三聚体多肽及其在治疗癌症中的用途的制作方法

本发明涉及癌症治疗领域，且更特别地，涉及由胶原蛋白同三聚化(homotrimerization)结构域形成的三聚体多肽复合物的治疗剂。发明背景使用单克隆抗体(mab)调节免疫应答是癌症免疫疗法最有前景的方法之一。最著名的可能是mab介导的程序性细胞死亡蛋白1(pd-1)抑制性通路的阻断，其阻止t细胞中pd-1介导的免疫抑制信号传导，并可以恢复无反应性肿瘤浸润t细胞的效应功能。pd-1/pd-配体1(pd-l1)轴阻断已在多种癌症中显示出长期持久的反应，但其功效仅限于10-30％的患者。另一种免疫治疗方法涉及用激动性mab刺激共刺激受体，诸如4-1bb。4-1bb，也称为cd137，是tnf受体(tnfr)超家族的成员，其可以在多种白细胞亚群上被诱导。4-1bb是i型单次跨膜受体，具有四个细胞外富含半胱氨酸结构域(crd)和细胞内信号传导结构域。在t细胞上，4-1bb在通过t细胞受体(tcr)激活后表达。其天然配体[4-1bb-配体(4-1bbl)，tnfsf9]或激动性mab的结合增强t细胞增殖和效应功能、阻止t细胞耗竭、防止程序性细胞死亡并促进记忆细胞分化，这可能支持肿瘤特异性t细胞的持久性。已在临床前癌症模型中对抗4-1bb激动性aab进行探索，并显示可促进一系列免疫原性较差的肿瘤的排斥。然而，肿瘤外毒性一直是全长抗人4-1bb临床开发的主要障碍。抗hu4-1bb人igg4乌瑞芦单抗(urelumab，bms-663513)引起剂量依赖性肝脏毒性并导致两例死亡。后续研究表明，较低剂量降低肝脏毒性，但以功效为代价(segal nh.et al,2017)。相对于乌瑞芦单抗，抗hu4-1bb人igg2乌托鲁单抗(utomilumab，pf-05082566)的安全性有所改进，但也是效力较低的4-1bb激动剂(chester c.et al.,2018)。人们正在积极寻求新策略，以避免与fc-fcγr相互作用相关的肿瘤外毒性，同时保留与4-1bb共刺激相关的抗肿瘤活性。这些方法旨在将4-1bb共刺激限制在肿瘤微环境和引流淋巴结中。最近描述了靶向肿瘤相关抗原(taa)的无fc肿瘤特异性三聚体，诸如egfr(表皮生长因子受体)(compte m.et al.,2018)或cea(癌胚抗原)(mikkelsen k.et al.,2019)，以及以激动方式的鼠4-1bb。两种三聚体在体外均是强效共刺激剂，并且靶向egfr的4-1bb激动性三聚体在免疫活性小鼠中显示出增强的肿瘤渗透性和强抗肿瘤活性，同时减轻与基于igg的4-1bb激动剂相关的全身细胞因子的产生和t细胞介导的肝脏毒性(comptem.et al.,2018)。最近，公开了在肝脏特异性人egfr转基因免疫活性小鼠中，全身给药抗4-1bb激动性igg导致非特异性免疫刺激和肝脏毒性，而在用无fc的egfr特异性4-1bb激动性三聚体处理的小鼠中，未观察到此类免疫相关的不良反应(compte m.et al.,2020)。因此，本领域需要实现有效的免疫刺激而不产生重度副作用的新策略用于肿瘤靶向治疗。

背景技术：

技术实现思路

1、在第一方面，本发明涉及三聚体多肽复合物，其包括三个单体多肽，其中各个单体多肽包括：

2、a)抗4-1bb特异性激动性单链抗体片段(scfv)，其中vh结构域是相对于vl结构域的n-末端，

3、b)同三聚化结构域，选自由胶原蛋白xviii同三聚化结构域(tiexviii)、胶原蛋白xv同三聚化结构域(tiexv)及其功能等效变体组成的组，和

4、c)能够特异性地结合肿瘤相关抗原的多肽区。

5、在第二方面，本发明涉及三聚体多肽复合物，其包括三个单体多肽，其中各个单体多肽包括：

6、a)抗4-1bb特异性激动性单链抗体片段(scfv)，其中cdr包括seq id no:1或seqid no:42、seq id no:2或seq id no:43、seq id no:3或seq id no:44、seq id no:4或seqid no:45、seq id no:5或seqid no:46和seq id no:6所示的序列或其功能等效变体，

7、b)同三聚化结构域，选自由胶原蛋白xviii同三聚化结构域(tiexviii)、胶原蛋白xv同三聚化结构域(tiexv)及其功能等效变体组成的组，和

8、c)能够特异性地结合肿瘤相关抗原的多肽区。

9、在第三方面，本发明涉及多核苷酸，其编码形成根据本发明的三聚体多肽的一部分的至少一种单体多肽。

10、在第四方面，本发明涉及载体，其包括根据本发明的多核苷酸。

11、在第五方面，本发明涉及宿主细胞，其包括根据本发明的载体。

12、在第六方面，本发明涉及组合，其包括根据本发明的三聚体多肽、根据本发明的多核苷酸、根据本发明的载体或根据本发明的宿主细胞以及免疫检查点阻断剂。

13、在第七方面，本发明涉及药物组合物，其包括根据本发明的三聚体多肽、根据本发明的多核苷酸、根据本发明的载体、根据本发明的宿主细胞或根据本发明的组合以及药学上可接受的赋形剂。

14、在第八方面，本发明涉及根据本发明的三聚体多肽、根据本发明的多核苷酸、根据本发明的载体、根据本发明的宿主细胞、根据本发明的组合或根据本发明的药物组合物，用于治疗癌症的用途。

技术特征：

1.一种三聚体多肽复合物，包括三个单体多肽，其中各个单体多肽包括：

2.一种三聚体多肽复合物，包括三个单体多肽，其中各个单体多肽包括：

3.根据权利要求1或2所述的三聚体多肽复合物，其中，所述抗4-1bb特异性激动性scfv是人源化的或展示人源化vl结构域和/或部分人源化vh结构域。

4.根据权利要求3所述的三聚体多肽复合物，其中，所述抗4-1bb激动性scfv包括seqid no:19所示的序列。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的三聚体多肽，其中，能够特异性结合肿瘤相关抗原的区域位于相对于所述同三聚化结构域的c-末端。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的三聚体多肽复合物，其中，所述肿瘤相关抗原是egfr。

7.根据权利要求6所述的三聚体多肽复合体，其中，能够特异性地结合egfr的多肽区是抗体。

8.根据权利要求7所述的三聚体多肽复合物，其中，抗egfr抗体是人源化抗egfr(huegfr)单结构域抗体(vhh)。

9.根据权利要求8所述的三聚体多肽复合物，其中，所述人源化抗egfr(huegfr)单结构域抗体(vhh)包括seq id no:28所示的序列。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的三聚体多肽复合物，其中，所述抗4-1bb激动性单链抗体片段(scfv)、所述同三聚化结构域和/或所述能够特异性地结合肿瘤相关抗原的区域直接连接或通过间隔子连接。

11.根据权利要求10所述的三聚体多肽，其中，所述间隔子是具有1至18个残基的柔性接头。

12.根据权利要求1至11中任一项所述的三聚体多肽，其中，所述单体中的至少一个进一步包括适合检测和/或纯化所述三聚体多肽的标签。

13.根据权利要求1或2所述的三聚体多肽，其中，所述单体多肽包括seqid no或seq idno:所示的序列。

14.一种多核苷酸，编码形成权利要求1至13中任一项所定义的三聚体多肽的一部分的至少一种单体多肽。

15.根据权利要求14所述的多核苷酸，包括seq id no:或seq id no:所示的序列。

16.一种载体，包括根据权利要求14或15中任一项所述的多核苷酸。

17.一种宿主细胞，包括根据权利要求16所述的载体。

18.一种组合，包括根据权利要求1至13中任一项所述的三聚体多肽、根据权利要求14或15中任一项所述的多核苷酸、根据权利要求16所述的载体或根据权利要求17所述的宿主细胞以及免疫检查点阻断剂。

19.根据权利要求18所述的组合，其中，所述免疫检查点阻断剂是pd-l1抑制剂。

20.根据权利要求19所述的组合，其中，所述pd-l1抑制剂是pd-l1抗体。

21.根据权利要求20所述的组合，其中，所述pd-l1抗体选自由阿替利珠单抗、阿维单抗和度伐利尤单抗组成的组。

22.根据权利要求18所述的组合，其中，所述免疫检查点阻断剂是pd-1抑制剂。

23.根据权利要求22所述的组合，其中，所述pd-1抑制剂是帕博利珠单抗或纳武利尤单抗。

24.一种药物组合物，包括根据权利要求1至13中任一项所述的三聚体多肽、根据权利要求14或15中任一项所述的多核苷酸、根据权利要求16所述的载体、根据权利要求17所述的宿主细胞或根据权利要求18-23中任一项所述的组合以及药学上可接受的赋形剂。

25.根据权利要求1至13中任一项所述的三聚体多肽、根据权利要求14或15中任一项所述的多核苷酸、根据权利要求16所述的载体、根据权利要求17所述的宿主细胞、根据权利要求18-23中任一项所述的组合或根据权利要求24所述的药物组合物，用于治疗癌症的用途。

26.根据权利要求25所述的用途的所述三聚体多肽、所述多核苷酸、所述载体、所述宿主细胞、所述组合或所述药物组合物，其中所述癌症是egfr阳性。

27.根据权利要求26所述的用途的所述三聚体多肽、所述多核苷酸、所述载体、所述宿主细胞、所述组合或所述药物组合物，其中所述癌症选自由结直肠癌、乳腺癌、胰腺癌、甲状腺癌、前列腺癌、卵巢癌、头颈癌和肺癌组成的组。

28.根据权利要求27所述的用途的所述三聚体多肽、所述多核苷酸、所述载体、所述宿主细胞、所述组合或所述药物组合物，其中所述乳腺癌是三阴性乳腺癌并且所述肺癌是小细胞肺癌。

技术总结
本发明涉及三聚体多肽复合物，其包括三个单体多肽，其中各个单体多肽包括抗4‑1BB特异性激动性单链抗体片段(scFv)、同三聚化结构域和能够特异性结合肿瘤相关抗原的多肽区。本发明还涉及用于治疗癌症用途的所述三聚体多肽复合物。

技术研发人员：路易斯·阿尔瓦雷斯·瓦林纳,玛尔塔·康皮特·格鲁
受保护的技术使用者：利达提斯有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/3/11