一种铜绿假单胞菌噬菌体及其应用的制作方法

本发明属于噬菌体，具体涉及一种铜绿假单胞菌噬菌体vb_paes_hp1及其应用。

背景技术：

1、铜绿假单胞菌(p.aeruginosa,pae)又称绿脓杆菌，是一种常见的革兰氏阴性致病菌。它在自然界中分布广泛，可利用各种碳源和氨化化合物作为氧源，具有高度可塑性和利用多种营养的能力，可快速的在不同的环境中定植和繁殖。pae可定植于人体的肺部、尿道、眼睛等部位，感染后易引起败血症、呼吸道疾病、尿路梗塞等疾病，可对烧伤病人和囊性纤维化患者带来毁灭性伤害，给人民健康安全带来极大威胁。

2、有研究发现高龄患者、糖尿病患者、在icu病房治疗的患者是感染pae的高危人群，目前治疗pae感染的主要手段仍是抗生素，患者易产生耐药性，死亡率高，因此探索一种合理有效的抗生素替代疗法对治疗pae感染具有重要意义。

3、噬菌体具有裂解能力强、繁殖快、成本低、不易产生耐药性等特点，不仅可以裂解菌体还可以增加菌体对多种抗生素的敏感性，有多项研究表明采用噬菌体和抗生素联合治疗比单独使用两种治疗方案效果好的多。目前已经有多个噬菌体疗法成功应用于临床的案例，故噬菌体疗法被认为是一种最具希望用来对抗日益严重的耐药细菌的生物防控手段。

技术实现思路

1、鉴于此，本发明的目的在于提供一种可以高效裂解铜绿假单胞菌的噬菌体及其应用，通过噬菌体治疗多重耐药pae感染，解决抗生素滥用问题，降低pae感染病死率，为患者的治疗提供一种高效、安全的选择。

2、本发明目的是通过以下方式实现：

3、本发明提供一种铜绿假单胞菌噬菌体(pseudomonas aeruginosa phase)

4、vbp_paes_hp1，所述铜绿假单胞菌噬菌体vbp_paes_hp1的保藏编号为cctcc no：m20221150，于2022年7月21日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为：湖北省武汉市武昌区八一路299号。

5、基于上述技术方案，进一步地，所述的铜绿假单胞菌噬菌体vbp_paes_hp1是从医院未处理的污水中分离得到，以铜绿假单胞菌为宿主。

6、基于上述技术方案，进一步地，所述的铜绿假单胞菌噬菌体vbp_paes_hp1属于短尾噬菌体科，具有多面体头部，直径约为75nm，尾巴长度约为53nm；基因组全长40752bp，无毒力基因和溶原基因；效价数量等级为1010，效价较高。

7、基于上述技术方案，进一步地，通过一步生长曲线表征，所述的铜绿假单胞菌噬菌体vbp_paes_hp1的潜伏期为30min，裂解期为50min，噬菌体vbp_paes_hp1的最适生长温度为37℃，-4℃时停止生长，可长期保存于-80℃，噬菌体vbp_paes_hp1适合生长在中性环境中，在ph为6-8的培养基中作用1小后，效价维持在109-1010；在ph为2、12时，仍有活性，酸碱耐受范围较宽；噬菌体vbp_paes_hp1可高效裂解铜绿假单胞菌，最佳感染复数为1；噬菌体vbp_paes_hp1对氯仿不敏感，氯仿处理前后效价数量等级均为1010，因此在制备噬菌体制剂时，可加入氯仿作为附加剂。

8、本发明另一方面提供所述铜绿假单胞菌噬菌体vbp_paes_hp1的用途，所述用途包括在制备铜绿假单胞菌抑制剂或铜绿假单胞菌消毒剂中的用途和在制备治疗铜绿假单胞菌感染的药物或生物制剂中的用途。

9、基于上述技术方案，进一步地，所述铜绿假单胞菌包括多重耐药铜绿假单胞菌。

10、基于上述技术方案，进一步地，所述的治疗铜绿假单胞菌感染的药物或生物制剂与抗生素联合使用。

11、基于上述技术方案，进一步地，所述的抗生素包括β-内酰胺酶类抗生素、氨基糖苷类抗生素和喹诺酮类抗生素。

12、基于上述技术方案，进一步地，所述药物或生物制剂中包括药学上可接受的辅料。

13、基于上述技术方案，进一步地，所述的药学上可接受的辅料包括吸附载体。

14、与现有技术相比，本发明具有以下优点和有益效果：

15、(1)本发明从烧伤感染患者的脓液中分离得到一株多重耐药铜绿假单胞菌pae-01，以此为宿主从医院未经处理的污水中筛选出噬菌体vbp_paes_hp1，该噬菌体可以有效裂解多重耐药铜绿假单胞菌pae-01，为医院治疗铜绿假单胞菌感染提供噬菌体来源。

16、(2)本发明提供的铜绿假单胞菌噬菌体vbp_paes_hp1具有良好的温度耐受性和酸碱耐受性。

17、(3)本发明提供的铜绿假单胞菌噬菌体vbp_paes_hp1具有较强的裂解活性，1小时内就能表现出明显的裂解效果。

18、(4)本发明提供的铜绿假单胞菌噬菌体vbp_paes_hp1在制备用于医院环境消毒和其他环境消毒的噬菌体消毒剂中具有良好的应用前景。

19、(5)本发明提供的铜绿假单胞菌噬菌体vbp_paes_hp1经全基因组检测无毒力基因和溶原基因，保障了噬菌体制剂在使用过程中的安全性，功能蛋白功能注释结果中发现编码穿孔素、溶菌酶的开放阅读框，保证了噬菌体制剂的有效性。

技术特征：

1.一种铜绿假单胞菌噬菌体(pseudomonas aeruginosa phase)vbp_paes_hp1，其特征在于，所述铜绿假单胞菌噬菌体vbp_paes_hp1的保藏编号为cctcc no：m20221150，于2022年7月21日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为：湖北省武汉市武昌区八一路299号。

2.根据权利要求1所述的铜绿假单胞菌噬菌体(pseudomonas aeruginosa phase)vb_paes_hp1，其特征在于，所述的铜绿假单胞菌噬菌体vb_paes_hp1属于短尾噬菌体科，具有多面体头部，无毒力基因和溶原基因，效价数量等级≥109。

3.根据权利要求1所述的铜绿假单胞菌噬菌体(pseudomonas aeruginosa phase)vb_paes_hp1，其特征在于，所述的铜绿假单胞菌噬菌体vb_paes_hp1的潜伏期为20～40min，裂解期为40～60min，适宜生长的温度范围为0～60℃，适宜生长的ph范围为4-9；噬菌体vb_paes_hp1对氯仿不敏感。

4.权利要求1-3任一项所述的铜绿假单胞菌噬菌体(pseudomonas aeruginosa phase)vb_paes_hp1在制备铜绿假单胞菌抑制剂或铜绿假单胞菌消毒剂中的用途。

5.权利要求1-3任一项所述的铜绿假单胞菌噬菌体(pseudomonas aeruginosa phase)vb_paes_hp1在制备治疗铜绿假单胞菌感染的药物或生物制剂中的用途。

6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，所述的治疗铜绿假单胞菌感染的药物或生物制剂与抗生素联合使用。

7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，所述的抗生素包括β-内酰胺酶类抗生素、氨基糖苷类抗生素和喹诺酮类抗生素。

8.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，所述药物或生物制剂中包括药学上可接受的辅料。

9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述的药学上可接受的辅料包括吸附载体。

技术总结
本发明公开了一种铜绿假单胞菌噬菌体及其应用，属于噬菌体技术领域。本发明分离获得一种铜绿假单胞菌噬菌体，命名为vBP_PaeS_HP1，于2022年7月21日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 20221150；本发明的铜绿假单胞菌噬菌体vBP_PaeS_HP1对铜绿假单胞菌Pae‑01裂解作用明显，宿主谱较宽，具有较好的酸碱稳定性和温度稳定性，经全基因组检测发现无毒力基因和溶原基因，保障了噬菌体制剂在使用过程中的安全性，对功能蛋白功能进行注释，发现编码穿孔素、溶菌酶的开放阅读框，保证了噬菌体的有效性。本发明的噬菌体可制成噬菌体消毒剂用于环境消毒，与抗生素联合使用用于治疗烧伤等疾病引起的铜绿假单胞菌感染等。

技术研发人员：耿慧君,王晓波,王兴梅,张治然,刘宇鹏,杨鹏,于喆,高婕,冉令凤,尤建嵩
受保护的技术使用者：艾美诚信生物制药有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/14