,16.6mmol)悬浮于乙醇(40ml)中，并加入水合肼(10ml,97.6mmol)在水(～50-60％)中的溶液。将该混合物在沙浴中于～115℃加热18小时。除去溶剂，并将残余物经硅胶色谱用乙酸乙酯/正庚烷(60/40)洗脱纯化，得到标题化合物，为灰白色固体(3.05g,93％)。
[0226]1h-nmr(400mhz,cdcl3):δ＝7.33(t,1h),6.83(d,1h),6.67(d,1h),6.00(br-s,1h),3.33-3.00(br-s,2h)
[0227]
步骤b
[0228]
将获自上文步骤a的标题化合物(10g,53.2mmol)和市售的1-boc-4-哌啶酮(10.6g,53.2mmol)加入500ml烧瓶中并混合，变为均匀混合物。然后加入多磷酸(80g,115％ h3po4基础)，将该混合物在～160℃下于沙浴中加热。在～120℃将boc-保护基团裂解，导致反应混合物发泡。在完成boc-裂解后，泡沫破裂并将深色反应混合物在～160℃下搅拌20小时。将反应物冷却至室温并加入水(400ml)。搅拌/超声处理反应混合物直至胶状物质溶解。然后将反应混合物置于冰浴中，通过加入固体氢氧化钠颗粒(放热)将溶液的ph调节至ph～12。过滤收集沉淀物并用水(400ml)洗涤以除去盐。通过超声处理将沉淀物溶解在二氯甲烷/甲醇(9/1；1500ml)中并用水(2
×
400ml)洗涤以除去残留的盐和不溶物质。将有机相用na2so4干燥，过滤并在减压下除去溶剂。将该深色残余物用二氯甲烷(100ml)处理，超声处理5分钟并通过过滤收集沉淀物。用二氯甲烷(40ml)洗涤沉淀物并空气干燥，得到标题化合物，为米色固体(3.5g,26％)。
[0229]1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝11.5(br-s,1h),7.72(d,1h),7.15(d,1h),3.86-3.82(m,2h),3.06-3.00(m,2h),2.71-2.65(m,2h)
[0230]
步骤c
[0231]
将获自上述步骤b的标题化合物(1.75g，6.94mmol)悬浮于二甲苯(380ml)中，加入氧化锰(iv)(6.62g，76.9mmol)。然后将反应混合物在～160℃下在沙浴中加热36小时。将冷却的反应混合物减压蒸发，将残余物悬浮在二氯甲烷/甲醇(1/1；400ml)中并在室温下搅拌30分钟。然后将反应混合物通过纸过滤器过滤以除去氧化锰(iv)，并用甲醇(50ml)洗涤过滤器。减压蒸发合并的滤液，使用biotage isolera系统，通过二氧化硅色谱(50g hp-sil-柱)纯化该深色残余物，使用乙酸乙酯/庚烷梯度(5/95-100/0)以除去非极性杂质，然后用二氯甲烷/甲醇(9/1
→
4/1)，得到标题化合物，为暗黄色固体。2次运行的总收率为1.77g(51％)。
[0232]1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝12.52(br-s,1h),9.42(s,1h),8.61(d,1h),8.53(d,1h),7.56-7.52(m,2h)
[0233]
制备实施例b
[0234][0235]
步骤a
[0236]
向获自制备实施例a(0.776g,3.13mmol)的标题化合物在二氯甲烷(65ml)中的混悬液中加入三乙胺(1.86ml,13mmol)和三苯甲基氯(2.63g,9.39mmol)。加入4-(二甲基氨基)-吡啶(0.074g,0.608mmol)后，将反应混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物用二氯甲烷(150ml)和水(50ml)稀释。分离有机相，用na2so4干燥，过滤并真空除去溶剂。将残余物在hp-sil snap柱(50g)使用biotage isolera one纯化系统用乙酸乙酯/正庚烷梯度洗脱(5/95
→
100/0
→
100/0)纯化，得到标题化合物b，为浅黄色固体(0.831g,54％)。通过用乙酸乙酯/甲醇(90/10)冲洗柱子回收未反应的起始原料，得到为灰白色固体的起始原料(0.195g,25％)。
[0237]1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ＝9.22(s,1h),8.23(d,1h),8.13(d,1h),7.48-7.42(m,7h),7.33-7.22(m,12h),6.41(d,1h)
[0238]
ms(esi)；m/z＝490.03/491.96[m+h]
+
[0239]
制备实施例c
[0240][0241]
步骤a
[0242]
向获自制备实施例a的标题化合物(0.482g,1.94mmol)在二氯甲烷(40ml)中的混
悬液中加入三乙胺(1.15ml,8mmol)和4,4'-(氯(苯基)亚甲基)双(甲氧基苯；dmtrt-cl)(1.963g,5.8mmol)。加入4-(二甲基氨基)-吡啶(0.046g,0.377mmol)后，将反应混合物在室温下搅拌3天。将反应混合物用二氯甲烷(100ml)和水(40ml)稀释。分离有机相，用na2so4干燥，过滤并真空除去溶剂。将残余物在hp-sil snap柱(50g)上用biotage isolera one纯化系统用乙酸乙酯/正庚烷梯度洗脱(5/95
→
100/0
→
100/0)纯化，得到标题化合物c，为浅黄色固体(0.825g,72％)。
[0243]1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ＝9.23(s,1h),8.23(d,1h),8.13(d,1h),7.39-7.31(m,6h),7.29-7.25(4h),6.80(d,4h),6.41(dd,1h),3.81(s,6h)
[0244]
实施例1(aci-2620)
[0245][0246]
步骤a
[0247]
向微波瓶中脱气的1,4-二噁烷(4.3ml)和水(1ml)的混合物中加入[1,1
′‑
双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(ii)(与二氯甲烷的复合物)(0.0084g,0.01mmol)，然后加入获自制备实施例a的标题化合物(0.05g,0.2mmol)、(2-氟吡啶-4-基)硼酸(0.035g,0.245mmol)和碳酸铯(0.133g,0.41mmol)。然后将反应混合物在～115℃在沙浴中加热6小时。将反应混合物用乙酸乙酯(60ml)和水(20ml)稀释，分离有机相，用na2so4干燥，过滤并将溶剂真空蒸发。将该深色残余物经硅胶(25g hp-sil)色谱使用biotage isolera系统用二氯甲烷/甲醇梯度洗脱(100/0
→
95/5
→
90/10
→
80/20)纯化，得到标题化合物f-3a，为灰白色固体(0.033g,63％)。
[0248]1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝12.50(br-s,1h),9.45(s,1h),8.83(d,1h),8.56-8.52(m,1h),8.43-8.39(m,1h),8.19-8.14(m,2h),7.92(s,1h),7.54-7.50(m,1h)
[0249]
ms(esi):m/z＝265.04[m+h]
+
[0250]
实施例2(aci-2698)
[0251][0252]
步骤a
[0253]
在5ml微波管中加入获自制备实施例a的标题化合物(0.05g,0.202mmol)和(3-氟吡啶-4-基)硼酸(0.0398g,0.282mmol)在二甲氧基乙烷(比率：2,体积：1.344ml)和甲醇(比
率：1,体积：0.672ml)中的溶液。加入氟化铯(0.0306g,0.202mmol)，并将所得混悬液用氩气脱气5分钟。然后，加入四(三苯基膦)钯(0)(0.0419g,0.036mmol)，将该管密封，并将反应混合物在150℃在biotage initiator微波下加热30分钟(p＝12bar)。将反应混合物用乙酸乙酯稀释，并用水和盐水洗涤。将有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物经硅胶(10g hp-sil)色谱使用biotage isolera系统用二氯甲烷/甲醇梯度洗脱纯化(100/0
→
80/20)，得到标题化合物f-3b，为浅褐色固体(0.013g,24％)。
[0254]1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝9.46(s,1h),8.82(d,1h),8.77(d,1h),8.63(d,1h),8.56(d,1h),8.09(dd,1h),7.91(dd,1h),7.54(d,1h)
[0255]
ms(esi)；m/z＝265.16[m+h]
+
[0256]
实施例3(aci-2690)
[0257][0258]
步骤a
[0259]
向微波瓶中脱气的1,4-二噁烷(4.3ml)和水(1ml)的混合物中加入[1,1
′‑
双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(ii)，与二氯甲烷的复合物(0.0084g,0.01mmol)，然后加入获自制备实施例b的标题化合物(0.1g,0.2mmol)、2-硝基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶(0.061g,0.245mmol)和碳酸铯(0.133g,0.41mmol)。然后将反应混合物在～115℃在沙浴中加热6小时。将反应混合物用乙酸乙酯(60ml)和水(20ml)稀释，分离有机相，用na2so4干燥，过滤并将溶剂真空蒸发。将该深色残余物经硅胶色谱纯化(25g pufiflash-柱,interchim)使用biotage isolera系统用乙酸乙酯/正庚烷梯度洗脱(5/95
→
100/0
→
100/0)，得到标题化合物13，为浅黄色固体(0.082g,75％)。
[0260]1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ＝9.32(s,1h)；8.56(d,1h),8.48(d,1h),8.33(s,1h)；8.30(d,1h),7.85(d,1h),7.69(d,1h),7.58-7.54(m,5h),7.32-7.25(m,10h),6.48(d,1h)
[0261]
ms(esi):m/z＝534.28[m+h]
+
。
[0262]
实施例4(aci-2756)
[0263][0264]
步骤a
[0265]
向在微波瓶中脱气的1,4-二噁烷(8ml)的混合物中加入[1,1
′‑
双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(ii)，与二氯甲烷的复合物(0.034g,0.04mmol)，然后加入获自制备实施例b的标题化合物(0.2g,0.4mmol)、双(频哪醇基)二硼烷(0.112g,0.44mmol)和乙酸钾(0.118g,1.2mmol)。然后将反应混合物在～95℃在沙浴中加热18小时。将反应混合物用乙酸乙酯(100ml)和水(30ml)稀释，分离有机相，用na2so4干燥，过滤并真空蒸发溶剂，得到粗的标题化合物，其在下一步骤中直接使用。
[0266]
步骤b
[0267]
将获自上述步骤a的粗的标题化合物在微波瓶中溶于脱气的1,4-二噁烷(8.6ml)和水(2ml)的混合物中。然后加入[1,1
′‑
双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(ii)，与二氯甲烷的复合物(0.034g,0.04mmol)、4-氯-3-硝基-吡啶(0.078g,0.49mmol)和碳酸铯(0.266g,0.82mmol)，并将反应混合物在～115℃在沙浴中加热6小时。将反应混合物用乙酸乙酯(80ml)和水(30ml)稀释，分离有机相，用na2so4干燥，过滤并将溶剂真空蒸发。将该深色残余物经硅胶色谱纯化(25g puriflash,interchim)使用biotage isolera系统用乙酸乙酯/正庚烷梯度洗脱(5/95
→
100/0
→
100/0)，得到标题化合物16，为浅黄色固体(0.033g,15％)。
[0268]1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ＝9.30(s,1h),9.02(s,1h),8.68(d,1h),8.42(d,1h),8.26(d,1h),7.49-7.45(m,5h),7.31(d,1h),7.27-7.22(m,10h)；7.08(d,1h),6.44 8d,1h)
[0269]
ms(esi):m/z＝533.59[m+h]
+
。
[0270]
实施例5(硝基/boc前体)(aci-2799)
[0271]
方法a:
puriflash,interchim)，使用biotage isolera one纯化系统用乙酸乙酯/正庚烷梯度洗脱(5/95
→
100/0
→
100/0)以洗脱非极性副产物，然后用乙酸乙酯/甲醇(95/5)洗脱，得到标题化合物5，为浅黄色固体(0.0261g,70％)。
[0283]1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ＝9.38(s,1h),9.16(s,1h),8.83-8.78(m,2h),8.58(d,1h),8.46(d,1h),8.38(d,1h),8.09(d,1h),1.88(s,9h)
[0284]
ms(esi)；m/z＝391.85[m+h]
+
；291.74[m+h-boc]
+
[0285]
实施例5a(硝基前体)(aci-2776)
[0286][0287]
步骤a
[0288]
向微波瓶中脱气的1,4-二噁烷(8ml)混合物中加入[1,1
′‑
双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(ii)，与二氯甲烷的复合物(0.034g,0.04mmol)，然后加入获自制备实施例b的标题化合物(0.2g,0.4mmol)、双(频哪醇基)二硼烷(0.112g,0.44mmol)和乙酸钾(0.118g,1.2mmol)。然后将反应混合物在～95℃在沙浴中加热18小时。将反应混合物用乙酸乙酯(100ml)和水(30ml)稀释，分离有机相，用na2so4干燥，过滤并真空蒸发溶剂，得到粗的标题化合物，其在下一步骤中直接使用。
[0289]
步骤b
[0290]
将获自上述步骤a的粗的标题化合物在微波瓶中溶于脱气的1,4-二噁烷(8.6ml)和水(2ml)的混合物中。然后加入[1,1
′‑
双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(ii)，与二氯甲烷的复合物(0.034g,0.04mmol)、4-溴-2-硝基吡啶(0.1g,0.49mmol)和碳酸铯(0.266g,0.82mmol)，并将反应混合物在～115℃在沙浴中加热6小时。将反应混合物用乙酸乙酯(100ml)和水(30ml)稀释，分离有机相，用na2so4干燥，过滤并真空蒸发溶剂。将该深色残余物经硅胶色谱纯化(25g puriflash,interchim)，使用biotage isolera系统用乙酸乙酯/正庚烷梯度洗脱(5/95
→
100/0
→
100/0)，得到较高极性的标题化合物，为浅黄色固体(0.0437g,20％)。
[0291]
较高极性的标题化合物:
[0292]1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ＝9.32(s,1h)；8.56(d,1h),8.48(d,1h),8.33(s,1h)；8.30(d,1h),7.85(d,1h),7.69(d,1h),7.58-7.54(m,5h),7.32-7.25(m,10h),6.48(d,1h)
[0293]
ms(esi):m/z＝534.28[m+h]
+
。
[0294]
较低极性的副产物:
[0295]1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ＝9.26(s,1h),8.31(dd,1h),8.23-8.19(m,2h),7.52-7.46(m,5h),7.28-7.22(m,10h),7.14(dd,1h),6.19(d,1h)
[0296]
步骤c
[0297]
将获自上述步骤b的标题化合物(0.0437g,0.082mmol)溶于二氯甲烷(5ml)中，并加入三氟乙酸(1.2ml)。将反应混合物在室温下搅拌6小时。将反应混合物用二氯甲烷(50ml)和水(20ml)稀释。通过加入1m氢氧化钠水溶液将水相的ph调至ph～12。将水层弃去，并将有机层的沉淀经过滤收集，用甲醇(10ml)洗涤，并空气干燥，得到标题化合物5a，为黄色固体(0.015g,63％)。
[0298]1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝12.75-12.5(br-s,1h),9.45-9.40(br-s,1h),9.10-9.05(br-s,1h),8.85-8.80(br-s,2h),8.68-8.63(br-s,1h),8.53-8.48(br-s,1h),8.27-8.22(br-s,1h),7.53-7.48(br-s,1h)
[0299]
ms(esi):m/z＝292.03[m+h]
+
。
[0300]
实施例6(硝基/dmtr前体)(aci-2916)
[0301][0302]
步骤a
[0303]
向在微波瓶中的脱气的1,4-二噁烷(2.2ml)和水(0.5ml)混合物中加入[1,1
′‑
双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(ii)，与二氯甲烷的复合物(0.0042g,0.005mmol)，然后加入获自制备实施例c的标题化合物(0.055g,0.1mmol)、2-硝基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶(0.0305g,0.12255mmol)和碳酸铯(0.067g,0.205mmol)。将反应混合物在～115℃在沙浴中加热6小时。将反应混合物用乙酸乙酯(20ml)稀释，经过滤收集沉淀，用水(10ml)和甲醇(5ml)洗涤，并空气干燥，得到粗的标题化合物，为灰色固体(0.0277g,95％)。
[0304]
步骤b
[0305]
向获自上述步骤a的粗的标题化合物(0.0277g,0.095mmol)的二氯甲烷(4ml)混悬液中加入三乙胺(1ml,7.2mmol)、4,4'-(氯(苯基)亚甲基)双(甲氧基苯)(0.081g,0.29mmol)和4-(二甲基氨基)-吡啶(0.0036g,0.028mmol)。将反应混合物在室温下搅拌18小时，用乙酸乙酯(50ml)和水(20ml)稀释。分离有机相，用na2so4干燥，过滤并真空除去溶剂。将残余物在硅胶上纯化(25g puriflash,interchim)，使用biotage isolera one纯化系统用乙酸乙酯/正庚烷梯度洗脱(5/95
→
100/0
→
100/0)，得到标题化合物6，为浅黄色固体(0.0261g,44％)。
[0306]1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ＝9.32(s,1h),8.58(d,1h),8.50(d,1h),8.36(s,1h),8.30(d,1h),7.85(d,1h),7.74(d,1h),7.52-7.42(m,6h),7.27-7.23(m,4h),6.80(d,4h),6.49(d,1h),3.78(s,6h)
[0307]
实施例7(碘/boc前体)(aci-3145)
[0308][0309]
步骤a
[0310]
0℃下向获自实施例8的标题化合物(0.12g,0.195mmol)在二氯甲烷(3.8ml)中的溶液中加入三氟乙酸(3.01ml,39.1mmol)。将反应混合物在室温下搅拌18小时。减压除去溶剂，将残余物用1m氢氧化钠水溶液(20ml)溶取，并用二氯甲烷(3x 50ml)萃取。收集有机物，用na2so4干燥，并在hp-sil柱上纯化，经用二氯甲烷/甲醇梯度洗脱(100/0
→
90/10)，得到标题化合物(0.025g,34％)。
[0311]1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝12.46(s,1h),9.43(d,1h),8.79(d,1h),8.60(d,1h),8.52(dd,2h),8.20(dd,1h),8.14(d,1h),7.50(m,2h)。
[0312]
ms(esi):m/z＝373.03[m+h]
+
。
[0313]
步骤b
[0314]
向获自上述步骤a的标题化合物(0.02g,0.067mmol)在四氢呋喃(5ml)中的溶液中加入二碳酸二叔丁酯(0.078g,0.336mmol)和4-(二甲基氨基)-吡啶(0.0082g,0.0672mmol)。将反应混合物在室温下搅拌18小时，并真空除去溶剂。将残余物在hp-sil snap柱上纯化，使用biotage isolera one纯化系统经用乙酸乙酯/正庚烷梯度洗脱(100/0
→
50/50)，得到标题化合物7(0.018g,56％)。
[0315]1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ＝9.31(d,1h),8.73(d,1h),8.63(d,1h),8.52-8.44(m,2h),8.34(dd,1h),7.99(dd,1h),7.91(d,1h),1.84(s,9h)。
[0316]
ms(esi):m/z＝473.03[m+h]
+
。
[0317]
实施例8(碘/tr前体)(aci-3143)
[0318][0319]
步骤a
[0320]
向干燥压力管中的脱气的1,4-二噁烷(30ml)和水(7ml)的混合物中加入[1,1
′‑
双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(ii)，与二氯甲烷的复合物(0.043g,0.053mmol)，然后加入获自制备实施例b的标题化合物(0.517g,1.054mmol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-胺(0.278g,1.265mmol)和碳酸铯(0.687g,2.109mmol)。然后将反应混合物在100℃加热4小时。减压除去溶剂，并将残余物用乙酸乙酯(40ml)和1m氢氧化钠水溶液(40ml)溶取。分离各相，并将有机相用水洗涤(2x 50ml)。将有机相用na2so4干燥，过滤并减压浓缩。减压除去溶剂，并将残余物在hp-sil snap柱(50g)上纯化，使用biotage isolera one纯化系统经用二氯甲烷/甲醇梯度洗脱(100/0
→
90/10)，得到标题化合物(0.47g,89％)
3539)
[0335][0336]
步骤a
[0337]
向微波瓶中脱气的1,4-二噁烷(8.7ml)和水(2ml)的混合物中加入[1,1
′‑
双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(ii)，与二氯甲烷的复合物(0.017g,0.02mmol)，然后加入获自制备实施例b的标题化合物(0.2g,0.4mmol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-胺(0.110g,0.5mmol)和碳酸铯(0.272g,0.84mmol)。然后将反应混合物在～120℃下在沙浴中加热6小时。将反应混合物用乙酸乙酯(100ml)和水(40ml)稀释，分离有机相，用na2so4干燥，过滤并真空蒸发溶剂。将该深色残余物经硅胶色谱纯化(25g puriflash,interchim)，使用biotage isolera系统经用二氯甲烷/甲醇梯度洗脱(100/0
→
97/3
→
95/5
→
95/5)，得到标题化合物，为灰白色固体(0.2g,97％)。
[0338]1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ＝9.26(s,1h)；8.40(d,1h),8.30(d,1h),8.01(d,1h),7.73(d,1h),7.65-7.59(m,5h),7.31-7.24(m,10h),6.98(dd,1h),6.67(d,1h),6.43(d,1h),4.80(br-s,2h)
[0339]
步骤b
[0340]
将获自上述步骤a的标题化合物(0.2g,0.397mmol)悬浮于n,n
’‑
二甲基甲酰胺(1.2ml)中，并在室温下缓慢加入三氟甲磺酸(0.6ml)(放热)。加入亚硝酸钠(0.055g,0.795mmol)后，将反应混合物在室温下搅拌3小时。将反应混合物用二氯甲烷(40ml)和水(20ml)稀释:然后加入2m氢氧化钠水溶液，直至ph～12。分离有机相，用na2so4干燥，过滤并减压除去溶剂。将残余物悬浮于二氯甲烷(15ml)中，并加入三乙胺(2.7ml)和二碳酸二叔丁酯(0.621g,3.13mmol)。加入4-(二甲基氨基)-吡啶(0.013g,0.1mmol)后，将反应混合物在室温下搅拌18小时。将反应混合物用乙酸乙酯(50ml)和1/1-盐水/水混合物(20ml)稀释。分离有机相，用na2so4干燥，过滤并减压除去溶剂。将残余物经硅胶色谱纯化(40g puriflash,interchim)，使用biotage isolera系统用乙酸乙酯/正庚烷梯度洗脱(5/95
→
100/0
→
100/0)，得到标题化合物10和11的混合物。将标题化合物的混合物经制备型tlc分离(20x 20cm；1000μm,analtech)，用乙酸乙酯作为流动相，得到较低极性的标题化合物10，为浅黄色固体(0.0357g,14％)，以及较高极性的标题化合物11，为浅黄色固体(0.0237g,12％)。
[0341]
较低极性的标题化合物10:
[0342]1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ＝9.32(s,1h),8.47(d,1h),8.35(d,1h),8.31(d,1h),7.80(d,1h),7.61-7.57(m.6h),7.32-7.26(m,10h),7.07(s,1h)；6.90(d,1h)
[0343]
ms(esi):m/z＝637.25[m+h]
+
。
[0344]
较高极性的标题化合物11:
[0345]1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ＝9.38(s,1h),8.78(d,1h),8.57-8.50(m,2h),8.38(d,1h),8.15(d,1h),8.10(s,1h),8.00(d,1h),1.86(s,9h)
[0346]
ms(esi):m/z＝495.01[m+h]
+
。
[0347]
实施例12(三氟甲磺酸酯/nh前体)(aci-3545)
[0348][0349]
步骤a
[0350]
将获自实施例10和11步骤a的标题化合物(0.272g,0.54mmol)悬浮于n,n
’‑
二甲基甲酰胺(1.8ml)中。将反应混合物冷却至0℃，并缓慢加入三氟甲磺酸(0.9ml)(放热)。将反应混合物加温至室温，加入亚硝酸钠(0.0825g,1.19mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌3小时。将反应混合物用二氯甲烷(60ml)和水(25ml)稀释:然后加入2m氢氧化钠水溶液直至ph～12。分离有机相，用na2so4干燥，过滤并减压除去溶剂。将残余物经硅胶色谱纯化(25g hp-sil)，使用biotage isolera系统用乙酸乙酯/正庚烷梯度洗脱(5/95
→
100/0
→
100/0)，得到较低极性的10，为浅黄色固体(0.0497g,14.5％)，然后将该梯度变为二氯甲烷/甲醇(100/0
→
95/5
→
90/10
→
80/20)，得到标题化合物12，为灰色固体(0.0425g)。
[0351]
步骤b
[0352]
将获自上述步骤a的较低极性的化合物10(0.0497g,0.0078mmol)溶于二氯甲烷(5ml)中，并加入三氟乙酸(1.5ml)。将反应混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物用二氯甲烷(30ml)和水(10ml)稀释。通过加入2m氢氧化钠水溶液将水相的ph调至ph～12。分离有机相，用na2so4干燥，过滤并真空除去溶剂。将残余物在硅胶上纯化(10g hp-sil)，使用biotage isolera one纯化系统用二氯甲烷/甲醇梯度洗脱(100/0
→
95/5
→
90/10
→
80/20)，得到另外的标题化合物12，为灰色固体(0.0182g)，合并产量0.0607g(28.5％)。
[0353]1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝12.54(br-s,1h),9.46(s,1h),8.87(d,1h),8.64(d,1h),8.56(d,1h),8.42(dd,1h),8.30(d,1h),8.24(d,1h),7.55(dd,1h)
[0354]
ms(esi):m/z＝395.12[m+h]
+
。
[0355]
实施例14(三甲基铵/三苯甲基前体)(aci-3591)
[0356][0357]
步骤a
[0358]
将市售的n,n-二甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-胺(0.25g,1mmol)溶于二氯甲烷(5ml)中。室温下向所得搅拌中的溶液中逐滴加入三氟甲磺酸甲酯(0.124ml,1.1mmol)。将该溶液在室温下搅拌4小时。将反应混合物浓缩以除去二氯甲烷，并将残余物真空干燥，得到黄色玻璃状/泡沫状物，其直接用于下一步骤。
[0359]
步骤b
[0360]
向微波瓶中脱气的1,4-二噁烷(12ml)和水(3ml)的溶液中加入[1,1
′‑
双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(ii)，与二氯甲烷的复合物(0.034g,0.04mmol)，加入获自制备实施例b的标题化合物(0.4g,0.816mmol)、获自上述步骤a的粗的标题化合物(～1mmol)和碳酸铯(0.544g,1.68mmol)。将反应混合物在～120℃在沙浴中加热6小时。将反应混合物用乙酸乙酯(150ml)和水(50ml)稀释，分离有机相，用na2so4干燥，过滤并真空蒸发溶剂。将该深色残余物经硅胶色谱纯化(25g hp-ultra)，使用biotage isolera系统用乙酸乙酯/正庚烷梯度洗脱(5/95
→
100/0
→
100/0)以洗脱未反应的起始原料和非极性副产物。然后将该梯度变为二氯甲烷/甲醇(100/0
→
95/5
→
90/10)，得到二甲基胺-衍生物，为浅黄色玻璃状物(0.127g,29％；ms(esi):m/z＝532.27[m+h]+)和甲基胺-衍生物，为灰色固体(0.0547g,13％；ms(esi):m/z＝519.18[m+h]+)。将该梯度再次变为二氯甲烷/甲醇(90/10
→
80/20)并保持在(80/20)，得到标题化合物14，为褐色固体(0.104g,18％)。
[0361]1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝9.47(s,1h)；8.89(d,1h),8.55(d,1h),8-35-8.32(m,2h),8.29(d,1h),7.63-7.57(m,5h),7.48(d,1h),7.34-7.25(m,10h),6.48(d,1h),3.60(s,9h)
[0362]
ms(esi):m/z＝546.26[m+h]
+
[0363]
实施例14a(三甲基铵/nh-前体)(aci-3613)
[0364][0365]
步骤a
[0366]
将获自实施例14的标题化合物(0.199g,0.364mmol)悬浮于二氯甲烷(10ml)中。加入三氟乙酸(10ml)后，将反应混合物在室温下搅拌18小时。减压除去溶剂，将残余物溶于甲醇(10ml)中，并减压除去溶剂。将用甲醇处理残余物再重复两次。然后将残余物悬浮于二氯甲烷(20ml)中，并超声处理～5分钟。过滤收集沉淀，用二氯甲烷(10ml)洗涤，并空气干燥，得到标题化合物14a，为灰色固体(0.127g,83％)。
[0367]1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝13.76(br-s,1h),9.84(s,1h)；8.12(d,1h),8.89(d,1h),8.80(d,1h),8.75(s,1h),8.54-8.50(m,2h),8.04(d,1h),3.72(s,9h)
[0368]
ms(esi):m/z＝303.91[m+h]
+
[0369]
实施例15(三氟甲磺酸酯/dmtr前体)(aci-3546)
[0370][0371]
步骤a
[0372]
向获自实施例12的标题化合物(0.0291g,0.0739mmol)在二氯甲烷(3ml)中的混悬液中加入三乙胺(0.046ml,0.926mmol)、4,4'-(氯(苯基)亚甲基)双(甲氧基苯)(0.062g,0.222mmol)和4-(二甲基氨基)-吡啶(0.00175g,0.014mmol)。将反应混合物在室温下搅拌18小时，用乙酸乙酯(40ml)和水(15ml)稀释。分离有机相，用na2so4干燥，过滤并真空除去溶剂。将残余物在硅胶上纯化(25g puriflash,interchim)，使用biotage isolera one纯化系统用乙酸乙酯/正庚烷梯度洗脱(5/95
→
100/0
→
100/0)，得到标题化合物，为半固体。将该化合物用正庚烷(5ml)处理，超声5分钟，并减压蒸发溶剂，得到标题化合物15，为灰白色固体(0.0348g,67％)。
[0373]1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ＝9.32(s,1h),8.47(d,1h),8.36-8.28(m,2h),7.79(d,1h),7.59-7.57(m,1h),7.52-7.42(m,5h),7.33-7.27(m,4h),7.20-7.18(m,1h),6.83-6.77(m,4h),6.58(d,1h),3.80(s,6h)
[0374]
ms(esi):m/z＝697.28[m+h]
+
。
[0375]
实施例17(甲磺酸酯/三苯甲基前体)(aci-3540)
[0376][0377]
步骤a
[0378]
向在微波瓶中脱气的1,4-二噁烷(13ml)和水(3ml)的混合物中加入[1,1
′‑
双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(ii)，与二氯甲烷的复合物(0.026g,0.03mmol)，然后加入获自制备实施例b的标题化合物(0.3g,0.612mmol)、(2-羟基吡啶-4-基)硼酸(0.104g,0.75mmol)和碳酸铯(0.408g,1.15mmol)。然后将反应混合物在～120℃下在沙浴中加热6小时。将反应混合物用乙酸乙酯(120ml)和水(45ml)稀释，分离有机相，用na2so4干燥，过滤并真空蒸发溶剂。将该深色残余物经硅胶色谱纯化(25g puriflash,interchim)，使用biotage isolera系统用乙酸乙酯/正庚烷梯度洗脱(5/95
→
100/0
→
100/0)，以得到未反应的起始原料b，为灰白色固体(0.1398g,47％)。随后将该梯度洗脱变为二氯甲烷/甲醇(100/0
→
95/5
→
90/10
→
80/20
→
80/20)，得到标题化合物，为灰色固体(0.0996g,32％)。
[0379]1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝11.52(br-s,1h),9.43(s,1h),8.70(d,1h),8.23(d,1h),7.97(d,1h),7.59-7.53(m,6h),7.32-7.21(m,10h),6.67(d,1h),6.48(d,1h),6.19(dd,1h)
[0380]
ms(esi):m/z＝505.28[m+h]
+
。
[0381]
步骤b
[0382]
向获自上述步骤a的标题化合物(0.080g,0.159mmol)在二氯甲烷(5ml)中的混悬液中加入三乙胺(0.2ml,1.431mmol)、甲磺酰氯(0.0365ml,0.477mmol)和4-(二甲基氨基)-吡啶(0.0054g,0.023mmol)。将反应混合物在室温下搅拌18小时，用乙酸乙酯(50ml)和水/盐水(20ml；1/1)稀释。分离有机相，用na2so4干燥，过滤并真空除去溶剂。将残余物在硅胶上纯化(25g puriflash,interchim)，使用biotage isolera one纯化系统用乙酸乙酯/正庚烷梯度洗脱(5/95
→
100/0
→
100/0)，得到标题化合物17，为浅黄色固体(0.0438g,47％)。
[0383]1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ＝9.31(s,1h),8.46(d,1h),8.30-8.27(m,2h),7.79(d,1h),7.59-7.55(m,5h),7.42(dd,1h),7.32-7.26(m,10h),7.08(s,1h),6.65(d,1h)
[0384]
ms(esi):m/z＝583.21[m+h]
+
。
[0385]
实施例17a(甲磺酸酯/nh前体)(aci-3572)
[0386][0387]
步骤a
[0388]
将获自实施例17的标题化合物(0.0388g,0.0067mmol)溶于二氯甲烷(5ml)中，并
加入三氟乙酸(1.5ml)。将反应混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物用二氯甲烷(30ml)和水(10ml)稀释。通过加入2m氢氧化钠水溶液将水相的ph调至ph～12。分离有机相，用na2so4干燥，过滤并真空除去溶剂。将残余物在硅胶上纯化(10g hp-sil)，使用biotage isolera one纯化系统用二氯甲烷/甲醇梯度洗脱(100/0
→
95/5
→
90/10
→
80/20)，得到标题化合物17a，为白色固体(0.0059g,26％)。
[0389]1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝12.51(br-s,1h),9.45(s,1h),8.84(d,1h),8.58-8.54(m,2h)；8.26(dd,1h),8.20(d,1h)；8.05(d,1h),7.54(d,1h),3.68(s,3h)
[0390]
ms(esi):m/z＝341.17[m+h]
+
。
[0391]
实施例18(氘化的化合物)
[0392][0393]
步骤a
[0394]
获自实施例1的标题化合物用作起始原料通过采用铑黑的直接氢同位素交换制备实施例18([2h]f-3a)。
[0395]
ms(esi):m/z＝265(45％)[m+h]
+
；266(65％)[m+h]
+
；267(100％)
[0396]
[m+h]
+
；268(34％)[m+h]
+
[0397]
实施例19(氚化的化合物)
[0398][0399]
步骤a
[0400]
获自实施例1的标题化合物用作起始原料通过用氚气(2.2ci/ml)用crabtree催化剂在甲醇/乙醇混合物中直接氢同位素交换制备实施例19([3h]f-3a)。经hplc纯化(phenomenex prodigy ods(2),4.6x 250mm,5μm；溶剂a:水，含有0.1％ tfa；b:乙腈；0-20分钟0-100％ b；保持至30分钟)后，得到[3h]f-3a，具有98.7％放射化学纯度和24.6ci/mmol的比活度。
[0401]
ms(esi):m/z＝265(100％)[m+h]
+
；267(77.5％)[m+h]
+
；269(41.3％)[m+h]
+
；271(11.3％)[m+h]
+
[0402]
比较实施例2(f-2)(aci-2448)
[0403][0404]
步骤a
[0405]
向获自制备实施例a的标题化合物(0.430g,1.73mmol)在二氯甲烷(25ml)中的混悬液中加入三乙胺(1.93ml,13.89mmol)和二碳酸二叔丁酯(2.27g,10.02mmol)。加入4-(二甲基氨基)-吡啶(0.042g,0.34mmol)后，将反应混合物在室温下搅拌3天。减压除去溶剂，并将残余物在hp-sil snap柱(25g)上纯化，使用biotage isolera one纯化系统用乙酸乙酯/正庚烷梯度洗脱(5/95
→
100/0
→
100/0)，得到标题化合物，为灰白色固体(0.558g,92％)。
[0406]1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ＝9.28(s,1h),8.73(d,1h),8.22(d,2h),7.59 8d,1h),1.80(s,9h)
[0407]
步骤b
[0408]
向在微波瓶中的脱气的1,4-二噁烷(3ml)和水(0.7ml)混合物中加入[1,1
′‑
双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(ii)，与二氯甲烷的复合物(0.0058g,0.007mmol)，然后加入上述步骤a的标题化合物(0.05g,0.143mmol)、(6-氟吡啶-3-基)硼酸(0.024g,0.17mmol)和碳酸铯(0.092g,0.286mmol)。然后将反应混合物在～100℃在沙浴中加热4小时。将反应混合物用乙酸乙酯(80ml)和水(35ml)稀释，分离有机相，用na2so4干燥，过滤并真空蒸发溶剂。将该深色残余物经硅胶色谱纯化(12g,puriflash,interchim)，使用biotage isolera系统用二氯甲烷/甲醇梯度洗脱(100/0
→
98/2
→
95/5
→
90/10
→
80/20)，得到较低极性的boc-保护的化合物(0.0255g,49％)和较高极性的比较实施例c2(f-2)，为灰白色固体(0.0116g,31％)。
[0409]
较高极性的比较实施例c2(f-2):
[0410]1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝12.40(br-s,1h),9.40(s,1h),9.05(s,1h),8.78-8.70(m,2h),8.51(d,1h),8.02(d,1h),7.50(d,1h),7.36(dd,1h)
[0411]
ms(esi):m/z＝265.09[m+h]
+
[0412]
较低极性的boc-保护的化合物:
[0413]1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝9.48(s,1h),9.13(d,1h),8.84-8.78(m,2h),8.68(d,1h),8.23(d,1h),8.19(d,1h),7.40(dd,1h),1.75 8s,9h)
[0414]
比较实施例c2(f-2)的合成首先在wo2015/052105(实施例1)中通过不同合成方法描述。
[0415]
比较实施例2(f-2)前体(aci-2449)
[0416][0417]
步骤a
[0418]
向在微波瓶中的脱气的1,4-二噁烷(3ml)和水(0.7ml)混合物中加入[1,1
′‑
双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(ii)，与二氯甲烷的复合物(0.0058g,0.007mmol)，然后加入获自比较实施例2步骤a的标题化合物(0.05g,0.143mmol)、2-硝基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶(0.0428g,0.17mmol)和碳酸铯(0.092g,0.286mmol)。然后将反应混合物在～100℃在沙浴中加热4小时。将反应混合物用乙酸乙酯(80ml)和水(35ml)稀释，分离有机相，用na2so4干燥，过滤并真空蒸发溶剂。将该深色残余物经硅胶色谱纯化(12g,puriflash,interchim)，使用biotage isolera系统用二氯甲烷/甲醇梯度洗脱(100/0
→
98/2
→
95/5
→
90/10
→
80/20)，得到比较实施例c2(f-2)前体，为浅黄色固体(0.0173g,31％)。
[0419]1h-nmr(400mhz,cdcl3/cd3od)δ＝9.45(d,1h),9.32(s,1h),8.93(dd,1h),8.68-8.64(m,2h),8.46(d,1h),8.35(d,1h),8.14(d,1h),1.82(s,9h)
[0420]
ms(esi):m/z＝392.13[m+h]
+
[0421]
比较实施例c2(f-2)前体的合成首先在wo2015/052105(实施例3a)中通过不同合成方法描述。
[0422]
比较实施例5(f-5)(aci-2632)
[0423][0424]
步骤a
[0425]
向在微波瓶中的脱气的1,4-二噁烷(4.3ml)和水(1ml)混合物中加入[1,1
′‑
双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(ii)，与二氯甲烷的复合物(0.0084g,0.01mmol)，然后加入获自制备实施例a的标题化合物(0.05g,0.2mmol)、3-氟-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶(0.055g,0.246mmol)和碳酸铯(0.133g,0.41mmol)。然后将反应混合物在～115℃在沙浴中加热6小时。将反应混合物用乙酸乙酯(60ml)和水(20ml)稀释，分离有机相，用na2so4干燥，过滤并真空蒸发溶剂。将该深色残余物经硅胶色谱纯化(25g hp-sil)，使用biotage isolera系统用二氯甲烷/甲醇梯度洗脱(100/0
→
95/5
→
90/10
→
80/20)，得到比较实施例c5(f-5)，为灰白色固体(0.022g,43％)。
[0426]1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝12.45(br-s,1h),9.45(s,1h),9.31(s,1h),8.80(d,1h),8.67(d,1h).8.53(d,1h),8.46-8.40(m,1h),8.11(d,1h),7.52(d,1h)
[0427]
ms(esi):m/z＝265.06[m+h]
+
[0428]
比较实施例5(f-5)前体(aci-2719)
[0429][0430]
步骤a
[0431]
向在微波瓶中的脱气的1,4-二噁烷(4ml)混合物中加入[1,1
′‑
双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(ii)，与二氯甲烷的复合物(0.017g,0.02mmol)，然后加入获自制备实施例b的标题化合物(0.1g,0.2mmol)、双(频哪醇基)二硼烷(0.056g,0.22mmol)和乙酸钾(0.059g,0.6mmol)。然后将反应混合物在～95℃在沙浴中加热18小时。将反应混合物用乙酸乙酯(100ml)和水(30ml)稀释，分离有机相，用na2so4干燥，过滤并真空蒸发溶剂，得到粗的标题化合物，其在下一步骤中直接使用。
[0432]
步骤b
[0433]
在微波瓶中将获自上述步骤a的粗的标题化合物溶于脱气的1,4-二噁烷(4.3ml)和水(1ml)混合物中。然后加入[1,1
′‑
双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(ii)，与二氯甲烷的复合物(0.017g,0.02mmol)，加入3-溴-5-硝基吡啶(0.05g,0.245mmol)和碳酸铯(0.133g,0.41mmol)，并将反应混合物在～115℃在沙浴中加热6小时。
[0434]
将反应混合物用乙酸乙酯(80ml)和水(30ml)稀释，分离有机相，用na2so4干燥，过滤并真空蒸发溶剂。将该深色残余物经硅胶色谱纯化(25g puriflash,interchim)，使用biotage isolera系统用乙酸乙酯/正庚烷梯度洗脱(5/95
→
100/0
→
100/0)，得到比较实施例c5(f-5)前体，为浅黄色固体(0.0144g,13％)。
[0435]1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ＝9.36(d,1h),9.30(s,1h),9.02(d,1h)；8.52-8.48(m,2h),8.29(d,1h),7.80(d,1h),7.60-7.55(m,5h),7.33-7.25(m,10h),6.46(d,1h)
[0436]
ms(esi):m/z＝533.67[m+h]
+
。
[0437]
比较实施例6(f-6)(aci-2843)
[0438][0439]
步骤a
[0440]
在20ml微波管中溶解获自制备实施例b的标题化合物(0.2g,0.408mmol)和4-氟-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶(0.182g,0.816mmol)在n,n
’‑
二甲基乙酰胺(5.10ml)中的溶液。加入碳酸钠(0.816ml,1.631mmol)，并将所得搅拌中的溶液脱
气5分钟。然后加入[1,1
′‑
双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(ii)与二氯甲烷的复合物，并将该反应混合物加热至110℃持续22小时。tlc监测显示反应完全。将反应混合物用二氯甲烷稀释，经硅藻土滤出不溶物，并将滤液用水洗涤三次以除去剩余量的n,n
’‑
二甲基乙酰胺。将有机层用mgso4干燥，过滤并浓缩。将残余物经biotage isolera one(100:0至90:10二氯甲烷/甲醇；25g hp-sil柱)纯化，得到标题化合物(0.1036g；50％)。
[0441]1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝9.43(s,1h),8.75(d,1h),8.54(dd,,1h),8.26(d,1h),8.17(d,1h),7.83(dd,1h),7.61-7.52(m,6h),7.41(dd,1h),7.35-7.20(m,9h),6.46(d,1h)。
[0442]
ms[m+h]
+
＝507.43,243.29
[0443]
步骤b
[0444]
在25ml圆底烧瓶中，将获自上述步骤a的标题化合物(0.1g,0.199mmol)溶于二氯甲烷(1ml)中。小心加入三氟乙酸(1ml)，并将反应混合物在室温下搅拌18小时。冷却至0℃后，将反应混合物用2m氢氧化钠溶液调至ph＝10猝灭。将所得混悬液过滤。将反应混合物用水和盐水洗涤。将有机物用mgso4干燥，过滤并浓缩。将残余物经biotage isolera one(100:0-90:10二氯甲烷/甲醇；10g hp-sil柱)纯化，得到比较实施例c6(f-6)(0.026g；47％)。
[0445]1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ12.57(s,1h),9.46(s,1h),9.19(d,1h),8.80(d,1h),8.70(s,1h),8.59-8.52(m,1h),7.81(d,1h),7.55(d,2h)
[0446]
ms[m+h]
+
＝265.29
[0447]
比较实施例6(f-6)前体(aci-2764)
[0448][0449]
步骤a
[0450]
在20ml微波管中，将获自制备实施例b的标题化合物(0.2g,0.408mmol)和4-硝基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶(0.204g,0.816mmol)溶于n,n
’‑
二甲基乙酰胺(5.10ml)中。加入碳酸钠(0.816ml,1.631mmol)，并将所得搅拌中的溶液脱气5分钟。然后加入[1,1
′‑
双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(ii)与二氯甲烷的复合物(0.017g,0.02mmol)，并将反应混合物加热至110℃持续22小时。tlc监测显示反应完全。将反应混合物用二氯甲烷稀释，经硅藻土滤出不溶物，并将滤液用水洗涤三次以除去剩余量的n,n
’‑
二甲基乙酰胺。将有机层用mgso4干燥，过滤并浓缩。将残余物经biotage isolera one纯化，用乙酸乙酯/正庚烷梯度洗脱(5/95
→
100/0
→
100/0)，得到比较实施例c6(f-6)前体，为浅黄色固体(0.056g,28％)。
[0451]1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝9.45(s,1h),8.81(d,1h),8.69(d,1h),8.32-8.23(m,3h),8.20(d,1h),7.60(dd,6h),7.36-7.22(m,9h),6.52(d,1h),5.76(s,1h)。
[0452]
ms(esi):m/z＝533.87[m+h]
+
。
[0453]
比较实施例7(f-7)(aci-2731)
[0454][0455]
步骤a
[0456]
向在微波瓶中的脱气的1,4-二噁烷(4.3ml)和水(1ml)混合物中加入[1,1
′‑
双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(ii)，与二氯甲烷的复合物(0.0084g,0.01mmol)，然后加入获自制备实施例a的标题化合物(0.05g,0.2mmol)、2-氟-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶(0.055g,0.246mmol)和碳酸铯(0.133g,0.41mmol)。将反应混合物在～115℃在沙浴中加热6小时。将反应混合物用乙酸乙酯(60ml)和水(20ml)稀释，分离有机相，用na2so4干燥，过滤并真空蒸发溶剂。将该深色残余物经硅胶色谱纯化(25g hp-sil)，使用biotage isolera系统用二氯甲烷/甲醇梯度洗脱(100/0
→
95/5
→
90/10
→
80/20)，得到比较实施例c7(f-7)，为灰白色固体(0.033g,63％)。
[0457]1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝12.42(s,1h),9.41(s,1h),8.77(d,1h),8.52(d,1h),8.40(dd,1h),8.27(d,1h),8.18(q,1h),7.51(d,1h),7.26(dd,1h)
[0458]
ms(esi):m/z＝265.09[m+h]
+
[0459]
比较实施例7(f-7)前体(aci-2778)
[0460][0461]
步骤a
[0462]
向在微波瓶中的脱气的n,n
’‑
二甲基乙酰胺(4ml)混合物中加入[1,1
′‑
双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(ii)，与二氯甲烷的复合物(0.017g,0.02mmol)，然后加入获自制备实施例b的标题化合物(0.1g,0.2mmol)、双(频哪醇基)二硼烷(0.056g,0.22mmol)和乙酸钾(0.059g,0.6mmol)。然后将反应混合物在～95℃在沙浴中加热18小时。将反应混合物用乙酸乙酯(100ml)和水(30ml)稀释，分离有机相，用na2so4干燥，过滤并真空蒸发溶剂，得到粗的标题化合物，其在下一步骤中直接使用。
[0463]
步骤b
[0464]
在20ml微波管中，将获自上述步骤a的粗的标题化合物、2-溴-6-硝基吡啶(0.05g,0.245mmol)溶于n,n
’‑
二甲基乙酰胺(5.10ml)中。加入碳酸钠(0.408ml,0.816mmol)，并将所得搅拌中的溶液脱气5分钟。然后加入[1,1
′‑
双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(ii)与二
氯甲烷的复合物(0.017g,0.02mmol)，并将反应混合物加热至110℃持续22小时。tlc监测显示反应完全。将反应混合物用二氯甲烷稀释，经硅藻土滤出不溶物，将滤液用水洗涤三次，以除去剩余量的n,n
’‑
二甲基乙酰胺。将有机层用mgso4干燥，过滤并浓缩。将残余物经biotage isolera one纯化，用乙酸乙酯/正庚烷梯度洗脱(5/95
→
100/0
→
100/0)，得到比较实施例c7(f-7)前体，为浅黄色固体(0.0174g,16％)。
[0465]1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝9.43(s,1h),9.38(s,1h),8.81(d,1h),8.60(dd,1h),8.33(d,1h),8.28-8.24(m,2h),8.18(d,1h),8.10(t,1h),7.61(d,7h),7.47(d,4h),7.42(d,1h),7.28(tt,18h),6.58(d,1h),6.19(d,1h)
[0466]
ms(esi):m/z＝533.62[m+h]
+
。
[0467]
比较实施例8(f-8)(aci-2876)
[0468][0469]
步骤a
[0470]
向在微波瓶中的脱气的1,4-二噁烷(8ml)混合物中加入[1,1
′‑
双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(ii)，与二氯甲烷的复合物(0.034g,0.04mmol)，然后加入获自制备实施例b的标题化合物(0.2g,0.4mmol)、双(频哪醇基)二硼烷(0.112g,0.44mmol)和乙酸钾(0.118g,1.2mmol)。然后将反应混合物在～95℃在沙浴中加热18小时。将反应混合物用乙酸乙酯(100ml)和水(30ml)稀释，分离有机相，用na2so4干燥，过滤并真空蒸发溶剂，得到粗的标题化合物，其在下一步骤中直接使用。
[0471]
步骤b
[0472]
将获自上述步骤a的粗的标题化合物溶于在微波瓶中的脱气的1,4-二噁烷(8.6ml)和水(2ml)混合物中。然后加入[1,1
′‑
双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(ii)，与二氯甲烷的复合物(0.034g,0.04mmol)，加入2-溴-5-氟吡啶(0.086g,0.49mmol)和碳酸铯(0.266g,0.82mmol)，并将反应混合物在～115℃在沙浴中加热6小时。将反应混合物用乙酸乙酯(100ml)和水(30ml)稀释，分离有机相，用na2so4干燥，过滤并真空蒸发溶剂。将该深色残余物经硅胶色谱纯化(25g puriflash,interchim)，使用biotage isolera系统用乙酸乙酯/正庚烷梯度洗脱(5/95
→
100/0
→
100/0)，得到标题化合物和副产物的混合物(0.064g)。
[0473]
步骤c
[0474]
将获自上述步骤b的标题化合物和副产物的混合物(0.064g)经制备型tlc纯化，～
0.03克混合物/1000μm snaltech uniplate(20x 20cm)上载量，用二氯甲烷/丙酮(90/10)作为流动相，得到较高极性的标题化合物，为灰白色固体(0.0385g,3个步骤18.5％)。
[0475]1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ＝9.26(s,1h),8.45(d,1h),8.38(ab-体系,2h),8.25(d,1h),7.62-7.58(m,5h),7.30-7.18(m,12h),6.56(d,1h)
[0476]
步骤d
[0477]
将获自上述步骤c的标题化合物(0.0385g,0.076mmol)溶于二氯甲烷(5ml)中，并加入三氟乙酸(1.2ml)。将反应混合物在室温下搅拌6小时。将反应混合物用二氯甲烷(50ml)和水(20ml)稀释。通过加入1m氢氧化钠水溶液将水相的ph调至ph～12。分离水层，用二氯甲烷(25ml)萃取，将合并的有机层用na2so4干燥，过滤并减压除去溶剂。将残余物经硅胶色谱纯化(10g hp-sil-柱)，使用biotage isolera系统用二氯甲烷/甲醇梯度洗脱(100/0
→
95/5
→
90/10)，得到比较实施例c8(f-8)，为白色固体(0.0079g,39.3％)
[0478]1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝12.40(br-s,1h),9.40(s,1h),8.77(d,1h),8.72(d,1h),8.55-8.50(m,2h),8.35(d,1h),7.95-7.90(m,1h),7.51(d,1h)
[0479]
ms(esi):m/z＝265.06[m+h]
+
。
[0480]
比较实施例c8(f-8)前体的合成首先在wo2016/124508(实施例18)中通过不同合成方法描述。
[0481]
比较实施例8(f-8)前体(aci-2877)
[0482][0483]
步骤a
[0484]
向在微波瓶中的脱气的1,4-二噁烷(8ml)混合物中加入[1,1
′‑
双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(ii)，与二氯甲烷的复合物(0.034g,0.04mmol)，然后加入获自制备实施例b的标题化合物(0.2g,0.4mmol)、双(频哪醇基)二硼烷(0.112g,0.44mmol)和乙酸钾(0.118g,1.2mmol)。然后将反应混合物在～95℃在沙浴中加热18小时。将反应混合物用乙酸乙酯(100ml)和水(30ml)稀释，分离有机相，用na2so4干燥，过滤并真空蒸发溶剂，得到粗的标题化合物，其在下一步骤中直接使用。
[0485]
步骤b
[0486]
将获自上述步骤a的粗的标题化合物溶于在微波瓶中的脱气的1,4-二噁烷
(8.6ml)和水(2ml)混合物中。然后加入[1,1
′‑
双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(ii)，与二氯甲烷的复合物(0.034g,0.04mmol)，加入2-溴-5-硝基吡啶(0.1g,0.49mmol)和碳酸铯(0.266g,0.82mmol)，并将反应混合物在～115℃在沙浴中加热6小时。将反应混合物用乙酸乙酯(100ml)和水(30ml)稀释，分离有机相，用na2so4干燥，过滤并真空蒸发溶剂。将该深色残余物经硅胶色谱纯化(25g puriflash,interchim)，使用biotage isolera系统用乙酸乙酯/正庚烷梯度洗脱(5/95
→
100/0
→
100/0)，得到标题化合物和副产物的混合物(0.0788g)。
[0487]
步骤c
[0488]
将获自上述步骤b的标题化合物和副产物(0.0788g)溶于二氯甲烷(10ml)，并加入三氟乙酸(2.4ml)。将反应混合物在室温下搅拌6小时，并随后加入甲醇(10ml)。真空蒸发溶剂，并将残余物悬浮于甲醇(10ml)。再次真空蒸发溶剂，并将残余物悬浮于二氯甲烷(4ml)。加入三乙胺(2ml,14.4mmol)、二碳酸二叔丁酯(0.2g,0.86mmol)和4-(二甲基氨基)-吡啶(0.0036g,0.028mmol)后，将反应混合物在室温下搅拌18小时。将反应混合物用乙酸乙酯(100ml)和水(40ml)稀释。分离有机相，用na2so4干燥，过滤并真空除去溶剂。将残余物在硅胶上纯化(25g puriflash,interchim)，使用biotage isolera one纯化系统用乙酸乙酯/正庚烷梯度洗脱(5/95
→
100/0
→
100/0)，得到比较实施例c8(f-8)前体，为浅黄色固体(0.0149g,25.7％)。
[0489]1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ＝9.55(d,1h),9.36(s,1h),8.88(d,1h),8.77(d,1h),8.72(d,1h),8.65(dd,1h),8.56(d,1h),8.30(d,1h),1.87(s,9h)
[0490]
ms(esi):m/z＝391.93[m+h]
+
。
[0491]
比较实施例9(f-9)(aci-2930)
[0492][0493]
步骤a
[0494]
向在微波瓶中的脱气的1,4-二噁烷(8ml)混合物中加入[1,1
′‑
双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(ii)，与二氯甲烷的复合物(0.034g,0.04mmol)，然后加入获自制备实施例b
的标题化合物(0.2g,0.4mmol)、双(频哪醇基)二硼烷(0.112g,0.44mmol)和乙酸钾(0.118g,1.2mmol)。然后将反应混合物在～95℃在沙浴中加热18小时。将反应混合物用乙酸乙酯(100ml)和水(30ml)稀释，分离有机相，用na2so4干燥，过滤并真空蒸发溶剂，得到粗的标题化合物，其在下一步骤中直接使用。
[0495]
步骤b
[0496]
将获自上述步骤a的粗的标题化合物溶于在微波瓶中的脱气的1,4-二噁烷(8.6ml)和水(2ml)混合物中。然后加入[1,1
′‑
双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(ii)，与二氯甲烷的复合物(0.034g,0.04mmol)，加入2-溴-4-氟吡啶(0.086g,0.49mmol)和碳酸铯(0.266g,0.82mmol)，并将反应混合物在～115℃在沙浴中加热6小时。将反应混合物用乙酸乙酯(100ml)和水(30ml)稀释，分离有机相，用na2so4干燥，过滤并真空蒸发溶剂。将该深色残余物经硅胶色谱纯化(25g puriflash,interchim)，使用biotage isolera系统用乙酸乙酯/正庚烷梯度洗脱(5/95
→
100/0
→
100/0)，得到标题化合物和副产物的混合物(0.0489g)。
[0497]
步骤c
[0498]
将获自上述步骤b的标题化合物和副产物的混合物(0.0489g)溶于二氯甲烷(5ml)，并加入三氟乙酸(1.5ml)。将反应混合物在室温下搅拌6小时。将反应混合物用二氯甲烷(50ml)和水(20ml)稀释。通过加入1m氢氧化钠水溶液将水相的ph调至ph～12。分离水层，用二氯甲烷(25ml)萃取，将合并的有机层用na2so4干燥，过滤，并减压除去溶剂。将残余物经制备型tlc纯化，每1000μm analtech uniplate(20x 20cm)加载～0.03g混合物，用二氯甲烷/甲醇(90/10)作为流动相，得到较低极性的标题化合物，为灰白色固体(0.0145g,7％，3个步骤)和较高极性的两种化合物的混合物。
[0499]1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝9.42(s,1h),8.76(d,1h),8.67(dd,1h),8.35(d,1h),8.27(d,1h),7.67-7.60(m,5h),7.35-7.22(m,11h),6.81(dd,1h),6.60(d,1h)
[0500]
步骤d
[0501]
将获自上述步骤c的较低极性的标题化合物(0.0145g,0.027mmol)溶于二氯甲烷(3ml)，并加入三氟乙酸(2ml)。将反应混合物在室温下搅拌18小时。将反应混合物用二氯甲烷(50ml)和水(20ml)稀释。通过加入1m氢氧化钠水溶液将水相的ph调至ph～12。分离水层，用二氯甲烷(25ml)萃取，将合并的有机层用na2so4干燥，过滤，并减压除去溶剂。将残余物经硅胶色谱纯化(10g hp-sil)，使用biotage isolera系统用二氯甲烷/甲醇梯度洗脱(100/0
→
95/5
→
90/10)，得到比较实施例c9(f-9)，为灰白色固体(0.0025g,33％)。
[0502]1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝12.43(br-s,1h),9.45(s,1h),8.82-8.77(m,2h),8.54(d,1h),8.44(d,1h),8.22(dd,1h),7.53(d,1h),7.46-7.42(m,1h)
[0503]
ms(esi):m/z＝264.63[m+h]
+
。
[0504]
比较实施例9(f-9)前体(aci-2915)
[0505][0506]
步骤a
[0507]
向在微波瓶中的脱气的1,4-二噁烷(8ml)混合物中加入[1,1
′‑
双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(ii)，与二氯甲烷的复合物(0.034g,0.04mmol)，然后加入获自制备实施例b的标题化合物(0.2g,0.4mmol)、双(频哪醇基)二硼烷(0.112g,0.44mmol)和乙酸钾(0.118g,1.2mmol)。然后将反应混合物在～95℃在沙浴中加热18小时。将反应混合物用乙酸乙酯(100ml)和水(30ml)稀释，分离有机相，用na2so4干燥，过滤并真空蒸发溶剂，得到粗的标题化合物，其在下一步骤中直接使用。
[0508]
步骤b
[0509]
将获自上述步骤a的粗的标题化合物溶于在微波瓶的脱气的1,4-二噁烷(8.6ml)和水(2ml)混合物中。然后加入[1,1
′‑
双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(ii)，与二氯甲烷的复合物(0.034g,0.04mmol)，加入2-溴-4-硝基吡啶(0.1g,0.49mmol)和碳酸铯(0.266g,0.82mmol)，并将反应混合物在～115℃在沙浴中加热6小时。将反应混合物用乙酸乙酯(100ml)和水(30ml)稀释，分离有机相，用na2so4干燥，过滤并真空蒸发溶剂。将该深色残余物经硅胶色谱纯化(25g puriflash,interchim)，使用biotage isolera系统用乙酸乙酯/正庚烷梯度洗脱(5/95
→
100/0
→
100/0)，得到标题化合物和副产物的混合物(0.076g)。
[0510]
步骤c
[0511]
将获自上述步骤b的标题化合物和副产物的混合物(0.076g)溶于二氯甲烷(10ml)，并加入三氟乙酸(2.4ml)。将反应混合物在室温下搅拌6小时，并随后加入甲醇(10ml)。真空蒸发溶剂，并将残余物悬浮于甲醇(10ml)。将溶剂再次真空蒸发，并将残余物悬浮于二氯甲烷(4ml)。加入三乙胺(2ml,14.4mmol)、二碳酸二叔丁酯(0.2g,0.86mmol)和4-(二甲基氨基)-吡啶(0.0036g,0.028mmol)后，将反应混合物在室温下搅拌18小时。将反应混合物用乙酸乙酯(100ml)和水(40ml)稀释。分离有机相，用na2so4干燥，过滤并真空除去溶剂。将残余物在硅胶上纯化(25g puriflash,interchim)，使用biotage isolera one纯化系统用乙酸乙酯/正庚烷梯度洗脱(5/95
→
100/0
→
100/0)，得到比较实施例c9(f-9)前体和副产物，为～1.1-混合物(0.0231g,浅黄色固体)。
[0512]1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ＝9.38(d,1h),9.35(d,1h),9,31(s,2h),9.02(d,1h),8.76-8.70(m,5h),8.68(d,1h),8.55(d,1h),8.43-8.37(m,3h),8.12(dd,1h),8.07(dd,1h),7.43(d,1h),7.41(d,1h),1.82(s,18h)
[0513]
ms(esi):m/z＝291.94[标题化合物的mh-boc]
+
,170.04[副产物的mh
+-boc]
+
[0514]
比较实施例10(f-10)(aci-2931)
[0515][0516]
步骤a
[0517]
向在微波瓶中的脱气的1,4-二噁烷(8ml)混合物中加入[1,1
′‑
双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(ii)，与二氯甲烷的复合物(0.034g,0.04mmol)，然后加入获自制备实施例b的标题化合物(0.2g,0.4mmol)、双(频哪醇基)二硼烷(0.112g,0.44mmol)和乙酸钾(0.118g,1.2mmol)。然后将反应混合物在～95℃在沙浴中加热18小时。将反应混合物用乙酸乙酯(100ml)和水(30ml)稀释，分离有机相，用na2so4干燥，过滤并真空蒸发溶剂，得到粗的标题化合物，其在下一步骤中直接使用。
[0518]
步骤b
[0519]
将获自上述步骤a的粗的标题化合物溶于在微波瓶中的脱气的1,4-二噁烷(8.6ml)和水(2ml)混合物中。然后加入[1,1
′‑
双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(ii)，与二氯甲烷的复合物(0.034g,0.04mmol)，加入2-溴-3-氟吡啶(0.086g,0.49mmol)和碳酸铯(0.266g,0.82mmol)，并将反应混合物在～115℃在沙浴中加热6小时。将反应混合物用乙酸乙酯(100ml)和水(30ml)稀释，分离有机相，用na2so4干燥，过滤并真空蒸发溶剂。将该深色残余物经硅胶色谱纯化(25g puriflash,interchim)，使用biotage isolera系统用乙酸乙酯/正庚烷梯度洗脱(5/95
→
100/0
→
100/0)，得到标题化合物和副产物的混合物(0.0586g)。
[0520]
步骤c
[0521]
将获自上述步骤b的标题化合物和副产物的混合物(0.0586g)溶于二氯甲烷(5ml)，并加入三氟乙酸(1.8ml)。将反应混合物在室温下搅拌6小时。将反应混合物用二氯甲烷(50ml)和水(20ml)稀释。通过加入1m氢氧化钠水溶液将水相的ph调至ph～12。分离水层，用二氯甲烷(25ml)萃取，将合并的有机层用na2so4干燥，过滤，并减压除去溶剂。将残余物经硅胶色谱纯化(10g hp-sil)，使用biotage isolera系统用二氯甲烷/甲醇梯度洗脱(100/0
→
95/5
→
90/10)，得到比较实施例c10(f-10)，为灰白色固体(0.0067g,3个步骤
5.7％)。
[0522]1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝12.47(br-s,1h),9.45(s,1h),8.80(d,1h),8.63-8.61(m,1h),8.55-8.53(m,1h),8.00(d,1h),7.94-7.88(m,1h),7.63-7.58(m,1h),7.52(d,1h)
[0523]
ms(esi):m/z＝264.84[m+h]
+
。
[0524]
比较实施例10(f-10)前体(aci-2941)
[0525][0526]
步骤a
[0527]
向在微波瓶中的脱气的1,4-二噁烷(8ml)混合物中加入[1,1
′‑
双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(ii)，与二氯甲烷的复合物(0.034g,0.04mmol)，然后加入获自制备实施例b的标题化合物(0.2g,0.4mmol)、双(频哪醇基)二硼烷(0.112g,0.44mmol)和乙酸钾(0.118g,1.2mmol)。然后将反应混合物在～95℃在沙浴中加热18小时。将反应混合物用乙酸乙酯(100ml)和水(30ml)稀释，分离有机相，用na2so4干燥，过滤并真空蒸发溶剂，得到粗的标题化合物，其在下一步骤中直接使用。
[0528]
步骤b
[0529]
将获自上述步骤a的粗的标题化合物溶于在微波瓶中的脱气的1,4-二噁烷(8.6ml)和水(2ml)混合物中。然后加入[1,1
′‑
双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(ii)，与二氯甲烷的复合物(0.034g,0.04mmol)，加入2-溴-3-硝基吡啶(0.1g,0.49mmol)和碳酸铯(0.266g,0.82mmol)，并将反应混合物在～115℃在沙浴中加热6小时。将反应混合物用乙酸乙酯(100ml)和水(30ml)稀释，分离有机相，用na2so4干燥，过滤并真空蒸发溶剂。将该深色残余物经硅胶色谱纯化(25g puriflash,interchim)，使用biotage isolera系统用乙酸乙酯/正庚烷梯度洗脱(5/95
→
100/0
→
100/0)，得到标题化合物和副产物的混合物(0.0538g)。
[0530]
步骤c
[0531]
将获自上述步骤b的标题化合物和副产物的混合物(0.0538g)溶于二氯甲烷(4ml)，并加入三氟乙酸(2.5ml)。将反应混合物在室温下搅拌16小时，然后加入甲醇(10ml)。真空蒸发溶剂，并将残余物悬浮于甲醇(10ml)。再次真空除去溶剂，并将残余物悬
浮于二氯甲烷(4ml)。加入三乙胺(2ml,14.4mmol)、二碳酸二叔丁酯(0.2g,0.86mmol)和4-(二甲基氨基)-吡啶(0.0036g,0.028mmol)后，将反应混合物在室温下搅拌18小时。将反应混合物用乙酸乙酯(100ml)和水(40ml)稀释。分离有机相，用na2so4干燥，过滤并真空除去溶剂。将残余物在硅胶上纯化(25g puriflash,interchim)，使用biotage isolera one纯化系统用乙酸乙酯/正庚烷梯度洗脱(5/95
→
100/0
→
100/0)，得到比较实施例c10(f-10)前体，为浅黄色固体(0.0194g,3个步骤12.1％)。
[0532]1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ＝9.35(d,1h),8.90(d,1h),8.73(d,1h),8.58(d,1h),8.24-8.17(m,3h),7.57-7.53(m,1h),1.73(s,9h)
[0533]
ms(esi):m/z＝391.92[mh
+
],291.90[mh
+-boc]
[0534]
18
f-标记化合物的合成
[0535]
通用
18
f-氟化方法a(直接芳香性
18
f-氟化)
[0536]
将n.c.a[18f]氟化物(2-5gbq)捕获在sep-pak accell plus qma光柱(waters)上，并用溶液k2co3/2.2.2洗脱。在120℃下使用n2流除去水，并用mecn(3
×
1ml)共蒸发至干。然后，将溶解的前体溶液加入到干燥的k[
18
f]f-k
222
复合物中。将反应小瓶密封并在常规加热下在130℃下加热15分钟。随后，用水淬灭反应混合物，并通过半制备hplc纯化粗产物。将分离的示踪剂用水(35ml)稀释，捕获在c-18plus柱(waters)上，用水(5ml)洗涤，用乙醇(1ml)洗脱并配制在盐水中。
[0537]
通用
18
f-氟化方法b(直接
18
f-标记加脱保护)
[0538]
示踪剂从n.c.a.[
18
f]氟化物(1-10gbq)开始通过
18
f-直接氟化合成。将[
18
f]氟化物水溶液捕获在sep-pak accell plus qma光柱(waters)上，并用溶液k2co3/2.2.2洗脱。在120℃下使用n2流除去水，并用mecn(3
×
1ml)共蒸发至干。然后，将相应的溶解的前体加入到干燥的k[
18
f]f-k
222
复合物中。将反应小瓶密封并在120-160℃下加热15分钟(加热块)。为了脱保护，加入盐酸并将混合物在110℃下再搅拌10分钟。用氢氧化钠溶液中和后，用甲酸铵缓冲液猝灭反应混合物，并将其捕获在c-18plus柱(waters)上。将柱用水(5ml)洗涤，用乙腈洗脱，随后通过半制备hplc纯化粗产物。将分离的示踪剂用水(25ml)稀释，捕获在c-18plus柱(waters)上，用水(5ml)洗涤，用乙醇(1ml)洗脱并配制在盐水中。
[0539]
比较实施例
18
f-1
[0540]
18
f-1(680mbq)是根据通用
18
f-氟化方法a用相应的硝基前体分子(m.timothy等人,j.labelled comp.radiopharm.(2013),56(14),736-740)(2.8mg，7.1μmol)在二甲基亚砜(0.6ml)中合成。
[0541]
通过分析型反相hplc(tr(rad-trace)＝3.19min)测定放射化学纯度为100％。通过与非放射性参照f-1比较保留时间确认
18
f-1。
[0542]
比较实施例
18
f-2
[0543]
18
f-2(680mbq)根据通用
18
f-氟化方法a用比较实施例2(f-2)前体(wo2015/052105)(3.4mg，8.7μmol)在二甲基亚砜(0.6ml)中合成。通过分析型反相hplc(tr(rad-trace)＝3.27min)测定放射化学纯度为98％。通过与非放射性参照f-2比较保留时间确认
18
f-2。
[0544]
实施例
18
f-3a[
18
f]pi-2620
[0545][0546]
18
f-3a(450mbq)根据通用
18
f-氟化方法b用前体化合物13(2.6mg,4.8μmol)在二甲基亚砜(0.6ml)中合成。通过分析型反相hplc(tr(rad-trace)＝3.31min)测定放射化学纯度为100％。通过与非放射性参照f-3a比较保留时间确认
18
f-3a。
[0547]
放射性标记的实施例
18
f-3b和比较实施例
18
f-5、
18
f-6、
18
f-7、
18
f-8、
18
f-9、
18
f-10根据方法b从如上所述的相应前体分子开始合成。
[0548]
测定ad和健康对照脑匀浆中的结合
[0549]
在800bq的
18
f标记的tau结合剂存在下，将20μg人阿尔茨海默病脑匀浆与每种测试化合物的系列稀释液(1000至0.06nm)的一起孵育。将样品在110rpm下在37℃下摇动45分钟。然后将样品通过gf/b 96孔滤板过滤，并用300μl测定缓冲液(含有0.1％bsa和2％dmso的pbs)洗涤两次。此后，密封滤板并将fuji film imaging plate(bas-sr2025)置于顶部。在过夜暴露后使用fuji film bas-5000分析成像板。在不含脑底物和竞争物的测定缓冲液存在下，用含有
18
f标记的tau参照结合剂的样品测定非特异性信号。通过从测量的样品信号中减去非特异性信号来计算特异性结合。未阻断的
18
f标记的tau-结合剂信号定义为总结合。通过prism v6(graphpad)将总结合设定为100％来计算ic 50值。
[0550]
结果：
[0551]
在采用人ad脑匀浆的竞争测定中发现化合物f-1、f-2和f-3a的高tau亲和力。测量所有化合物的tau结合的ic 50值《2nm。
[0552]
用化合物
18
f-3a获得ad脑匀浆和健康对照脑匀浆之间的高信噪比，比例为6.7。对于化合物
18
f-1，获得ad脑匀浆与健康对照脑匀浆之间的低信噪比，其为1.3。
[0553]
用另外的人脑组织产生了另外的数据。
[0554]
确定化合物
18
f-3a的ad脑匀浆和健康对照脑匀浆之间的信噪比分别为14.0、17.9、33.8。
[0555]
化合物
18
f-1获得显著更低的值，其中那些比率仅为1.7、1.8和2.5。
[0556]
化合物
18
f-2在ad脑匀浆中的信号与健康对照脑匀浆中的信号之间显示出显著更低的比率(3.3、4.5、6.9)。
[0557]
人脑切片中的放射自显影
[0558]
通过放射自显影检查18微米厚的冷冻人脑切片和6微米厚的人ffpe脑切片。在用于实验之前，将脑切片在1xpbs溶液中平衡至少1小时。每个脑切片用
18
f-标记的示踪剂(200bq/μl,500μl)在1xpbs中的溶液覆盖。对于用相应的
19
f-化合物进行的封闭实验，将过量的封闭化合物(10μm)与
18
f-化合物混合。使得脑切片在室温下与示踪剂溶液一起孵育1小时，然后排干并置于载玻片架中。然后将载玻片依次用1
×
pbs洗涤1分钟；在1
×
pbs中的70％etoh洗涤2分钟；在1
×
pbs中30％etoh洗涤2分钟；和1
×
pbs洗涤1分钟。将载玻片空气干燥，然后置于fuji成像板上30分钟，过夜暴露。扫描成像板并用fuji软件测量信号以产生脑切片的放射自显影图像。
[0559]
结果：
[0560]
在采用人脑切片(ad、psp、pid、hc)的放射自显影研究中测试化合物
18
f-3a。使用来自ad脑的切片，可检测到强烈的点状染色，其可以通过添加过量的相应冷化合物来阻断。在健康对照(hc)切片中，没有可见的特异性信号(图1)。在psp和pid脑切片上对于化合物
18
f-3a获得了类似结果。
[0561]
测定ad脑匀浆中对淀粉样蛋白-β的结合亲和力
[0562]
在800bq的
18
f-标记的β-淀粉样蛋白结合剂存在下，将20μg人阿尔茨海默病脑匀浆与各试验化合物的系列稀释液(1000至0.06nm)一起孵育。将样品在110rpm下在37℃下摇动45分钟。然后将样品通过gf/b 96孔滤板过滤，并用300μl测定缓冲液(含有0.1％bsa和2％dmso的pbs)洗涤两次。此后，密封滤板并将fuji film imaging plate(bas-sr2025)置于顶部。使用fuji film bas-5000进行过夜暴露后分析成像板。在没有脑底物和竞争物的测定缓冲液存在下，用含有
18
f标记的β-淀粉样蛋白结合剂的样品测定非特异性信号。通过从测量的样品信号中减去非特异性信号来计算特异性结合。未阻断的
18
f标记的β-淀粉样蛋白结合剂信号定义为总结合。通过prism v6(graphpad)将总结合设定为100％来计算ic
50
值。
[0563]
结果：
[0564]
在采用人ad脑匀浆的竞争测定中发现化合物f-1、f-2和f-3a对β-淀粉样蛋白的低亲和力。测量所有化合物的β-淀粉样蛋白结合的ic50值》1μm。
[0565]
测定hc脑匀浆中对mao a的结合亲和力
[0566]
在800bq的
18
f标记的mao-a结合剂([
18
f]氟乙基肉叶芸香碱(fluoroethyl harmine)，feh)存在下，将20μg人脑匀浆(无ad病理学)与每种测试化合物的系列稀释液(1000至0.06nm)一起孵育。将样品在110rpm下在37℃下摇动45分钟。然后将样品通过gf/b 96孔滤板过滤，并用300μl测定缓冲液(含有0.1％bsa和2％dmso的pbs)洗涤两次。此后，密封滤板并将fuji film imaging plate(bas-sr2025)置于顶部。使用fuji film bas-5000在进行过夜暴露后分析成像板。在没有脑底物和竞争物的测定缓冲液存在下，用含有
18
f标记的feh的样品测定非特异性信号。通过从测量的样品信号中减去非特异性信号来计算特异性结合。未阻断的
18
f标记的feh信号定义为总结合。通过prism v6(graphpad)将总结合设定为100％来计算ic50值。
[0567]
结果：
[0568]
在小鼠脑匀浆中，化合物f-1在
18
f-feh竞争测定中显示出22nm的对mao a的高脱靶亲和力。化合物f-2的亲和力降低至475nm，而化合物f-3a对mao a的脱靶亲和力进一步降低，ic
50
值为1400nm。采用于人对照脑匀浆(健康对照)，化合物f-1在feh竞争测定中显示出5nm的对mao a的高脱靶亲和力。化合物f-2的亲和力降低至100nm，而化合物f-3a对mao a的脱靶亲和力进一步降低，ic
50
值分别为1100nm和530nm。
[0569]
测定hc脑匀浆中对mao b的结合亲和力
[0570]
在800bq的
18
f标记的mao-b结合剂([
18
f]氟司来吉兰(fluoro deprenyl))的存在下，将20μg人脑匀浆(无ad病理学)与每种测试化合物的系列稀释液(1000至0.06nm)一起孵育。将样品在110rpm下在37℃下振荡45分钟。然后将样品通过gf/b 96孔滤板过滤，并用300μl测定缓冲液(含有0.1％bsa和2％dmso的pbs)洗涤两次。此后，密封滤板并将fuji film imaging plate(bas-sr2025)置于顶部。使用fuji film bas-5000在进行过夜暴露后分析成像板。在没有脑底物和竞争物的测定缓冲液存在下，用含有
18
f标记的氟司来吉兰的样品
测定非特异性信号。通过从测量的样品信号中减去非特异性信号来计算特异性结合。未阻断的
18
f标记的氟司来吉兰信号定义为总结合。通过prism v6(graphpad)将总结合设定为100％来计算ic
50
值。
[0571]
结果：
[0572]
在人hc脑匀浆中，化合物f-1在
18
f标记的氟司来吉兰竞争测定中显示出170nm的对mao b的高脱靶亲和力。化合物f-3的亲和力降低至》1000nm的值。
[0573]
健康小鼠的pk研究
[0574]
用
18
f标记的化合物静脉内注射nmri小鼠(重量范围25-35g)。注射高达150μl含有
18
f标记化合物(2-10mbq)的含10％-15％etoh或稀释介质(57％注射用水、18％聚乙二醇400、15％乙醇、10％水)的1xpbs溶液。在注射示踪剂之前用异氟烷诱导麻醉并在图像采集期间保持麻醉。使用siemens inveon小动物pet/ct扫描仪(siemens,knoxville,tn)进行pet扫描。在通过尾静脉向动物注射放射性剂量之前立即开始pet采集。动态扫描60分钟生成图像。
[0575]
结果：
[0576]
化合物
18
f-1：峰值摄取：5.3％id/g，摄取峰值比率/30分钟：6.8，60分钟时脑保留：0.8％id/g，60分钟时肩关节骨摄取：4.0％id/g。
[0577]
化合物
18
f-2：峰值摄取：5.7％id/g，摄取峰值比率/30分钟：10.9，60分钟时脑保留：0.6％id/g，60分钟时肩关节骨摄取：6.2％id/g。
[0578]
化合物
18
f-3a：峰值摄取：4.4％id/g，摄取峰值比率/30分钟：11.2，60分钟时脑保留：0.3％id/g，60分钟时肩关节骨摄取：未检测到。
[0579]
将脑中的峰值摄取设定为100％并且产生洗除曲线以评估来自正常脑的活性清除率(图2)。
[0580]
人体成像研究
[0581]
在临床试验中，患有ad或psp以及非痴呆对照(ndc)的个体以370mbq推注
18
f-3a后进行动态pet成像历经3小时。
[0582]
结果
[0583]
初始成像数据显示强大脑摄取和在非目标区域的快速洗除。在ndc中，在脉络丛、基底神经节、纹状体、杏仁核、脑膜或用其它tau试剂注意到的其他区域中没有观察到增加的摄取(图4a)。
18
f-3a显示良好的脑摄取和从非靶区域的快速洗除(见图3)。在ad中，局灶性不对称摄取在颞叶、顶叶和额叶中明显(图4b)。最后，psp个体表现出在苍白球和黑质中的局灶性摄取增加(图5a&b)。
[0584]
表1:临床前特征总结
[0585][0586]-差,
○
中度,+良好,++非常好,+++优秀
[0587]
a)内部(in house)数据，见上面的实验部分；
[0588]
b)用非放射性氟-19衍生物f-1、f-2和f-3a测定；
[0589]
c)用放射性氟-18衍生物
18
f-1、
18
f-2和
18
f-3a测定；
[0590]
d)marquie等人2015；
[0591]
e)wo2015/052105；
[0592]
f)没有检测到脱氟
[0593]
e)honer等人,human amyloid imaging meeting 2017；
[0594]
na:未获得。
[0595]
从表1中可以看出，现有技术的化合物
18
f-1和
18
f-2具有局限性，特别是在以下方面：
[0596]
·
与非ad tau病变中的tau同种型的低结合，
[0597]
·
对mao a的亲和力，并因此对tau的选择性低，
[0598]
·
在健康脑中不具有低信号，
[0599]
·
在健康脑不具有快速洗除，
[0600]
·
在健康脑中长期保留，和/或
[0601]
·
体内脱氟。
[0602]
另一方面，化合物
18
f-3a显示：
[0603]
·
特异性结合ad和非ad tau病变脑切片(实例：与化合物
18
f-1和
18
f-2的报告相比，对psp和pid的强信号)，
[0604]
·
整个小鼠脑匀浆中对mao a的亲和力较低(ic
50
比化合物
18
f-1高64倍，ic
50
比化合物
18
f-2高3倍)，
[0605]
·
对hc脑匀浆中mao a的亲和力较低(ic
50
比化合物
18
f-1高220倍，ic
50
比化合物
18
f-2高11倍)，
[0606]
·
hc脑匀浆中对mao b的亲和力较低(ic
50
比化合物
18
f-1高》5倍)，
[0607]
·
更高的信噪比，通过对比ad脑匀浆与hc脑匀浆中的结合来测定(比
18
f-1的比率高5.2倍，
[0608]
·
更高的信噪比，通过进一步对比ad脑匀浆与hc脑匀浆中的结合来测定(比
18
f-1的比率高8.2-13.5倍，比
18
f-2的比率高4.0倍至4.9倍)，
[0609]
·
更高的信噪比，通过对比ad脑匀浆与整个小鼠脑匀浆中的结合来测定(比
18
f-1的比率高4.2倍，
[0610]
·
从健康脑的更快速洗除(比化合物
18
f-1快1.6倍)，
[0611]
·
在小鼠的健康脑中较低的长期保留(比化合物
18
f-1低2.7倍，且比化合物
18
f-2低2倍)，
[0612]
·
在小鼠中无脱氟(与化合物
18
f-1为4.0％id/g和化合物
18
f-2为6.2％id/g相比，无骨摄取)。
[0613]
至少由于其对tau的高亲和力，其较快的脑洗除，健康大脑中较低的长期保留和/或较低的与其他脑靶标的结合亲和力，与现有技术的化合物
18
f-1和
18
f-2相比，通过正电子发射断层摄影术确定和量化在脑中的tau沉积物，化合物
18
f-3a具有显著更好的性质。除了ad中tau沉积物的检测和定量之外，化合物
18
f-3a可用于非ad tau病变的临床评估。
[0614]
已经在人类个体中证实了
18
f-3a的有利的临床前特征。
18
f-3a显示良好的脑摄取和从非靶脑区域的快速洗除(参见图3)。
[0615]
在ad和psp个体中观察到的摄取模式符合tau病理学的预期模式(图4和图5)。
[0616]
令人惊讶地是，3a/
18
f-3a与其区域异构体相比在tau pet成像示踪剂的关键特征
方面显示出显著的优势(表2)。
[0617]
对于比较实施例6/
18
f-6和10/
18
f-10，对tau的结合亲和力弱，对于比较实施例5/
18
f-5、7/
18
f-7和9/
18
f-9，对tau的结合亲和力差(在ad脑匀浆中测定的ic
50
)。
[0618]
对于比较实施例2/
18
f-2、7/
18
f-7和8/
18
f发现了对mao a差的选择性。
[0619]
采用标准条件，比较实施例
18
f-5、
18
f-6、
18
f-8、
18
f-9和
18
f-10的放射性标记是差的(或失败)。
[0620]
对于比较实施例
18
f-10，发现小鼠脑摄取不良。
[0621]
对于比较实施例
18
f-5、
18
f-7和
18
f-10，健康小鼠脑中的洗除较差。
[0622]
对于比较实施例
18
f-2、
18
f-5、
18
f-7和
18
f-10发现小鼠中的脱氟。
[0623]
表2:区域异构体的比较
[0624][0625]-差,
○
中度,+良好,++非常好,+++优秀
[0626]
a)内部数据，见上面的实验部分；
[0627]
b)用对应的非放射性氟-19衍生物测定；
[0628]
c)用放射性氟-18衍生物
18
f-1、
18
f-2和
18
f-3a测定；
[0629]
d)在鼠脑匀浆中的ic
50
[0630]
f)没有检测到脱氟
[0631]
na:未获得。