本发明涉及产环状脂肽微生物株及使用该微生物株的环状脂肽的制备方法。
背景技术:
1、以表面活性素、伊枯草菌素为代表的环状脂肽是来自于微生物的两亲性物质,例如,表面活性素作为安全性和生物降解性高的生物表面活性剂而广泛地用于医药品、化妆品、食品等。另外,上述环状脂肽不仅显示出所谓的表面活性作用,还对广谱的细菌或真菌显示出优异的抗细菌作用或抗真菌作用,期待作为抗菌剂、防霉剂、感染症治疗剂、植物病害防治剂等而在医疗、食品制造、农业、环境卫生等多种领域中得到充分利用。
2、表面活性素、伊枯草菌素等环状脂肽可由芽孢杆菌(bacillus)属微生物产生,因此,环状脂肽的工业生产可通过培养芽孢杆菌属微生物而进行(专利文献1等)。在这样的基于微生物的有用物质的工业生产中,其生产性的提高是重要的课题。
3、迄今为止,为了提高利用芽孢杆菌属微生物的培养进行的表面活性素的生产性,探讨了各种方法,但其多数是基于对培养基添加特殊的成分、严格控制培养条件的方法,无法满足生产性、经济性。
4、另外,对于表面活性素的生产能力高的枯草芽孢杆菌的突变株也有一些报告。例如,专利文献2中公开了一种用nmg将枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)atcc21332进行诱变处理而得到的能够以高浓度生产表面活性素的枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)atcc55033株。另外,非专利文献1中报告了枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)atcc21332的利用紫外线照射得到的突变株具有亲本株3倍以上的表面活性素生产性,该突变位于遗传图谱上的argc4与hisa1之间。然而,它们并不是将与该突变相关的特定靶基因进行修饰而成的微生物菌株,无法为了工业生产而稳定且大量地供给。
5、现有技术文献
6、专利文献
7、专利文献1:专利第3635638号公报
8、专利文献2:专利第3030789号公报
9、非专利文献
10、非专利文献1:appl.microbiol.biotech.,31:486-489(1989)
技术实现思路
1、发明要解决的课题
2、因此,本发明的课题在于提供表面活性素等环状脂肽的生产性优异、而且能够稳定且大量地供给于环状脂肽的工业生产的微生物株,提高基于微生物培养的环状脂肽的生产性。
3、解决课题的方法
4、本发明人等为了解决上述课题而进行了深入研究,结果发现,在编码甜菜碱醛脱氢酶(ec:1.2.1.8)的基因(gbsa基因)或编码胆碱脱氢酶(ec:1.1.1.1)的基因(gbsb基因)中的至少1个基因缺损的微生物株中表面活性素的生产性显著提高,从而完成了本发明,所述基因是与作为细胞内的渗透压调节物质的甘氨酸甜菜碱的生物合成途径相关的基因。
5、具体而言,本发明包括以下的发明。
6、[1]一种产环状脂肽微生物株,其中,以下的(1)或(2)中的至少1个基因缺损。
7、(1)编码甜菜碱醛脱氢酶(ec:1.2.1.8)的基因
8、(2)编码胆碱脱氢酶(ec:1.1.1.1)的基因
9、[2]根据[1]所述的微生物株,其中,上述微生物株是以细菌作为宿主的重组微生物株。
10、[3]根据[2]所述的微生物株,其中,上述细菌为革兰氏阳性细菌。
11、[4]根据[3]所述的微生物株,其中,上述革兰氏阳性细菌为芽孢杆菌(bacillus)属细菌。
12、[5]根据[4]所述的微生物株,其中,上述芽孢杆菌(bacillus)属细菌为枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)。
13、[6]根据[1]~[5]中任一项所述的微生物株,其中,上述环状脂肽为选自表面活性素类环状脂肽、伊枯草菌素类环状脂肽及丰原素类环状脂肽中的1种或2种以上的环状脂肽。
14、[7]根据[1]~[6]中任一项所述的微生物株,其中,上述环状脂肽为表面活性素。
15、[8]一种环状脂肽的制备方法,该方法包括:在培养基中对[1]~[7]中任一项所述的微生物株进行培养。
16、[9]根据[8]所述的环状脂肽的制备方法,其中,上述培养基包含豆类的粉碎物或其提取物。
17、[10]根据[9]所述的环状脂肽的制备方法,其中,上述豆类为大豆。
18、本申请主张2021年3月29日提出申请的日本专利申请2021-56115号的优先权,包括该专利申请的说明书中记载的内容。
19、发明的效果
20、根据本发明,可以提供与野生株、公知的突变株相比环状脂肽的生产性更优异的微生物株。通过利用该微生物株,可以提高工业上有用的环状脂肽的生产性。
1.一种产环状脂肽微生物株,其中,
2.根据权利要求1所述的微生物株,其中,
3.根据权利要求2所述的微生物株,其中,
4.根据权利要求3所述的微生物株,其中,
5.根据权利要求4所述的微生物株,其中,
6.根据权利要求1~5中任一项所述的微生物株,其中,
7.根据权利要求1~6中任一项所述的微生物株,其中,
8.一种环状脂肽的制备方法,该方法包括:
9.根据权利要求8所述的环状脂肽的制备方法,其中,
10.根据权利要求9所述的环状脂肽的制备方法,其中,