一种通过A2B5阳性胶质瘤细胞样抗原致敏的树突状细胞疫苗的制作方法

本发明涉及生物技术及医药领域，具体地，本发明涉及一种通过a2b5阳性脑胶质瘤细胞样抗原致敏的树突状细胞疫苗及其制备方法与应用。

背景技术：

1、树突状细胞(dendritic cells,dc)是人体内功能最强的专职抗原提呈细胞，它能激活cd8+细胞毒性t细胞(ctl)和cd4+辅助性t细胞(th)，在抗肿瘤、抗病毒等免疫应答过程中发挥重要作用。大多数研究表明体内肿瘤抑制了dc的成熟而非直接抑制dc的功能。研究发现，恶性肿瘤组织内树突状细胞的数量、功能与肿瘤组织原发灶、转移灶中瘤细胞向周围组织浸润的程度以及患者的临床分期呈负相关，而大部分实体肿瘤内浸润树突状细胞的数量越多则患者的预后越好(j surg oncol,2007,95(2):123-128)。肿瘤患者体内的树突状细胞存在分化成熟障碍，导致其在表达细胞因子、表面抗原、激活t细胞增殖并诱导ctl生成等方面均存在不同程度的功能缺陷，包括cd8+t细胞增加、cd4+t细胞降低、cd4+/cd8+比例降低以及自然杀伤细胞数量下降等。所以体外诱导功能性dc用于免疫治疗有着重要的临床应用价值。

2、dc广泛分布与人体多个部位，如血液以及肝脾、淋巴结、肺、肾、胃肠道等组织间质，约占外周血单个核细胞总数0.5-1％。dc亚群分类复杂，骨髓源dc(mdc)和淋巴源dc(pdc)是外周血dc的两种主要类型。dc可以经由单核细胞分化生成，分离pbmc中的单核细胞体外培养，gm-csf和il-4诱导生成未成熟dc(curr protoc immunol 2005；chapter 22:unit22f 4)。未成熟dc可以通过不同的成熟诱导成分分化成熟，dc的成熟状态是决定dc疫苗有效性的一个关键因素。未成熟dc致敏t细胞能力有限，并且还可能诱导t细胞耐受。另外成熟dc的迁移能力更强，能更有效的迁移至次级淋巴组织的t细胞区，进而诱发免疫反应。

3、脑胶质瘤是一种最常见的颅内肿瘤，发病率约占全部颅内肿瘤的40％-50％，其中脑胶质母细胞瘤(glioblastoma,gbm)是最常见并且恶性程度最高的胶质瘤，5年存活率仅仅为5.1％，现在gbm最有效的治疗方案是手术、放疗和化疗为主的综合治疗，化疗药物替莫唑胺与放疗联合应用也仅比单纯放疗的中位生存期提高了3个月，并且经过积极治疗后中位生存期仍小于15个月。

4、a2b5阳性脑胶质瘤细胞具备有肿瘤细胞的特性，所以若能有效杀伤a2b5阳性脑胶质瘤细胞，可以有效地治疗脑胶质母细胞瘤，以及防止其复发。

5、因此发明一种可以高效杀伤a2b5阳性脑胶质瘤细胞的治疗方案，在临床上具有重大意义，是脑胶质瘤母细胞癌患者的福音。

技术实现思路

1、本发明的一个目的就是提供一种有效的a2b5阳性肿瘤的预防性和/或治疗性疫苗。

2、本发明的另一目的在于提供一种靶向a2b5阳性肿瘤的树突状细胞、细胞毒性t淋巴细胞、细胞制剂以及它们的制备方法与应用。

3、在本发明的第一方面，提供了一种靶向a2b5阳性肿瘤的树突状细胞的制备方法，包括步骤：

4、(a)制备a2b5阳性肿瘤细胞抗原；和

5、(b)将步骤(a)中获得的a2b5阳性肿瘤细胞抗原与未成熟树突状细胞共孵育，诱导树突状细胞成熟，从而获得所述的靶向a2b5阳性肿瘤的树突状细胞。

6、在另一优选例中，所述a2b5阳性肿瘤是指高表达a2b5抗原的肿瘤或肿瘤细胞，其中所述高表达是指肿瘤或肿瘤细胞中的a2b5表达量z1与正常组织或细胞中的a2b5表达量e0之比(即e1/e0)≥1.5，较佳地≥2.0，更佳地≥3.0。

7、在另一优选例中，所述a2b5阳性肿瘤包括a2b5阳性胶质瘤。

8、在另一优选例中，所述a2b5阳性胶质瘤包括高级别胶质瘤和低级别胶质瘤。

9、在另一优选例中，所述a2b5阳性胶质瘤包括1级胶质瘤、2级胶质瘤、3级胶质瘤和4级胶质瘤。

10、在另一优选例中，所述高级别胶质瘤包括3级胶质瘤和4级胶质瘤。

11、在另一优选例中，所述低级别胶质瘤包括1级胶质瘤和2级胶质瘤。

12、在另一优选例中，所述a2b5阳性胶质瘤为高级别胶质瘤。

13、在另一优选例中，所述a2b5阳性胶质瘤为4级胶质瘤。

14、在另一优选例中，所述4级胶质瘤为胶质母细胞瘤。

15、在另一优选例中，所述a2b5阳性胶质瘤为胶质母细胞瘤。

16、在另一优选例中，所述胶质母细胞瘤分为：胶质母细胞瘤idh野生型、胶质母细胞瘤idh突变型及胶质母细胞瘤nos(非特指)型。

17、在另一优选例中，所述胶质母细胞瘤idh野生型包括巨细胞型胶质母细胞瘤、胶质肉瘤、上皮样胶质母细胞瘤。

18、在另一优选例中，所述未成熟树突状细胞分离自外周血样本中的外周血单个核细胞pbmc。

19、在另一优选例中，所述外周血样本采集自患者本身。

20、在另一优选例中，步骤(b)中所述共孵育使用的培养基为x-vivo15、kbm581或rpmi-1640。

21、在另一优选例中，所述培养基中包含选自下组的成分：il-4、gm-csf、自体血浆、分化成熟促进剂，或其组合。

22、在另一优选例中，所述自体血浆是指所述外周血样本的血浆。

23、在另一优选例中，所述培养基中所述自体血浆的浓度为0.5-10％，较佳地为0.8-8％，更佳地为1-5％，最佳地为2％。

24、在另一优选例中，所述培养基中il-4的浓度为50-200ng/ml，较佳地为60-150ng/ml，更佳地为80-120ng/ml，最佳地为100ng/ml。

25、在另一优选例中，所述培养基中gm-csf的浓度为50-200ng/ml，较佳地为60-150ng/ml，更佳地为80-120ng/ml，最佳地为100ng/ml。

26、在另一优选例中，所述分化成熟促进剂选自下组：ifn-γ、lps，或其组合。

27、在另一优选例中，所述的ifn-γ的浓度为10-100ng/ml，较佳地为30-80ng/ml，更佳地为40-60ng/ml，最佳地为50ng/ml。

28、在另一优选例中，所述的lps的浓度为10-100eu/ml，较佳地为30-80eu/ml，更佳地为40-60eu/ml，最佳地为50eu/ml。

29、在另一优选例中，所述靶向a2b5阳性肿瘤的树突状细胞的表面具有表面分子标志物。

30、在另一优选例中，所述表面分子标志物选自下组：cd80、cd83、hla-dr、cd86，或其组合。

31、在另一优选例中，所述制备方法还包括对获得的所述树突状细胞进行功能和有效性检测的步骤。

32、在本发明的第二方面，提供了一种制备a2b5阳性肿瘤细胞抗原的方法，所述a2b5阳性肿瘤细胞抗原被用于如本发明第一方面所述的制备方法，所述方法包括步骤：

33、(a)消化及裂解a2b5阳性肿瘤组织，从而获得单细胞悬液；

34、(b)收集步骤(a)中获得的单细胞悬液，用磁珠分选从而获得a2b5阳性胶质瘤细胞；和

35、(c)将步骤(b)获得的a2b5阳性胶质瘤细胞用γ射线进行辐照，再用研磨仪破碎细胞，从而获得a2b5阳性肿瘤细胞抗原。

36、在另一优选例中，所述a2b5阳性肿瘤为胶质瘤组织。

37、在另一优选例中，所述胶质瘤组织来源于患者本身。

38、在另一优选例中，所述胶质瘤组织为a2b5阳性肿瘤。

39、在另一优选例中，所述胶质瘤组织包括高级别胶质瘤和低级别胶质瘤。

40、在另一优选例中，所述胶质瘤组织包括1级胶质瘤、2级胶质瘤、3级胶质瘤和4级胶质瘤。

41、在另一优选例中，所述高级别胶质瘤包括3级胶质瘤和4级胶质瘤。

42、在另一优选例中，所述低级别胶质瘤包括1级胶质瘤和2级胶质瘤。

43、在另一优选例中，所述胶质瘤组织为高级别胶质瘤。

44、在另一优选例中，所述胶质瘤组织为4级胶质瘤。

45、在另一优选例中，所述4级胶质瘤为胶质母细胞瘤。

46、在另一优选例中，所述胶质瘤组织为胶质母细胞瘤。

47、在另一优选例中，步骤(a)中所述单细胞悬液由胶原酶、透明质酸酶和dnase共同消化获得。

48、在另一优选例中，所述胶原酶为iv型胶原酶。

49、在另一优选例中，所述胶原酶浓度为1mg/ml，所述透明质酸酶浓度为0.1mg/ml，所述dnase浓度为100u/ml。

50、在另一优选例中，步骤(a)中消化的时间为12-16h，更优的为12-14h。

51、在另一优选例中，步骤(a)中裂解使用的溶液为红细胞裂解液。

52、在另一优选例中，步骤(c)中γ射线的辐照剂量为40～60gy，更优的辐照剂量为50gy。

53、在另一优选例中，步骤(c)中研磨仪破碎的条件是频率60～65hz，时间15-30秒，珠子直径3-6mm，最优为频率60hz，时间15秒，珠子直径4mm。

54、在另一优选例中，步骤(c)中a2b5阳性胶质瘤细胞先用液氮冷冻后，再用研磨仪破碎，重复两次。

55、任选地，所述方法还可包括在步骤(a)与步骤(b)之间进行步骤：

56、(i)使用无血清培养液将单细胞悬液扩大培养。

57、在另一优选例中，所述无血清培养液为dmem/f12培养液。

58、在另一优选例中，所述无血清培养液包含选自下组的成分：bfgf、egf和b27。

59、在另一优选例中，所述bfgf的浓度为10-30ng/ml，较佳地为15-25ng/ml，更加地为20ng/ml。

60、在另一优选例中，所述egf的浓度为10-30ng/ml，较佳地为15-25ng/ml，更加地为20ng/ml。

61、在另一优选例中，所述b27的体系为1×b27。

62、在另一优选例中，所述扩大培养的接种密度为2～4×105个/ml。

63、在另一优选例中，所述a2b5阳性肿瘤细胞抗原可用于制备靶向a2b5阳性肿瘤的树突状细胞。

64、在另一优选例中，所述a2b5阳性肿瘤细胞抗原可用于制备靶向a2b5阳性肿瘤的细胞毒性t淋巴细胞。

65、在本发明的第三方面，提供了一种靶向a2b5阳性肿瘤的树突状细胞，所述树突状细胞由如本发明第一方面所述的制备方法获得。

66、在另一优选例中，所述树突状细胞的表面具有表面分子标志物。

67、在另一优选例中，所述表面分子标志物选自下组：cd80、cd83、hla-dr、cd86，或其组合。

68、在另一优选例中，所述树突状细胞为成熟的树突状细胞。

69、在另一优选例中，所述树突状细胞由未成熟的树突状细胞与a2b5阳性胶质瘤细胞抗原共孵育诱导成熟。

70、在另一优选例中，所述未成熟树突状细胞分离自外周血样本中的外周血单个核细胞pbmc。

71、在另一优选例中，所述外周血样本采集自患者本身。

72、在另一优选例中，所述树突状细胞可作为治疗肿瘤的药物。

73、在另一优选例中，所述肿瘤包括a2b5阳性肿瘤。

74、在另一优选例中，所述a2b5阳性肿瘤包括a2b5阳性胶质瘤。

75、在另一优选例中，所述a2b5阳性胶质瘤包括高级别胶质瘤和低级别胶质瘤。

76、在另一优选例中，所述a2b5阳性胶质瘤包括1级胶质瘤、2级胶质瘤、3级胶质瘤和4级胶质瘤。

77、在另一优选例中，所述高级别胶质瘤包括3级胶质瘤和4级胶质瘤。

78、在另一优选例中，所述低级别胶质瘤包括1级胶质瘤和2级胶质瘤。

79、在另一优选例中，所述a2b5阳性胶质瘤为高级别胶质瘤。

80、在另一优选例中，所述a2b5阳性胶质瘤为4级胶质瘤。

81、在另一优选例中，所述4级胶质瘤为胶质母细胞瘤。

82、在另一优选例中，所述a2b5阳性胶质瘤为胶质母细胞瘤。

83、在另一优选例中，所述胶质母细胞瘤分为：胶质母细胞瘤idh野生型、胶质母细胞瘤idh突变型及胶质母细胞瘤nos(非特指)型。

84、在另一优选例中，所述胶质母细胞瘤idh野生型包括巨细胞型胶质母细胞瘤、胶质肉瘤、上皮样胶质母细胞瘤。

85、在另一优选例中，所述树突状细胞可作为治疗胶质母细胞瘤的药物。

86、在另一优选例中，所述树突状细胞可用于制备靶向a2b5阳性肿瘤的细胞毒性t淋巴细胞。

87、在另一优选例中，所述共孵育使用的培养基为x-vivo15、kbm581或rpmi-1640。

88、在另一优选例中，所述培养基中包含选自下组的成分：il-4、gm-csf、自体血浆、分化成熟促进剂，或其组合。

89、在另一优选例中，所述自体血浆是指所述外周血样本的血浆。

90、在另一优选例中，所述培养基中所述自体血浆的浓度为0.5-10％，较佳地为0.8-8％，更佳地为1-5％，最佳地为2％。

91、在另一优选例中，所述培养基中il-4的浓度为50-200ng/ml，较佳地为60-150ng/ml，更佳地为80-120ng/ml，最佳地为100ng/ml。

92、在另一优选例中，所述培养基中gm-csf的浓度为50-200ng/ml，较佳地为60-150ng/ml，更佳地为80-120ng/ml，最佳地为100ng/ml。

93、在另一优选例中，所述分化成熟促进剂选自下组：ifn-γ、lps，或其组合。

94、在另一优选例中，所述的ifn-γ的浓度为10-100ng/ml，较佳地为30-80ng/ml，更佳地为40-60ng/ml，最佳地为50ng/ml。

95、在另一优选例中，所述的lps的浓度为10-100eu/ml，较佳地为30-80eu/ml，更佳地为40-60eu/ml，最佳地为50eu/ml。

96、在本发明的第四方面，提供了一种靶向a2b5阳性肿瘤的细胞毒性t淋巴细胞，所述细胞毒性t淋巴细胞由如本发明第三方面所述的树突状细胞进行致敏反应而获得。

97、在另一优选例中，所述a2b5阳性肿瘤包括a2b5阳性胶质瘤。

98、在另一优选例中，所述a2b5阳性胶质瘤包括高级别胶质瘤和低级别胶质瘤。

99、在另一优选例中，所述a2b5阳性胶质瘤包括1级胶质瘤、2级胶质瘤、3级胶质瘤和4级胶质瘤。

100、在另一优选例中，所述高级别胶质瘤包括3级胶质瘤和4级胶质瘤。

101、在另一优选例中，所述低级别胶质瘤包括1级胶质瘤和2级胶质瘤。

102、在另一优选例中，所述a2b5阳性胶质瘤为高级别胶质瘤。

103、在另一优选例中，所述a2b5阳性胶质瘤为4级胶质瘤。

104、在另一优选例中，所述4级胶质瘤为胶质母细胞瘤。

105、在另一优选例中，所述a2b5阳性胶质瘤为胶质母细胞瘤。

106、在另一优选例中，所述胶质母细胞瘤分为：胶质母细胞瘤idh野生型、胶质母细胞瘤idh突变型及胶质母细胞瘤nos(非特指)型。

107、在另一优选例中，所述胶质母细胞瘤idh野生型包括巨细胞型胶质母细胞瘤、胶质肉瘤、上皮样胶质母细胞瘤。

108、在另一优选例中，所述细胞毒性t淋巴细胞对胶质瘤具有优越的杀伤效果。

109、在另一优选例中，所述细胞毒性t淋巴细胞对胶质母细胞瘤具有优越的杀伤效果。

110、在另一优选例中，所述细胞毒性t淋巴细胞对胶质瘤细胞具有优越的杀伤效果。

111、在另一优选例中，所述细胞毒性t淋巴细胞分离自外周血样本中的外周血单个核细胞pbmc。

112、在另一优选例中，所述外周血样本与如本发明第一方面、本发明第三方面中外周血样本为同一样本。

113、在另一优选例中，所述细胞毒性t淋巴细胞为致敏cd3+t淋巴细胞。

114、在另一优选例中，所述细胞毒性t淋巴细胞由如本发明第三方面所述的树突状细胞诱导成熟而获得。

115、在另一优选例中，所述致敏反应是指将如本发明第三方面所述的树突状细胞以1:(1～10)的比例与cd3+t淋巴细胞共培养，较佳的比例为1:(5-10)，更佳的比例为1:10。

116、在另一优选例中，所述细胞毒性t淋巴细胞对胶质瘤细胞系的杀伤率为≥40％，较佳地为≥60％，更佳地为≥90％。

117、在本发明的第五方面，提供了一种制备如本发明第四方面所述的细胞毒性t淋巴细胞的方法，所述方法包括步骤：

118、(a)采用磁珠负选法从pbmc中分离cd3+t淋巴细胞；和

119、(b)以1:(1～10)的比例将如本发明第三方面所述的树突状细胞与步骤(a)获得的cd3+t淋巴细胞共培养，从而致敏cd3+t淋巴细胞，获得如本发明第四方面所述的细胞毒性t淋巴细胞；

120、任选地，所述方法还可包括步骤：

121、(c)进行多轮致敏，即多次重复步骤(b)以获得敏感性更高的如本发明第四方面所述的细胞毒性t淋巴细胞；

122、(d)扩大培养步骤(b)中获得的如本发明第四方面所述的细胞毒性t淋巴细胞；和/或

123、(e)对所获的如本发明第四方面所述的细胞毒性t淋巴细胞进行功能和有效性检测。

124、在另一优选例中，所述致敏使用的培养基为kbm581。

125、在另一优选例中，所述培养基中包含选自下组的成分：il-7、il-15、自体血浆，或其组合。

126、在另一优选例中，所述自体血浆是指所述外周血样本的血浆。

127、在另一优选例中，所述培养基中所述自体血浆的浓度为5％-20％，较佳地为6％-15％，更佳地为8％-12％，最佳地为10％。

128、在另一优选例中，所述培养基中il-7的浓度为5-20ng/ml，较佳地为6-15ng/ml，更佳地为8-12ng/ml，最佳地为10ng/ml。

129、在另一优选例中，所述培养基中il-15的浓度为5-20ng/ml，较佳地为6-15ng/ml，更佳地为8-12ng/ml，最佳地为10ng/ml。

130、在另一优选例中，步骤(d)中所述扩大培养使用的培养液为kbm581。

131、在另一优选例中，步骤(d)中所述扩大培养使用的培养液包含il-2成分。

132、在另一优选例中，所述il-2的浓度为200-800u/ml，较佳地为300-700u/ml，更佳地为400-600u/ml，最佳地为500u/ml。

133、在另一优选例中，步骤(e)中所述功能和有效性检测包括流式分析。

134、在另一优选例中，所述流式分析通过流式细胞术进行。

135、在本发明的第六方面，提供了一种a2b5阳性肿瘤预防性和/或治疗性疫苗，所述疫苗含有下组的成分：

136、(i)如本发明第三方面所述的树突状细胞，或如本发明第四方面所述的细胞毒性t淋巴细胞，或其组合；和

137、(ii)药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。

138、在另一优选例中，所述a2b5阳性肿瘤包括a2b5阳性胶质瘤。

139、在另一优选例中，所述a2b5阳性胶质瘤包括高级别胶质瘤和低级别胶质瘤。

140、在另一优选例中，所述a2b5阳性胶质瘤包括1级胶质瘤、2级胶质瘤、3级胶质瘤和4级胶质瘤。

141、在另一优选例中，所述高级别胶质瘤包括3级胶质瘤和4级胶质瘤。

142、在另一优选例中，所述低级别胶质瘤包括1级胶质瘤和2级胶质瘤。

143、在另一优选例中，所述a2b5阳性胶质瘤为高级别胶质瘤。

144、在另一优选例中，所述a2b5阳性胶质瘤为4级胶质瘤。

145、在另一优选例中，所述4级胶质瘤为胶质母细胞瘤。

146、在另一优选例中，所述a2b5阳性胶质瘤为胶质母细胞瘤。

147、在另一优选例中，所述胶质母细胞瘤分为：胶质母细胞瘤idh野生型、胶质母细胞瘤idh突变型及胶质母细胞瘤nos(非特指)型。

148、在另一优选例中，所述胶质母细胞瘤idh野生型包括巨细胞型胶质母细胞瘤、胶质肉瘤、上皮样胶质母细胞瘤。

149、在另一优选例中，所述疫苗的剂型选自下组：注射剂、冻干剂。

150、在另一优选例中，所述疫苗包括0.01～99.99％的如本发明第三方面所述的树突状细胞，或如本发明第四方面所述的细胞毒性t淋巴细胞，或其组合和0.01～99.99％的药用载体，所述百分比为占所述药物组合物的质量百分比。

151、在本发明的第七方面，提供了一种制备预防性和/或治疗性疫苗的方法，所述方法包括步骤：将安全有效量的如本发明第三方面所述的树突状细胞，或如本发明第四方面所述的细胞毒性t淋巴细胞与药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂进行混合，从而形成预防性和/或治疗性疫苗。

152、在另一优选例中，所述疫苗的剂型选自下组：注射剂、冻干剂。

153、在另一优选例中，所述疫苗包括0.01～99.99％的如本发明第三方面所述的树突状细胞，或如本发明第四方面所述的细胞毒性t淋巴细胞，或其组合和0.01～99.99％的药用载体，所述百分比为占所述药物组合物的质量百分比。

154、在本发明的第八方面，提供了一种细胞制剂，所述细胞制剂含有如本发明第三方面所述的树突状细胞，或如本发明第四方面所述的细胞毒性t淋巴细胞，以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。

155、在另一优选例中，所述的细胞制剂的浓度为1×103-1×108个细胞/ml，较佳地1×104-1×107个细胞/ml。

156、在另一优选例中，所述细胞制剂为液态制剂。

157、在另一优选例中，所述细胞制剂的剂型为注射剂。

158、在另一优选例中，所述细胞制剂还含有佐剂。

159、在另一优选例中，所述的佐剂包括细胞因子。

160、在另一优选例中，所述细胞因子选自下组：tnf-a、il-1β、il-6、pge2、ifn-γ、或其组合。

161、在本发明的第九方面，提供了一种活性成分的用途，所述活性成分选自下组：如本发明第三方面所述的树突状细胞，或如本发明第四方面所述的细胞毒性t淋巴细胞，或如本发明第八方面所述的细胞制剂，或其组合，所述活性成分用于制备特异性杀伤肿瘤的药物或制剂。

162、在另一优选例中，所述肿瘤包括a2b5阳性肿瘤。

163、在另一优选例中，所述a2b5阳性肿瘤包括a2b5阳性胶质瘤。

164、在另一优选例中，所述a2b5阳性胶质瘤包括高级别胶质瘤和低级别胶质瘤。

165、在另一优选例中，所述a2b5阳性胶质瘤包括1级胶质瘤、2级胶质瘤、3级胶质瘤和4级胶质瘤。

166、在另一优选例中，所述高级别胶质瘤包括3级胶质瘤和4级胶质瘤。

167、在另一优选例中，所述低级别胶质瘤包括1级胶质瘤和2级胶质瘤。

168、在另一优选例中，所述a2b5阳性胶质瘤为高级别胶质瘤。

169、在另一优选例中，所述a2b5阳性胶质瘤为4级胶质瘤。

170、在另一优选例中，所述4级胶质瘤为胶质母细胞瘤。

171、在另一优选例中，所述a2b5阳性胶质瘤为胶质母细胞瘤。

172、在另一优选例中，所述胶质母细胞瘤分为：胶质母细胞瘤idh野生型、胶质母细胞瘤idh突变型及胶质母细胞瘤nos(非特指)型。

173、在另一优选例中，所述胶质母细胞瘤idh野生型包括巨细胞型胶质母细胞瘤、胶质肉瘤、上皮样胶质母细胞瘤。

174、在本发明的第十方面，提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括下组的成分：

175、(1)如本发明第三方面所述的树突状细胞，或如本发明第四方面所述的细胞毒性t淋巴细胞，或如本发明第八方面所述的细胞制剂，或其组合；和

176、(2)选自下组的联用部分：胶质瘤治疗药物、细胞毒性药物、毒素、可检测标记物、前药激活酶，或其组合。

177、在另一优选例中，所述胶质瘤治疗药物为靶向治疗a2b5阳性胶质瘤的药物。

178、在另一优选例中，所述a2b5阳性胶质瘤包括高级别胶质瘤和低级别胶质瘤。

179、在另一优选例中，所述a2b5阳性胶质瘤包括1级胶质瘤、2级胶质瘤、3级胶质瘤和4级胶质瘤。

180、在另一优选例中，所述高级别胶质瘤包括3级胶质瘤和4级胶质瘤。

181、在另一优选例中，所述低级别胶质瘤包括1级胶质瘤和2级胶质瘤。

182、在另一优选例中，所述a2b5阳性胶质瘤为高级别胶质瘤。

183、在另一优选例中，所述a2b5阳性胶质瘤为4级胶质瘤。

184、在另一优选例中，所述4级胶质瘤为胶质母细胞瘤。

185、在另一优选例中，所述a2b5阳性胶质瘤为胶质母细胞瘤。

186、在另一优选例中，所述胶质瘤治疗药物包括但不限于：替莫唑胺、尼可莫司丁、阿伐斯丁、甘露醇、甘油果糖、地塞米松、甲基强的松龙、丙戊酸钠、卡马西平、左乙拉西坦、pcv方案(洛莫司汀+甲基苄肼+长春新碱)、贝伐单抗、伊马替尼和吉非替尼等。

187、在另一优选例中，所述的细胞毒性药物选自下组：抗微管蛋白药物、dna小沟结合试剂、dna复制抑制剂、烷化试剂、抗生素、叶酸拮抗物、抗代谢药物、化疗增敏剂、拓扑异构酶抑制剂、长春花生物碱，或其组合。

188、特别有用的细胞毒性药物类的例子包括，例如，dna小沟结合试剂、dna烷基化试剂、和微管蛋白抑制剂、典型的细胞毒性药物包括、例如奥瑞他汀(auristatins)、喜树碱(camptothecins)、多卡霉素/倍癌霉素(duocarmycins)、依托泊甙(etoposides)、美登木素(maytansines)和美登素类化合物(maytansinoids)(例如dm1和dm4)、紫杉烷(taxanes)、苯二氮卓类(benzodiazepines)或者含有苯二氮卓的药物(benzodiazepine containingdrugs)(例如吡咯并[1,4]苯二氮卓类(pbds)，吲哚啉苯并二氮卓类(indolinobenzodiazepines)和噁唑烷并苯并二氮卓类(oxazolidinobenzodiazepines))、长春花生物碱(vinca alkaloids)，或其组合。

189、在另一优选例中，所述可检测标记物包括放射性标记物。

190、在另一优选例中，所述放射性标记物包括放射性核素，其中所述放射性核素包括：

191、(i)诊断用同位素，所述的诊断用同位素选自下组：tc-99m、ga-68、f-18、i-123、i-125、i-131、in-111、ga-67、cu-64、zr-89、c-11、lu-177、re-188，或其组合；和/或

192、(ii)治疗用同位素，所述的治疗用同位素选自下组：lu-177、y-90、ac-225、as-211、bi-212、bi-213、cs-137、cr-51、co-60、dy-165、er-169、fm-255、au-198、ho-166、i-125、i-131、ir-192、fe-59、pb-212、mo-99、pd-103、p-32、k-42、re-186、re-188、sm-153、ra223、ru-106、na24、sr89、tb-149、th-227、xe-133、yb-169、yb-177，或其组合。

193、在另一优选例中，所述的毒素选自下组：耳他汀类(例如，耳他汀e、耳他汀f、mmae和mmaf)、金霉素、类美坦西醇、篦麻毒素、篦麻毒素a-链、考布他汀、多卡米星、多拉司他汀、阿霉素、柔红霉素、紫杉醇、顺铂、cc1065、溴化乙锭、丝裂霉素、依托泊甙、替诺泊甙(tenoposide)、长春新碱、长春碱、秋水仙素、二羟基炭疽菌素二酮、放线菌素、白喉毒素、假单胞菌外毒素(pe)a、pe40、相思豆毒素、相思豆毒素a链、蒴莲根毒素a链、α-八叠球菌、白树毒素、迈托毒素(mitogellin)、局限曲菌素(retstrictocin)、酚霉素、依诺霉素、麻疯树毒蛋白(curicin)、巴豆毒素、卡奇霉素、肥皂草(sapaonaria officinalis)抑制剂、糖皮质激素，或其组合。

194、在另一优选例中，所述的可检测标记物选自下组：荧光或发光标记物、放射性标记物、mri(磁共振成像)或ct(电子计算机x射线断层扫描技术)造影剂，或能够产生可检测产物的酶等。

195、在另一优选例中，所述的前药激活酶包括例如dt-心肌黄酶(dtd)或联苯基水解酶-样蛋白质(bphl)或任何形式的纳米酶颗粒。

196、在本发明的第十一方面，提供了一种制备免疫个体的方法，包括步骤：将需要免疫的对象施用有安全有效量本发明第三方面所述的树突状细胞，或如本发明第四方面所述的细胞毒性t淋巴细胞，或如本发明第六方面所述的疫苗，或如本发明第八方面所述的细胞制剂。

197、在另一优选例中，所述的对象是哺乳动物(包括人)。

198、在本发明的第十二方面，提供了一种选择性杀伤肿瘤细胞的方法，包括步骤：给需要的对象施用安全有效量的本发明第三方面所述的树突状细胞，或如本发明第四方面所述的细胞毒性t淋巴细胞，或如本发明第六方面所述的疫苗，或如本发明第八方面所述的细胞制剂，或如本发明第十方面所述的药物组合物。

199、在另一优选例中，所述对象包括人或非人哺乳动物。

200、在另一优选例中，所述非人哺乳动物包括啮齿动物(如小鼠、大鼠、兔)、灵长类动物(如猴)。

201、在另一优选例中，所述方法为非治疗性和非诊断性的。

202、在本发明第十二方面，提供了一种治疗肿瘤的方法，包括：给需要治疗的对象施用安全有效量的本发明第三方面所述的树突状细胞，或如本发明第四方面所述的细胞毒性t淋巴细胞，或如本发明第六方面所述的疫苗，或如本发明第八方面所述的细胞制剂，或如本发明第十方面所述的药物组合物。

203、在另一优选例中，所述肿瘤包括a2b5阳性肿瘤。

204、在另一优选例中，所述a2b5阳性肿瘤包括a2b5阳性胶质瘤。

205、在另一优选例中，所述a2b5阳性胶质瘤包括高级别胶质瘤和低级别胶质瘤。

206、在另一优选例中，所述a2b5阳性胶质瘤包括1级胶质瘤、2级胶质瘤、3级胶质瘤和4级胶质瘤。

207、在另一优选例中，所述高级别胶质瘤包括3级胶质瘤和4级胶质瘤。

208、在另一优选例中，所述低级别胶质瘤包括1级胶质瘤和2级胶质瘤。

209、在另一优选例中，所述a2b5阳性胶质瘤为高级别胶质瘤。

210、在另一优选例中，所述a2b5阳性胶质瘤为4级胶质瘤。

211、在另一优选例中，所述4级胶质瘤为胶质母细胞瘤。

212、在另一优选例中，所述a2b5阳性胶质瘤为胶质母细胞瘤。

213、在另一优选例中，所述胶质母细胞瘤分为：胶质母细胞瘤idh野生型、胶质母细胞瘤idh突变型及胶质母细胞瘤nos(非特指)型。

214、在另一优选例中，所述胶质母细胞瘤idh野生型包括巨细胞型胶质母细胞瘤、胶质肉瘤、上皮样胶质母细胞瘤。

215、在另一优选例中，所述方法还包括与手术、放疗、化疗等治疗方法联用。

216、应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。