一种恩格列净的杂质化合物、其制备方法及应用与流程

本发明属于药物化学及药物分析领域，具体涉及一种恩格列净的杂质化合物、其制备方法及应用。

背景技术：

1、恩格列净(empagliflozin)，化学名称为(1s)-1,5-脱水-1-(4-氯-3-{4-[(3s)-四氢呋喃-3-氧基]苄基}苯基]-d-葡萄糖醇，cas号：864070-44-0，结构式如式ⅰ所示；

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3、恩格列净，商品名为是由勃林格殷格翰及礼来公司联合研发的一款sglt-2抑制剂，用于2型糖尿病患者，除了核心的降糖功能，同时还可使心血管获益，降低患有心脏疾病的2型糖尿病患者因心血管死亡的风险。该药物于2014年5月22日获得欧洲ema批准上市，2014年8月获美国fda批准，2014年12月获日本pmda批准上市，2017年获批在中国上市，用于2型糖尿病患者治疗；勃林格殷格翰研发的复方药物二甲双胍恩格列净片，于2015年获得美国食品药品监督管理局批准,2019年在中国获批，用于治疗2型糖尿病患者；

4、恩格列净是属于钠-葡萄糖协同转运蛋白2抑制剂，是一种近年来，刚在国内上市的新型降糖药物，与传统的磺脲类，及双胍类降糖药物作用机制不同。该药物通过减少肾小管，对葡萄糖的重吸收，使血液中的葡萄糖从肾脏随尿液排出，进而降低血液中的葡萄糖浓度。对餐前及餐后血糖，均有一定的降低作用，主要用于经饮食，运动基础上血糖控制不佳的，2型糖尿病患者的降糖治疗，可以单独使用，或与其他降糖药物联合使用。

5、化合物专利(wo2011039107)报道了恩格列净制备过程，其合成路线如下所示：

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7、本领域中已知，恩格列净或任何活性药物成分(api)中的杂质可能来至api本身的降解(这与api本身在存储过程中的稳定性有关)和制造过程，包括化学合成。工艺杂质包括未反应的起始物料、起始物料所含有的杂质及其衍生物、合成副产物及降解产物。

8、除稳定性外，商业化的api纯度也明显是商业化的必须条件。在商业化的制造过程中引入的杂质必须限定在极小的量，并且最好基本上不存在。例如，供api制造商使用的ichq7a指南要求通过规定原料药的质量、控制工艺参数，如温度、压力、时间和化学计量比和制造过程中加入的提纯步骤，如结晶、蒸馏和萃取来使工艺杂质保持在设定限额以下。

9、通过化学反应直接生成单一化合物，以满足药物使用是不现实的。反应过程副产物及残留起始物料均会混合在产物中。在api恩格列净的制备过程中，必须通过hplc、tlc或者gc等分析手段进行检测，以确保最终满足最终产物是否能过用于药品中。因为不存在绝对纯净的物质，为确保安全，需设定标准以确保api尽可能的减少杂质残留。

10、通常采用色谱法和/或物理法鉴定杂质，得到一个峰位置或tlc板中的斑点，在对其进行鉴定，例如色谱图中相对位置，即其保留时间。根据仪器使用条件及其他因素影响，保留时间每天甚至每次都可能发生变化，为减少变化影响到杂质的准确识别，通常用“相对保留时间(rrt)”来鉴定杂质，杂质的rrt即它的保留时间除以主峰的保留时间。

11、本领域已知，参照标准品可以用于未知混合物中参照标准化合物的定性与定量，可以采用参照标准的已知浓度的溶液作为外标，对未知混合物采用相同的技术分析，通过比较检测器的响应强度，来测定混合物中所述化合物的量。

12、本领域技术人员已知，通过了解化合物结果及合成途径，可以通过鉴定终产品的杂质和确定终产品的杂质的量，进而更好的进行工艺杂质的控制。

13、目前，已有多篇文献资料报道了恩格列净的制备及纯化方法。恩格列净的制备专利wo2011039107报道了采用在甲苯和乙醇混合溶剂中重结晶方法提纯，专利cn102574829a报道了采用在27％(重量)的乙腈水溶液中重结晶方法提纯，专利cn101155794a采用乙醇水混合溶剂重结晶方法提纯等，均为对相关杂质进行控制和研究。

14、因此，现有的恩格列净制备工艺中，没有对杂质控制进行详细描述，也未见针对单个杂质的鉴定和控制，更为对其降解杂质进行分析控制。针对此不足之处，本发明对恩格列净及其制剂进行研究，制备了三种以前未被鉴定过的恩格列净杂质即式ⅱ、式ⅲ、式ⅳ化合物，此三个化合物均可能在恩格列净的制备及存储过程中产生，就申请人所知，此三个化合物从未被独立制备以及与恩格列净分离。因此三个化合物特别是式ⅳ对产品质量有较大影响，因而本技术制备并发明了将此三个杂质作为参照标准用于恩格列净纯度的分析定量方法。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种恩格列净的杂质化合物——式ⅱ、式ⅲ、式ⅳ化合物；本发明的另一目的在于提供一种该杂质化合物的制备方法；本发明的第三个目的在于提供一种将该杂质化合物用于控制恩格列净质量的用途，即该杂质化合物的检测方法。

2、本发明提供了式ⅳ所示的化合物，其结构式如下：

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4、本发明提供了一种式ⅳ所示化合物的制备方法，包括如下步骤：

5、(1)在至少一种溶剂中，用至少一种氧化剂氧化式ⅰ所示化合物(恩格列净)，经后处理得到式ⅱ所示化合物；

6、(2)在至少一种有机溶剂中，用至少一种还原剂还原式ⅱ化合物，反应结束后，滴加盐酸淬灭反应，经后处理得到式ⅲ化合物；

7、(3)在至少一种有机溶剂中，用至少一种氧化剂氧化式ⅲ化合物，经后处理得到式ⅳ化合物；

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9、其中，所述步骤(1)、(2)和(3)中所选有机溶剂选自甲醇、乙醇、乙腈、四氢呋喃、乙二醇、异丙醇和乙酸乙酯中的一种，优选乙醇和甲醇中的一种。

10、其中，所述步骤(1)和(3)中氧化剂选至2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌，二氧化硒，过氧化叔丁醇和30wt％～90wt％过氧化氢溶液，优选2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌和35wt％过氧化氢溶液。

11、其中，所述步骤(2)中还原剂选至硼氢化钠、硼氢化钾、氢化铝锂，优选为硼氢化钠。

12、其中，所述步骤(1)中氧化剂与式ⅰ化合物的摩尔比为1～200:1，优选为1～10:1，更优选为5:1；所述步骤(2)中还原剂与式ⅱ化合物的摩尔比为1～200:1，优选为1～10:1，更优选为2:1，所述步骤(3)中氧化剂与式ⅲ化合物的摩尔比为1～200:1，优选为1～200:1为10～50:1，更优选为30:1。

13、优选地，所述步骤(1)中的反应温度为40～50℃；所述步骤(3)中的反应温度为35～45℃。

14、步骤(1)的后处理过程为：将反应液减压浓缩去除溶剂，残余物加入水与乙酸乙酯搅拌分层，水相再用乙酸乙酯萃取，合并有机相，水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗品，粗品采用液相色谱进行纯化，采用c18制备色谱柱(21.2×250mm，10μm)，紫外检测器检测波长为224nm，以水和乙腈为流动相进行梯度洗脱，水和乙腈初始体积比为75％:25％，10分钟内乙腈比例升至32％；取粗品，加甲醇溶解，滤过，取适量注入制备液相色谱仪，按上述色谱条件进行洗脱并收集目标峰馏分，合并所有馏分后，蒸除溶剂，干燥即得。

15、步骤(2)和步骤(3)相同，后处理具体过程为：将淬灭后的反应液采用液相色谱进行纯化，采用c18制备色谱柱(21.2×250mm，10μm)，紫外检测器检测波长为224nm，以水和乙腈为流动相进行梯度洗脱，水和乙腈初始体积比为75％:25％，10分钟内乙腈比例升至32％；取反应液，加甲醇溶解，滤过，取适量注入制备液相色谱仪，按上述色谱条件进行洗脱并收集目标峰馏分，合并所有馏分后，蒸除溶剂，冷冻干燥，即得。

16、上述式ⅳ杂质化合物在恩格列净及其制剂有关物质检测时作为杂质对照品的应用。

17、将式ⅳ化合物用体积比为1:1的乙腈-水溶剂溶解，配制供试品溶液，采用高效液相色谱法测定恩格列净中该杂质的含量；所述高效液相色谱法为反相色谱法；色谱柱选自：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱和八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，优选为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；柱温为25～40℃，优选为35℃；检测器为紫外检测器；流动相a为0.1％磷酸溶液，流动相b为乙腈-水(90:10)，用流动相a和流动相b进行梯度洗脱：流动相a与流动相b初始比例为80％:20％，25分钟时流动相a与流动相b比例变为10％:90％，30分钟时流动相a与流动相b比例为10％:90％，30.01分钟时流动相a与流动相b比例为80％:20％，36分钟时流动相a与流动相b比例为80％:20％；流速为0.8～1.5ml/min，优选为1.0ml/min；检测波长为224nm或254nm，优选为224nm；进样量为1～20μl，优选为5μl。

18、本发明中提供式ⅳ化合物，为恩格列净的降解杂质，可作为相关物质对照品，用于检测恩格列净片剂中降解产物的含量，因此，本发明有效解决了现有技术中的对于杂质的控制不足之处，为进一步控制恩格列净片剂产品质量提供保障。