用于靶向调节性T细胞以增强免疫监视的材料和方法与流程

1.本文提供了多特异性分子和与其相关的方法以及该多特异性分子用于调节宿主中的免疫和/或治疗疾病或病症诸如癌症的用途，该多特异性分子可用于并且包括能够与存在于调节性t(treg)细胞上的抗原结合的构件。

背景技术：

0、2.背景技术

1、免疫疗法的出现已经使得各种细胞和组织(包括癌症)的治疗得到改善。通过使用免疫检查点抑制剂、肿瘤特异性自然杀伤细胞(nk)和t细胞衔接器、癌症疫苗和许多其他基于免疫的疗法，通过促进各种形式的抗肿瘤免疫应答观察到显著的存活益处(综述于myers和miller，(2020年)，nat rev clin oncol，doi：10.1038/s41571-020-0426-7；waldman等人，(2020年)，natrev immunol，20(11):651-668)中。

2、调节性t细胞(treg)是cd4+t淋巴细胞的动态亚群，该动态亚群在防止免疫系统过度活化以维持免疫稳态和自身耐受的状态中发挥作用。

3、3.
技术实现要素：

4、本发明人认识到过量的treg活性可以抑制抗肿瘤免疫应答，因此为靶向treg以治疗癌症提供了理论基础。在临床中使用treg靶向疗法观察到的功效不够理想，主要限制是缺乏选择性靶向和同时耗尽抗肿瘤免疫细胞群。因此，本发明揭示了未满足的开发治疗剂的医疗需求，该治疗剂能够选择性地耗尽treg，同时不伤害其他免疫细胞群，以增强抗肿瘤免疫。因此，在本发明的一个方面，本文提供了一种多特异性抗体，该多特异性抗体包含与在调节性t(treg)细胞上表达的第一抗原结合的第一结合结构域和与在该treg细胞上表达的第二抗原结合的第二结合结构域。

5、在本文提供的多特异性抗体的一些实施方案中，第一抗原在treg的免疫抑制活性中起作用。

6、在本文提供的多特异性抗体的一些实施方案中，第一抗原是cd25。

7、在本文提供的多特异性抗体的一些实施方案中，第一结合结构域包含：(i)重链可变区(vh)，该vh包含seq id no:1所示的vh互补决定区(cdr)1、vh cdr2和vh cdr3；和(ii)轻链可变区(vl)，该vl包含seq id no:2所示的vl cdr1、vl cdr2和vl cdr3。

8、在本文提供的多特异性抗体的一些实施方案中，第一结合结构域包含含有seq idno:1的氨基酸序列的vh和含有seq id no:2的氨基酸序列的vl。

9、在本文提供的多特异性抗体的一些实施方案中，第二抗原在treg的免疫抑制活性中起作用。

10、在本文提供的多特异性抗体的一些实施方案中，第二抗原是cd39。

11、在本文提供的多特异性抗体的一些实施方案中，第二结合结构域包含：(i)vh，该vh包含seq id no:3所示的vhcdr1、vh cdr2和vhcdr3；和(ii)vl，该vl包含seq id no:4所示的vl cdr1、vl cdr2和vl cdr3。

12、在本文提供的多特异性抗体的一些实施方案中，第二结合结构域包含含有seq idno:3的氨基酸序列的vh和含有seq id no:4的氨基酸序列的vl。

13、在本文提供的多特异性抗体的一些实施方案中，第一结合结构域和/或第二结合结构域是人源化的。

14、在本文提供的多特异性抗体的一些实施方案中，该多特异性抗体是igg抗体。在一些实施方案中，igg抗体是igg1、igg2、igg3或igg4抗体。在一些实施方案中，igg抗体是igg1抗体。

15、在本文提供的多特异性抗体的一些实施方案中，igg抗体包含具有增强fc效应子功能的突变的fc区。

16、在本文提供的多特异性抗体的一些实施方案中，该抗体包含k轻链。在本文提供的多特异性抗体的一些实施方案中，该抗体包含λ轻链。

17、在本文提供的多特异性抗体的一些实施方案中，该抗体是单克隆抗体。

18、在本文提供的多特异性抗体的一些实施方案中，该多特异性抗体是双特异性抗体。

19、在本文提供的多特异性抗体的一些实施方案中，第一结合结构域是scfv区，并且第二结合结构域是fab区。

20、在本文提供的多特异性抗体的一些实施方案中，该多特异性抗体诱导treg的耗尽或抑制。

21、在另一方面，本文提供了一种编码本文提供的多特异性抗体的核酸。还提供了一种载体，该载体包含编码本文提供的多特异性抗体的核酸。还提供了一种包含载体的宿主细胞，该载体包含编码本文提供的多特异性抗体的核酸。还提供了一种试剂盒，该试剂盒包括包含编码本文提供的多特异性抗体的核酸的载体以及用于该载体的包装。还提供了一种试剂盒，该试剂盒包含本文提供的多特异性抗体和其包装。

22、在另一方面，本文提供了一种药物组合物，该药物组合物包含多特异性抗体和药学上可接受的载体，其中该多特异性抗体包含：与treg细胞上表达的第一抗原结合的第一结合结构域，和与该treg细胞上表达的第二抗原结合的第二结合结构域。

23、在本文提供的药物组合物的一些实施方案中，第一抗原在treg的免疫抑制活性中起作用。

24、在本文提供的药物组合物的一些实施方案中，第一抗原是cd25。

25、在本文提供的药物组合物的一些实施方案中，第一结合结构域包含：(i)vh，该vh包含seq id no:1所示的vh cdr1、vh cdr2和vh cdr3；和(ii)vl，该vl包含seq id no:2所示的vl cdr1、vl cdr2和vl cdr3。

26、在本文提供的药物组合物的一些实施方案中，第一结合结构域包含含有seq idno:1的氨基酸序列的vh和含有seq id no:2的氨基酸序列的vl。

27、在本文提供的药物组合物的一些实施方案中，第二抗原在treg的免疫抑制活性中起作用。

28、在本文提供的药物组合物的一些实施方案中，第二抗原是cd39。

29、在本文提供的药物组合物的一些实施方案中，第二结合结构域包含：(i)vh，该vh包含seq id no:3所示的vh cdr1、vh cdr2和vh cdr3；和(ii)vl，该vl包含seq id no:4所示的vl cdr1、vl cdr2和vl cdr3。

30、在本文提供的药物组合物的一些实施方案中，第二结合结构域包含含有seq idno:3的氨基酸序列的vh和含有seq id no:4的氨基酸序列的vl。

31、在本文提供的药物组合物的一些实施方案中，第一结合结构域和/或第二结合结构域是人源化的。

32、在本文提供的药物组合物的一些实施方案中，多特异性抗体是igg抗体。在一些实施方案中，igg抗体是igg1、igg2、igg3或igg4抗体。在一些实施方案中，igg抗体是igg1抗体。

33、在本文提供的药物组合物的一些实施方案中，igg抗体包含具有增强fc效应子功能的突变的fc区。

34、在本文提供的药物组合物的一些实施方案中，抗体包含k轻链。在本文提供的药物组合物的一些实施方案中，抗体包含λ轻链。

35、在本文提供的药物组合物的一些实施方案中，抗体是单克隆抗体。

36、在本文提供的药物组合物的一些实施方案中，多特异性抗体是双特异性抗体。

37、在本文提供的药物组合物的一些实施方案中，第一结合结构域是scfv区，并且第二结合结构域是fab区。

38、在本文提供的药物组合物的一些实施方案中，多特异性抗体诱导treg的耗尽或抑制。

39、在又一方面，本文提供了一种用于制备多特异性抗体的方法，该方法包括将编码多特异性抗体的一种或多种核酸引入宿主细胞中，其中该多特异性抗体包含：与treg细胞上表达的第一抗原结合的第一结合结构域，和与该treg细胞上表达的第二抗原结合的第二结合结构域。

40、在用于制备本文提供的多特异性抗体的方法的一些实施方案中，第一抗原在treg的免疫抑制活性中起作用。

41、在用于制备本文提供的多特异性抗体的方法的一些实施方案中，第一抗原是cd25。

42、在用于制备本文提供的多特异性抗体的方法的一些实施方案中，第一结合结构域包含：(i)vh，该vh包含seq id no:1所示的vh cdr1、vh cdr2和vhcdr3；和(ii)vl，该vl包含seq id no:2所示的vlcdr1、vl cdr2和vl cdr3。

43、在用于制备本文提供的多特异性抗体的方法的一些实施方案中，第一结合结构域包含含有seq id no:1的氨基酸序列的vh；和含有seq id no:2的氨基酸序列的vl。

44、在用于制备本文提供的多特异性抗体的方法的一些实施方案中，第二抗原在treg的免疫抑制活性中起作用。

45、在用于制备本文提供的多特异性抗体的方法的一些实施方案中，第二抗原是cd39。

46、在用于制备本文提供的多特异性抗体的方法的一些实施方案中，第二结合结构域包含：(i)vh，该vh包含seq id no:3所示的vh cdr1、vh cdr2和vhcdr3；和(ii)vl，该vl包含seq id no:4所示的vlcdr1、vl cdr2和vl cdr3。

47、在用于制备本文提供的多特异性抗体的方法的一些实施方案中，第二结合结构域包含含有seq id no:3的氨基酸序列的vh；和含有seq id no:4的氨基酸序列的vl。

48、在用于制备本文提供的多特异性抗体的方法的一些实施方案中，第一结合结构域和/或第二结合结构域是人源化的。

49、在用于制备本文提供的多特异性抗体的方法的一些实施方案中，该多特异性抗体是igg抗体。在一些实施方案中，igg抗体是igg1、igg2、igg3或igg4抗体。在一些实施方案中，igg抗体是igg1抗体。

50、在本文提供的用于制备多特异性抗体的方法的一些实施方案中，igg抗体包含具有增强fc效应子功能的突变的fc区。

51、在本文提供的用于制备多特异性抗体的方法的一些实施方案中，该抗体包含k轻链。在用于制备本文提供的多特异性抗体的方法的一些实施方案中，该抗体包含λ轻链。

52、在用于制备本文提供的多特异性抗体的方法的一些实施方案中，该抗体是单克隆抗体。

53、在用于制备本文提供的多特异性抗体的方法的一些实施方案中，该多特异性抗体是双特异性抗体。

54、在用于制备本文提供的多特异性抗体的方法的一些实施方案中，第一结合结构域是scfv区，第二结合结构域是fab区。

55、在用于制备本文提供的多特异性抗体的方法的一些实施方案中，该多特异性抗体诱导treg的耗尽或抑制。

56、在另一方面，本文提供了一种富集、隔离、分离、纯化、分选、选择、捕获、检测或耗尽表达cd25和/或cd39的细胞的方法，该方法包括提供包含该表达cd25和/或cd39的细胞的样本；使该样本与多特异性抗体接触；以及富集、隔离、分离、纯化、分选、选择、捕获、检测或耗尽该表达cd25和/或cd39并与该多特异性抗体结合的细胞，其中该多特异性抗体包含能够与cd25结合的第一结合结构域和能够与cd39结合的第二结合结构域。

57、在本文提供的方法的一些实施方案中，细胞是treg细胞。在本文提供的方法的一些实施方案中，样本是血液样本。在一些实施方案中，样本是组织样本。

58、在另一方面，本文提供了一种抑制或耗尽treg细胞的方法，该方法包括使该treg细胞与多特异性抗体接触，该多特异性抗体包含：与treg细胞上表达的第一抗原结合的第一结合结构域，和与该treg细胞上表达的第二抗原结合的第二结合结构域。

59、在另一方面，本文提供了一种抑制或耗尽癌细胞和treg细胞的方法，该方法包括使该癌细胞和该treg细胞与多特异性抗体接触，该多特异性抗体包含：与treg细胞上表达的第一抗原结合的第一结合结构域，和与该treg细胞上表达的第二抗原结合的第二结合结构域。

60、在另一方面，本文提供了一种抑制或耗尽患有癌症的受试者体内的癌细胞和treg细胞的方法，该方法包括向该受试者施用多特异性抗体，该多特异性抗体包含：与treg细胞上表达的第一抗原结合的第一结合结构域，和与该treg细胞上表达的第二抗原结合的第二结合结构域。

61、在另一方面，本文提供了一种治疗受试者的癌症的方法，该方法包括向该受试者施用多特异性抗体，该多特异性抗体包含：与treg细胞上表达的第一抗原结合的第一结合结构域，和与该treg细胞上表达的第二抗原结合的第二结合结构域。

62、在本文提供的方法的一些实施方案中，癌症是实体瘤癌症。在一些实施方案中，癌症是血癌。

63、在本文提供的方法的一些实施方案中，第一抗原负责treg的免疫抑制活性。

64、在本文提供的方法的一些实施方案中，第一抗原是cd25。

65、在本文提供的方法的一些实施方案中，第一结合结构域包含：(i)vh，该vh包含seqid no:1所示的vh cdr1、vh cdr2和vh cdr3；和(ii)vl，该vl包含seq id no:2所示的vlcdr1、vl cdr2和vl cdr3。

66、在本文提供的方法的一些实施方案中，第一结合结构域包含含有seq id no:1的氨基酸序列的vh和含有seq id no:2的氨基酸序列的vl。

67、在本文提供的方法的一些实施方案中，第二抗原在treg的免疫抑制活性中起作用。

68、在本文提供的方法的一些实施方案中，第二抗原是cd39。

69、在本文提供的方法的一些实施方案中，第二结合结构域包含：(i)vh，该vh包含seqid no:3所示的vh cdr1、vh cdr2和vh cdr3；和(ii)vl，该vl包含seq id no:4所示的vlcdr1、vl cdr2和vl cdr3。

70、在本文提供的方法的一些实施方案中，第二结合结构域包含含有seq id no:3的氨基酸序列的vh和含有seq id no:4的氨基酸序列的vl。

71、在本文提供的方法的一些实施方案中，第一结合结构域是人源化的并且/或者第二结合结构域是人源化的。

72、在本文提供的方法的一些实施方案中，多特异性抗体是igg抗体。在一些实施方案中，igg抗体是igg1、igg2、igg3或igg4抗体。在一些实施方案中，igg抗体是igg1抗体。

73、在本文提供的方法的一些实施方案中，igg抗体包含具有增强fc效应子功能的突变的fc区。

74、在本文提供的方法的一些实施方案中，抗体包含k轻链。在本文提供的方法的一些实施方案中，抗体包含λ轻链。

75、在本文提供的方法的一些实施方案中，抗体是单克隆抗体。

76、在本文提供的方法的一些实施方案中，多特异性抗体是双特异性抗体。

77、在本文提供的方法的一些实施方案中，第一结合结构域是scfv区，并且第二结合结构域是fab区。

78、在本文提供的方法的一些实施方案中，多特异性抗体诱导treg的耗尽或抑制。

79、在另一方面，本文提供了一种多特异性分子，该多特异性分子包含：能够与treg细胞上表达的第一抗原结合的第一构件，和能够与该treg细胞上表达的第二抗原结合的第二构件。

80、在本文提供的分子的一些实施方案中，第一抗原在treg的免疫抑制活性中起作用。

81、在本文提供的分子的一些实施方案中，第一抗原是cd25。

82、在本文提供的分子的一些实施方案中，第二抗原在treg的免疫抑制活性中起作用。

83、在本文提供的分子的一些实施方案中，第二抗原是cd39。

84、在另一方面，本文提供了一种用于制备与多于一个靶分子结合的分子的方法，该方法包括：用于执行获得能够与treg细胞的表面上的第一抗原结合的结合结构域的功能的步骤；用于执行获得能够与该treg细胞的表面上的第二抗原结合的结合结构域的功能的步骤；以及用于执行提供能够与该第一抗原和该第二抗原结合的分子的功能的步骤。

85、在另一方面，本文提供了一种抑制treg细胞的生长或增殖或耗尽treg细胞的方法，该方法包括使该treg细胞与本文提供的分子接触。

86、<110>  janssen biotech, inc.

87、<120>  用于靶向调节性t细胞以增强免疫监视的材料和方法

88、<130>  14620-627-228

89、<140>

90、<141>

91、<150>  us 63/151,636

92、<151>  2021-02-19

93、<150>  us 63/151,635

94、<151>  2021-02-19

95、<150>  us 63/151,634

96、<151>  2021-02-19

97、<150>  us 63/151,633

98、<151>  2021-02-19

99、<150>  us 63/151,631

100、<151>  2021-02-19

101、<160>  14

102、<170>  patentin 3.5版本

103、<210>  1

104、<211>  115

105、<212>  prt

106、<213>  人工序列

107、<220>

108、<223>  抗cd25 vh

109、<400>  1

110、gln leu gln gln ser gly thr val leu ala arg pro gly ala ser val

111、1               5                   10                  15

112、lys met ser cys lys ala ser gly tyr ser phe thr arg tyr trp met

113、            20                  25                  30

114、his trp ile lys gln arg pro gly gln gly leu glu trp ile gly ala

115、        35                  40                  45

116、ile tyr pro gly asn ser asp thr ser tyr asn gln lys phe glu gly

117、    50                  55                  60

118、lys ala lys leu thr ala val thr ser ala ser thr ala tyr met glu

119、65                  70                  75                  80

120、leu ser ser leu thr his glu asp ser ala val tyr tyr cys ser arg

121、                85                  90                  95

122、asp tyr gly tyr tyr phe asp phe trp gly gln gly thr thr leu thr

123、            100                 105                 110

124、val ser ser

125、        115

126、<210>  2

127、<211>  104

128、<212>  prt

129、<213>  人工序列

130、<220>

131、<223>  抗cd25 vl

132、<400>  2

133、gln ile val ser thr gln ser pro ala ile met ser ala ser pro gly

134、1               5                   10                  15

135、glu lys val thr met thr cys ser ala ser ser ser arg ser tyr met

136、            20                  25                  30

137、gln trp tyr gln gln lys pro gly thr ser pro lys arg trp ile tyr

138、        35                  40                  45

139、asp thr ser lys leu ala ser gly val pro ala arg phe ser gly ser

140、    50                  55                  60

141、gly ser gly thr ser tyr ser leu thr ile ser ser met glu ala glu

142、65                  70                  75                  80

143、asp ala ala thr tyr tyr cys his gln arg ser ser tyr thr phe gly

144、                85                  90                  95

145、gly gly thr lys leu glu ile lys

146、            100

147、<210>  3

148、<211>  116

149、<212>  prt

150、<213>  人工序列

151、<220>

152、<223>  抗cd39 vh

153、<400>  3

154、glu val gln leu gln gln ser gly pro glu leu val lys pro gly ala

155、1               5                   10                  15

156、ser val lys met ser cys lys ala ser gly tyr thr phe thr asp tyr

157、            20                  25                  30

158、asn met his trp val lys gln ser his gly arg thr leu glu trp ile

159、        35                  40                  45

160、gly tyr ile val pro leu asn gly gly ser thr phe asn gln lys phe

161、    50                  55                  60

162、lys gly arg ala thr leu thr val asn thr ser ser arg thr ala tyr

163、65                  70                  75                  80

164、met glu leu arg ser leu thr ser glu asp ser ala ala tyr tyr cys

165、                85                  90                  95

166、ala arg gly gly thr arg phe ala tyr trp gly gln gly thr leu val

167、            100                 105                 110

168、thr val ser ala

169、        115

170、<210>  4

171、<211>  111

172、<212>  prt

173、<213>  人工序列

174、<220>

175、<223>  抗cd39 vl

176、<400>  4

177、asp ile val leu thr gln ser pro ala ser leu ala val ser leu gly

178、1               5                   10                  15

179、gln arg ala thr ile ser cys arg ala ser glu ser val asp asn phe

180、            20                  25                  30

181、gly val ser phe met tyr trp phe gln gln lys pro gly gln pro pro

182、        35                  40                  45

183、asn leu leu ile tyr gly ala ser asn gln gly ser gly val pro ala

184、    50                  55                  60

185、arg phe arg gly ser gly ser gly thr asp phe ser leu asn ile his

186、65                  70                  75                  80

187、pro met glu ala asp asp thr ala met tyr phe cys gln gln thr lys

188、                85                  90                  95

189、glu val pro tyr thr phe gly gly gly thr lys leu glu ile lys

190、            100                 105                 110

191、<210>  5

192、<211>  119

193、<212>  prt

194、<213>  人工序列

195、<220>

196、<223>  抗rsv vh

197、<400>  5

198、glu val gln leu leu glu ser gly gly gly leu val gln pro gly gly

199、1               5                   10                  15

200、ser leu arg leu ser cys ala ala ser gly phe thr phe ser ser tyr

201、            20                  25                  30

202、ala met ser trp val arg gln ala pro gly lys gly leu glu trp val

203、        35                  40                  45

204、ser ala ile ser gly ser gly gly ser thr tyr tyr ala asp ser val

205、    50                  55                  60

206、lys gly arg phe thr ile ser arg asp asn ser lys asn thr leu tyr

207、65                  70                  75                  80

208、leu gln met asn ser leu arg ala glu asp thr ala val tyr tyr cys

209、                85                  90                  95

210、ala lys tyr asp gly ile tyr gly glu leu asp phe trp gly cys gly

211、            100                 105                 110

212、thr leu val thr val ser ser

213、        115

214、<210>  6

215、<211>  107

216、<212>  prt

217、<213>  人工序列

218、<220>

219、<223>  抗rsv vl

220、<400>  6

221、asp ile gln met thr gln ser pro ser ser leu ser ala ser val gly

222、1               5                   10                  15

223、asp arg val thr ile thr cys arg ala ser gln ser ile ser ser tyr

224、            20                  25                  30

225、leu asn trp tyr gln gln lys pro gly cys ala pro lys leu leu ile

226、        35                  40                  45

227、tyr ala ala ser ser leu gln ser gly val pro ser arg phe ser gly

228、    50                  55                  60

229、ser gly ser gly thr asp phe thr leu thr ile ser ser leu gln pro

230、65                  70                  75                  80

231、glu asp phe ala thr tyr tyr cys gln gln ser tyr ser thr pro leu

232、                85                  90                  95

233、thr phe gly gln gly thr lys val glu ile lys

234、            100                 105

235、<210>  7

236、<211>  490

237、<212>  prt

238、<213>  人工序列

239、<220>

240、<223>  抗cd25（巴利昔单抗）

241、<400>  7

242、met ala trp val trp thr leu leu phe leu met ala ala ala gln ser

243、1               5                   10                  15

244、ile gln ala gln ile val ser thr gln ser pro ala ile met ser ala

245、            20                  25                  30

246、ser pro gly glu lys val thr met thr cys ser ala ser ser ser arg

247、        35                  40                  45

248、ser tyr met gln trp tyr gln gln lys pro gly thr ser pro lys arg

249、    50                  55                  60

250、trp ile tyr asp thr ser lys leu ala ser gly val pro ala arg phe

251、65                  70                  75                  80

252、ser gly ser gly ser gly thr ser tyr ser leu thr ile ser ser met

253、                85                  90                  95

254、glu ala glu asp ala ala thr tyr tyr cys his gln arg ser ser tyr

255、            100                 105                 110

256、thr phe gly gly gly thr lys leu glu ile lys gly gly ser glu gly

257、        115                 120                 125

258、lys ser ser gly ser gly ser glu ser lys ser thr gly gly ser gln

259、    130                 135                 140

260、leu gln gln ser gly thr val leu ala arg pro gly ala ser val lys

261、145                 150                 155                 160

262、met ser cys lys ala ser gly tyr ser phe thr arg tyr trp met his

263、                165                 170                 175

264、trp ile lys gln arg pro gly gln gly leu glu trp ile gly ala ile

265、            180                 185                 190

266、tyr pro gly asn ser asp thr ser tyr asn gln lys phe glu gly lys

267、        195                 200                 205

268、ala lys leu thr ala val thr ser ala ser thr ala tyr met glu leu

269、    210                 215                 220

270、ser ser leu thr his glu asp ser ala val tyr tyr cys ser arg asp

271、225                 230                 235                 240

272、tyr gly tyr tyr phe asp phe trp gly gln gly thr thr leu thr val

273、                245                 250                 255

274、ser ser glu pro lys ser cys asp lys thr his thr cys pro pro cys

275、            260                 265                 270

276、pro ala pro glu leu leu gly gly pro ser val phe leu phe pro pro

277、        275                 280                 285

278、lys pro lys asp thr leu met ile ser arg thr pro glu val thr cys

279、    290                 295                 300

280、val val val asp val ser his glu asp pro glu val lys phe asn trp

281、305                 310                 315                 320

282、tyr val asp gly val glu val his asn ala lys thr lys pro arg glu

283、                325                 330                 335

284、glu gln tyr asn ser thr tyr arg val val ser val leu thr val leu

285、            340                 345                 350

286、his gln asp trp leu asn gly lys glu tyr lys cys lys val ser asn

287、        355                 360                 365

288、lys ala leu pro ala pro ile glu lys thr ile ser lys ala lys gly

289、    370                 375                 380

290、gln pro arg glu pro gln val tyr thr leu pro pro ser arg glu glu

291、385                 390                 395                 400

292、met thr lys asn gln val ser leu trp cys leu val lys gly phe tyr

293、                405                 410                 415

294、pro ser asp ile ala val glu trp glu ser asn gly gln pro glu asn

295、            420                 425                 430

296、asn tyr lys thr thr pro pro val leu asp ser asp gly ser phe phe

297、        435                 440                 445

298、leu tyr ser lys leu thr val asp lys ser arg trp gln gln gly asn

299、    450                 455                 460

300、val phe ser cys ser val met his glu ala leu his asn his tyr thr

301、465                 470                 475                 480

302、gln lys ser leu ser leu ser pro gly lys

303、                485                 490

304、<210>  8

305、<211>  465

306、<212>  prt

307、<213>  人工序列

308、<220>

309、<223>  抗cd39 hc

310、<400>  8

311、met ala trp val trp thr leu leu phe leu met ala ala ala gln ser

312、1               5                   10                  15

313、ile gln ala glu val gln leu gln gln ser gly pro glu leu val lys

314、            20                  25                  30

315、pro gly ala ser val lys met ser cys lys ala ser gly tyr thr phe

316、        35                  40                  45

317、thr asp tyr asn met his trp val lys gln ser his gly arg thr leu

318、    50                  55                  60

319、glu trp ile gly tyr ile val pro leu asn gly gly ser thr phe asn

320、65                  70                  75                  80

321、gln lys phe lys gly arg ala thr leu thr val asn thr ser ser arg

322、                85                  90                  95

323、thr ala tyr met glu leu arg ser leu thr ser glu asp ser ala ala

324、            100                 105                 110

325、tyr tyr cys ala arg gly gly thr arg phe ala tyr trp gly gln gly

326、        115                 120                 125

327、thr leu val thr val ser ala ala ser thr lys gly pro ser val phe

328、    130                 135                 140

329、pro leu ala pro ser ser lys ser thr ser gly gly thr ala ala leu

330、145                 150                 155                 160

331、gly cys leu val lys asp tyr phe pro glu pro val thr val ser trp

332、                165                 170                 175

333、asn ser gly ala leu thr ser gly val his thr phe pro ala val leu

334、            180                 185                 190

335、gln ser ser gly leu tyr ser leu ser ser val val thr val pro ser

336、        195                 200                 205

337、ser ser leu gly thr gln thr tyr ile cys asn val asn his lys pro

338、    210                 215                 220

339、ser asn thr lys val asp lys lys val glu pro lys ser cys asp lys

340、225                 230                 235                 240

341、thr his thr cys pro pro cys pro ala pro glu leu leu gly gly pro

342、                245                 250                 255

343、ser val phe leu phe pro pro lys pro lys asp thr leu met ile ser

344、            260                 265                 270

345、arg thr pro glu val thr cys val val val asp val ser his glu asp

346、        275                 280                 285

347、pro glu val lys phe asn trp tyr val asp gly val glu val his asn

348、    290                 295                 300

349、ala lys thr lys pro arg glu glu gln tyr asn ser thr tyr arg val

350、305                 310                 315                 320

351、val ser val leu thr val leu his gln asp trp leu asn gly lys glu

352、                325                 330                 335

353、tyr lys cys lys val ser asn lys ala leu pro ala pro ile glu lys

354、            340                 345                 350

355、thr ile ser lys ala lys gly gln pro arg glu pro gln val tyr thr

356、        355                 360                 365

357、leu pro pro ser arg glu glu met thr lys asn gln val ser leu ser

358、    370                 375                 380

359、cys ala val lys gly phe tyr pro ser asp ile ala val glu trp glu

360、385                 390                 395                 400

361、ser asn gly gln pro glu asn asn tyr lys thr thr pro pro val leu

362、                405                 410                 415

363、asp ser asp gly ser phe phe leu val ser lys leu thr val asp lys

364、            420                 425                 430

365、ser arg trp gln gln gly asn val phe ser cys ser val met his glu

366、        435                 440                 445

367、ala leu his asn arg phe thr gln lys ser leu ser leu ser pro gly

368、    450                 455                 460

369、lys

370、465

371、<210>  9

372、<211>  237

373、<212>  prt

374、<213>  人工序列

375、<220>

376、<223>  抗cd39 lc

377、<400>  9

378、met ala trp val trp thr leu leu phe leu met ala ala ala gln ser

379、1               5                   10                  15

380、ile gln ala asp ile val leu thr gln ser pro ala ser leu ala val

381、            20                  25                  30

382、ser leu gly gln arg ala thr ile ser cys arg ala ser glu ser val

383、        35                  40                  45

384、asp asn phe gly val ser phe met tyr trp phe gln gln lys pro gly

385、    50                  55                  60

386、gln pro pro asn leu leu ile tyr gly ala ser asn gln gly ser gly

387、65                  70                  75                  80

388、val pro ala arg phe arg gly ser gly ser gly thr asp phe ser leu

389、                85                  90                  95

390、asn ile his pro met glu ala asp asp thr ala met tyr phe cys gln

391、            100                 105                 110

392、gln thr lys glu val pro tyr thr phe gly gly gly thr lys leu glu

393、        115                 120                 125

394、ile lys arg thr val ala ala pro ser val phe ile phe pro pro ser

395、    130                 135                 140

396、asp glu gln leu lys ser gly thr ala ser val val cys leu leu asn

397、145                 150                 155                 160

398、asn phe tyr pro arg glu ala lys val gln trp lys val asp asn ala

399、                165                 170                 175

400、leu gln ser gly asn ser gln glu ser val thr glu gln asp ser lys

401、            180                 185                 190

402、asp ser thr tyr ser leu ser ser thr leu thr leu ser lys ala asp

403、        195                 200                 205

404、tyr glu lys his lys val tyr ala cys glu val thr his gln gly leu

405、    210                 215                 220

406、ser ser pro val thr lys ser phe asn arg gly glu cys

407、225                 230                 235

408、<210>  10

409、<211>  495

410、<212>  prt

411、<213>  人工序列

412、<220>

413、<223>  抗rsv（克隆b21m）

414、<400>  10

415、met ala trp val trp thr leu leu phe leu met ala ala ala gln ser

416、1               5                   10                  15

417、ile gln ala asp ile gln met thr gln ser pro ser ser leu ser ala

418、            20                  25                  30

419、ser val gly asp arg val thr ile thr cys arg ala ser gln ser ile

420、        35                  40                  45

421、ser ser tyr leu asn trp tyr gln gln lys pro gly cys ala pro lys

422、    50                  55                  60

423、leu leu ile tyr ala ala ser ser leu gln ser gly val pro ser arg

424、65                  70                  75                  80

425、phe ser gly ser gly ser gly thr asp phe thr leu thr ile ser ser

426、                85                  90                  95

427、leu gln pro glu asp phe ala thr tyr tyr cys gln gln ser tyr ser

428、            100                 105                 110

429、thr pro leu thr phe gly gln gly thr lys val glu ile lys gly gly

430、        115                 120                 125

431、gly ser gly gly ser gly gly cys pro pro cys gly gly ser gly gly

432、    130                 135                 140

433、glu val gln leu leu glu ser gly gly gly leu val gln pro gly gly

434、145                 150                 155                 160

435、ser leu arg leu ser cys ala ala ser gly phe thr phe ser ser tyr

436、                165                 170                 175

437、ala met ser trp val arg gln ala pro gly lys gly leu glu trp val

438、            180                 185                 190

439、ser ala ile ser gly ser gly gly ser thr tyr tyr ala asp ser val

440、        195                 200                 205

441、lys gly arg phe thr ile ser arg asp asn ser lys asn thr leu tyr

442、    210                 215                 220

443、leu gln met asn ser leu arg ala glu asp thr ala val tyr tyr cys

444、225                 230                 235                 240

445、ala lys tyr asp gly ile tyr gly glu leu asp phe trp gly cys gly

446、                245                 250                 255

447、thr leu val thr val ser ser glu pro lys ser cys asp lys thr his

448、            260                 265                 270

449、thr cys pro pro cys pro ala pro glu leu leu gly gly pro ser val

450、        275                 280                 285

451、phe leu phe pro pro lys pro lys asp thr leu met ile ser arg thr

452、    290                 295                 300

453、pro glu val thr cys val val val asp val ser his glu asp pro glu

454、305                 310                 315                 320

455、val lys phe asn trp tyr val asp gly val glu val his asn ala lys

456、                325                 330                 335

457、thr lys pro arg glu glu gln tyr asn ser thr tyr arg val val ser

458、            340                 345                 350

459、val leu thr val leu his gln asp trp leu asn gly lys glu tyr lys

460、        355                 360                 365

461、cys lys val ser asn lys ala leu pro ala pro ile glu lys thr ile

462、    370                 375                 380

463、ser lys ala lys gly gln pro arg glu pro gln val tyr thr leu pro

464、385                 390                 395                 400

465、pro ser arg glu glu met thr lys asn gln val ser leu trp cys leu

466、                405                 410                 415

467、val lys gly phe tyr pro ser asp ile ala val glu trp glu ser asn

468、            420                 425                 430

469、gly gln pro glu asn asn tyr lys thr thr pro pro val leu asp ser

470、        435                 440                 445

471、asp gly ser phe phe leu tyr ser lys leu thr val asp lys ser arg

472、    450                 455                 460

473、trp gln gln gly asn val phe ser cys ser val met his glu ala leu

474、465                 470                 475                 480

475、his asn his tyr thr gln lys ser leu ser leu ser pro gly lys

476、                485                 490                 495

477、<210>  11

478、<211>  1485

479、<212>  dna

480、<213>  人工序列

481、<220>

482、<223>  抗cd25（巴利昔单抗）

483、<400>  11

484、gccgccacca tggcctgggt gtggaccctg ctgttcctga tggccgccgc ccagagcatc      60

485、caggcccaaa ttgtgtctac ccagtctcct gccatcatgt ccgcctctcc aggcgagaaa     120

486、gtgacaatga cctgctccgc ctcctcctct cggtcctaca tgcagtggta tcagcagaag     180

487、cccggcacct ctcctaagcg gtggatctac gatacctcca agctggcttc tggcgtgcca     240

488、gccagatttt ctggctctgg ctccggcacc agctactccc tgaccatctc ttctatggaa     300

489、gccgaggacg ccgccaccta ctactgtcac cagagatcct cttacacctt cggcggaggc     360

490、accaagctgg aaatcaaagg cggctctgag ggcaagtcct ccggctctgg atctgagtct     420

491、aagtctaccg gcggatccca gctgcagcag tctggaacag ttttggccag acctggcgcc     480

492、tccgtgaaga tgtcttgcaa ggcctctggc tacagcttca cccggtactg gatgcactgg     540

493、atcaagcaga ggcctggaca gggactcgag tggatcggag ctatctaccc tggcaactcc     600

494、gacacctcct acaaccagaa gttcgagggc aaagccaagc tgaccgccgt gacctctgct     660

495、tccacagcct atatggaact gtcctctctg acccacgagg actccgccgt gtactactgc     720

496、tctagagact acggctacta cttcgacttc tggggccagg gcacaaccct gacagtttct     780

497、tctgagccca aatcttgtga caaaactcac acatgtccac cgtgcccagc acctgaactc     840

498、ctggggggac cgtcagtctt cctcttcccc ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc     900

499、cggacccctg aggtcacatg cgtggtggtg gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag     960

500、ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag    1020

501、cagtacaaca gcacgtaccg tgtggtcagc gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg    1080

502、aatggcaagg agtacaagtg caaggtctcc aacaaagccc tcccagcccc catcgagaaa    1140

503、accatctcca aagccaaagg gcagccccga gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc    1200

504、cgggaggaga tgaccaagaa ccaggtcagc ctgtggtgcc tggtcaaagg cttctatccc    1260

505、agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaat gggcagccgg agaacaacta caagaccacg    1320

506、cctcccgtgc tggactccga cggctccttc ttcctctaca gcaagctcac cgtggacaag    1380

507、tctagatggc agcaggggaa cgtcttctca tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac    1440

508、cactacacgc agaagagcct ctccctgtct ccgggtaaat gatag                    1485

509、<210>  12

510、<211>  1410

511、<212>  dna

512、<213>  人工序列

513、<220>

514、<223>  抗cd39 hc

515、<400>  12

516、gccgccacca tggcctgggt gtggaccctg ctgttcctga tggccgccgc ccagagcatc      60

517、caggccgaag ttcaattgca gcagtctggc cctgagctgg tcaaacctgg cgcctctgtg     120

518、aagatgtctt gcaaggcctc tggctacacc ttcaccgact acaacatgca ctgggtcaag     180

519、cagtcccacg gcagaacact ggaatggatc ggctacatcg tgcctctgaa cggcggctcc     240

520、accttcaacc agaagttcaa gggcagagct accctgaccg tgaacacctc ctctcggacc     300

521、gcctacatgg aactgagatc cctgacctct gaggactccg ccgcctacta ttgtgctaga     360

522、ggcggcacca gatttgccta ttggggacag ggaaccctgg tcaccgtttc tgctgcctcc     420

523、accaagggcc catcggtctt ccccctggca ccctcctcca agagcacctc tgggggcaca     480

524、gcggccctgg gctgcctggt caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac     540

525、tcaggcgccc tgaccagcgg cgtgcacacc ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc     600

526、tactccctca gcagcgtggt gaccgtgccc tccagcagct tgggcaccca gacctacatc     660

527、tgcaacgtga atcacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agaaagttga gcccaaatct     720

528、tgtgacaaaa ctcacacatg tccaccgtgc ccagcacctg aactcctggg gggaccgtca     780

529、gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac accctcatga tctcccggac ccctgaggtc     840

530、acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg     900

531、gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca aagccgcggg aggagcagta caacagcacg     960

532、taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg caccaggact ggctgaatgg caaggagtac    1020

533、aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc    1080

534、aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac accctgcccc catcccggga ggagatgacc    1140

535、aagaaccagg tcagcctgtc ctgcgccgtc aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg    1200

536、gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac    1260

537、tccgacggct ccttcttcct cgtcagcaag ctcaccgtgg acaagtctag atggcagcag    1320

538、gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaacaggtt cacgcagaag    1380

539、agcctctccc tgtctccggg taaatgatag                                     1410

540、<210>  13

541、<211>  726

542、<212>  dna

543、<213>  人工序列

544、<220>

545、<223>  抗cd39 lc

546、<400>  13

547、gccgccacca tggcctgggt gtggaccctg ctgttcctga tggccgccgc ccagagcatc      60

548、caggccgata ttgtgttgac ccagtctcct gcctctctgg ctgtgtctct gggacagaga     120

549、gccaccatct cttgcagagc ctccgagtct gtggacaact tcggcgtgtc cttcatgtac     180

550、tggttccagc agaagcccgg ccagcctcct aatctgctga tctacggcgc ctccaatcaa     240

551、ggctctggcg tgccagctag attcagaggc tctggatctg gcaccgactt ctccctgaac     300

552、atccatccta tggaagccga cgacaccgcc atgtactttt gccagcagac caaagaggtg     360

553、ccctacacct ttggcggagg caccaagctg gaaatcaaga gaaccgtggc cgctccttcc     420

554、gtgttcatct tcccaccatc tgacgagcag ctgaagtccg gcacagcttc tgtcgtgtgc     480

555、ctgctgaaca acttctaccc tcgggaagcc aaggtgcagt ggaaggtgga caatgccctg     540

556、cagtccggca actcccaaga gtctgtgacc gagcaggact ccaaggactc tacctacagc     600

557、ctgtcctcca cactgaccct gtctaaggcc gactacgaga agcacaaggt gtacgcctgt     660

558、gaagtgaccc accagggact gtctagcccc gtgaccaagt ctttcaacag aggcgagtgc     720

559、tgatga                                                                726

560、<210>  14

561、<211>  1500

562、<212>  dna

563、<213>  人工序列

564、<220>

565、<223>  抗rsv（克隆b21m）

566、<400>  14

567、gccgccacca tggcctgggt gtggaccctg ctgttcctga tggccgccgc ccagagcatc      60

568、caggccgata ttcagatgac ccagtctcct tccagcctgt ctgcctctgt gggcgacaga     120

569、gtgaccatca cctgtcgggc ctctcagtcc atctcctcct acctgaactg gtatcagcag     180

570、aagcctggct gcgcccctaa gctgctgatc tatgctgcta gctctctgca gtccggcgtg     240

571、ccctctagat tttctggctc tggatctggc accgacttca ccctgaccat cagttctctg     300

572、cagcctgagg acttcgccac ctactactgc cagcagtcct acagcacccc tctgaccttt     360

573、ggccagggca ccaaggtgga aatcaaaggc ggaggtagcg gcggatctgg cggatgtcct     420

574、ccttgcggag gttctggcgg agaagtgcag ttgttggaaa gtggcggagg actggttcag     480

575、cctggcggat ctctgagact gtcttgtgcc gcctccggct tcaccttctc ctcttacgct     540

576、atgtcctggg tccgacaggc tcctggcaaa ggattggagt gggtgtccgc tatctctgga     600

577、tccggcggct ctacctacta cgccgattct gtgaagggca gattcaccat cagccgggac     660

578、aactccaaga acaccctgta cctgcagatg aactccctga gagccgagga caccgccgtg     720

579、tactactgtg ctaagtacga cggcatctac ggcgagctgg atttttgggg ctgtggcaca     780

580、ctggtcaccg tgtcctctga gcccaaatct tgtgacaaaa ctcacacatg tccaccgtgc     840

581、ccagcacctg aactcctggg gggaccgtca gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac     900

582、accctcatga tctcccggac ccctgaggtc acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa     960

583、gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca    1020

584、aagccgcggg aggagcagta caacagcacg taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg    1080

585、caccaggact ggctgaatgg caaggagtac aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca    1140

586、gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac    1200

587、accctgcccc catcccggga ggagatgacc aagaaccagg tcagcctgtg gtgcctggtc    1260

588、aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac    1320

589、aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag    1380

590、ctcaccgtgg acaagtctag atggcagcag gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat    1440

591、gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag agcctctccc tgtctccggg taaatgatag    1500

技术实现思路