一种优化卵母细胞培养液的方法与流程

本发明属于辅助生殖，一种优化卵母细胞培养液的方法。

背景技术：

1、女性不孕症影响了大约15％的育龄夫妇，除了在医疗上会产生不良结局外，还会影响家庭和谐、社会稳定，并带来沉重疾病经济负担。在不孕不育夫妇可用的治疗方式中，卵母细胞体外成熟(ivm)是一种辅助生殖技术(art)，它涉及从未受刺激或短期受刺激的个体中收集未成熟的卵丘-卵母细胞复合物(coc)，然后在体外成熟至卵母细胞第二次减数分裂中期。与传统体外受精相比，ivm存在许多优势，包括减少或不使用促性腺激素、成本更低、不存在过度刺激综合症(ohss)、减少每日促性腺激素注射量和减少超声监测，为患者提供更多的便利。

2、1991年人类ivm首次在未受刺激的供体周期中使用。在随后的30年中，ivm的改进一直在逐步进行，即使在今天ivm也没有得到广泛应用，主要是因为人类ivm体外成熟培养液尚不完善，和体内成熟存在较大差异。

技术实现思路

1、发明目的：为了克服现有技术中存在的不足，本发明提供一种优化卵母细胞培养液的方法，通过优化卵母细胞培养液的氨基酸成分，在ivm培养液中添加肌肽优化培养液环境，使其更接近于体内状态，从而提高卵母细胞质量。

2、技术方案：为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

3、一种优化卵母细胞培养液的方法，包括以下步骤：

4、首先将gv时期的卵母细胞在培养液中抑制，培养液成分为mem(gibco,usa)添加75mg/ml penicillin g(sigma),50mg/ml streptomycin sulfate(sigma),25mg/mlpyruvate(sigma),38mg/ml edta(sigma)and 3mg/ml bsa.

5、在此过程持续添加肌肽，肌肽浓度为10um；然后洗去营养液，使卵母细胞恢复减数分裂并排出第一极体。

6、以上所述步骤中，所述营养液为包含米力农的培养液，抑制过程为6h。

7、有益效果：本发明提供了一种优化卵母细胞培养液的方法，在卵母细胞培养液中添加肌肽，优化卵母细胞培养液的氨基酸成分，能够促进老龄卵母细胞减数分裂成熟，提高老龄卵母细胞成熟质量；肌肽可以通过不同的机制降低氧化应激反应，尤其是可以降低ros水平并维持谷胱甘肽的水平，已知衰老卵母细胞中ros活性显著增加，氨基酸代谢结果显示老龄卵母细胞肌肽含量减少接近一半，通过在培养液中添加肌肽，可以显著提高卵母细胞质量；肌肽已经广泛的应用于临床动物模型的研究，但是在卵巢中的功能仍知之甚少，本发明提出通过补充肌肽提高老龄卵母细胞质量，不仅具有严谨的科学性，而且具有很强的可行性，可以为临床优化人卵母细胞体外成熟体系提供参考。

技术特征：

1.一种优化卵母细胞培养液的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的优化卵母细胞培养液的方法，其特征在于，所述营养液为包含米力农的培养液。

3.根据权利要求1或2所述的优化卵母细胞培养液的方法，其特征在于，在营养液中抑制过程为6h。

4.根据权利要求1所述的优化卵母细胞培养液的方法，其特征在于，所述肌肽浓度为10um。

技术总结
本发明公开了一种优化卵母细胞培养液的方法，属于辅助生殖技术领域，所述方法包括以下步骤：GV时期的卵母细胞首先在包含米力农的培养液中抑制6小时，在此过程持续添加肌肽处理；然后洗去米力农，使卵母细胞恢复减数分裂并排出第一极体；通过在卵母细胞培养液中添加肌肽，优化卵母细胞培养液的氨基酸成分，促进老龄卵母细胞减数分裂成熟，提高老龄卵母细胞成熟质量。

技术研发人员：曹广义,颜桂军,孙海翔,季煦,金星亮
受保护的技术使用者：南京鼓楼医院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13