SLC13A5基因治疗载体及其用途

本公开内容一般涉及基因治疗领域，具体涉及包含编码slc13a5多肽的转基因序列的重组腺相关病毒(aav)载体颗粒(也称为raav病毒载体)、其制造及其用于递送转基因以治疗或预防疾病或病症包括与slc13a5基因的丢失、功能失调和/或缺陷相关的疾病的用途。

背景技术：

1、溶质载体家族13成员5(slc13a5)是一种高亲和力的钠依赖性柠檬酸盐协同转运蛋白，其介导柠檬酸盐进入细胞。slc13a5在肝脏、牙齿、睾丸和大脑中高表达，并且slc13a5基因中的突变与神经系统异常相关(yang等人,child neurology open 2020,vol.7；1-7)。特别是，slc13a5缺陷导致新生儿和儿童中的常染色体隐性癫痫性脑病，这种病早在生命的第一天就表现出来，并进展为难治性癫痫和发育迟缓(hardies等人,brain 2015:138；3238-3250)。迄今为止，slc13a5癫痫的治疗是对症治疗，例如使用抗癫痫药物。对slc13a5癫痫的有效长期治疗存在尚未得到满足的需求。

技术实现思路

1、本公开内容提供了重组腺相关病毒(raav)载体，其在5'至3'方向上包含：a)第一aav itr序列；b)启动子序列；c)转基因核酸分子，其中转基因核酸分子包含编码slc13a5多肽的核酸序列；d)多聚腺苷酸序列；和e)第二aav itr序列。

2、在一些方面，slc13a5多肽可包含seq id no：1所示的氨基酸序列。

3、在一些方面，编码slc13a5多肽的核酸序列可以是编码slc13a5多肽的密码子优化的核酸序列。在一些方面，编码slc13a5多肽的优化的核酸序列可包含seq id no：3所示的核酸序列。

4、在一些方面，编码slc13a5多肽的密码子优化的核酸序列相对于野生型或非密码子优化的核酸序列表现出在人类受试者中至少5％、至少10％、至少20％、至少30％、至少50％、至少75％、至少100％、至少200％、至少300％、至少500％或至少1000％增加的表达。

5、在一些方面，第一aav itr序列可包含seq id no：7所示的核酸序列。在一些方面，第二aav itr序列可包含seq id no：8所示的核酸序列。

6、在一些方面，启动子序列可以包含劳斯肉瘤病毒(rsv)ltr启动子(任选地具有rsv增强子)、巨细胞病毒(cmv)启动子、sv40启动子、二氢叶酸还原酶启动子、β-肌动蛋白启动子、磷酸甘油激酶(pgk)启动子、u6启动子、jeti启动子、h1启动子、cag启动子、杂合鸡β-肌动蛋白启动子、mecp2启动子、ef1启动子、普遍存在的鸡β-肌动蛋白杂合(cbh)启动子、u1a启动子、u1b启动子、mecp2启动子、mep418启动子、mep426启动子、最小mecp2启动子、vmd2启动子、mrho启动子、ef1a启动子、ubc启动子、人β-肌动蛋白启动子、突触蛋白(hsyn)启动子序列、tre启动子、ac5启动子、多角体蛋白启动子、camkiia启动子、gal1启动子、tef1启动子、gds启动子、adh1启动子、ubi启动子或α-1-抗胰蛋白酶(haat)启动子。在一些方面，启动子序列可包含seq id no：21所示的核酸序列。

7、在一些方面，多聚腺苷酸序列包含seq id no：36所示的核酸序列。

8、本公开内容提供了raav载体，其在5'至3'方向上包含：a)包含seq id no：7所示的核酸序列的第一aav itr序列；b)包含seq id no：21所示的核酸序列的启动子序列；c)转基因核酸分子，其中转基因核酸分子包含编码slc13a5多肽的核酸序列，其中编码slc13a5多肽的核酸序列包含seq id no：3所示的核酸序列；d)包含seq id no：36所示的核酸序列的多聚腺苷酸序列；和e)包含seq id no：8所示的核酸序列的第二aav itr序列。

9、本公开内容提供了包含seq id no：38所示的核酸序列的raav载体。

10、本公开内容提供了raav病毒载体，其包含：(i)aav衣壳蛋白；和(ii)本公开内容的raav载体。在一些方面，aav衣壳蛋白可以是aav1衣壳蛋白、aav2衣壳蛋白、aav4衣壳蛋白、aav5衣壳蛋白、aav6衣壳蛋白、aav7衣壳蛋白、aav8衣壳蛋白、aav9衣壳蛋白、aav10衣壳蛋白、aav11衣壳蛋白、aav12衣壳蛋白、aav13衣壳蛋白、aavphp.b衣壳蛋白、aavrh74衣壳蛋白或aavrh.10衣壳蛋白。在一些方面，aav衣壳蛋白可以是aav9衣壳蛋白。

11、本发明提供了一种药物组合物，其包含：a)本公开内容的raav病毒载体；和至少一种药学上可接受的赋形剂和/或添加剂。

12、本公开内容提供了用于治疗患有涉及slc13a5基因的疾病和/或病症的受试者的方法，该方法包括向受试者施用至少一种治疗有效量的本公开内容的raav病毒载体或药物组合物。

13、本公开内容提供了本公开内容的raav病毒载体或药物组合物，其用于在有需要的受试者中治疗涉及slc13a5基因的疾病和/或病症。

14、在一些方面，涉及slc13a5基因的疾病和/或病症可以是新生儿癫痫性脑病。

15、在一些方面，本公开内容的raav病毒载体或药物组合物可以以约1011至约1018个载体基因组的剂量施用至受试者。

16、在一些方面，本公开内容的raav病毒载体或药物组合物可以以约1013至约1016个载体基因组的剂量施用至受试者。

17、在一些方面，raav病毒载体或药物组合物以约2x1011或约8x1011个载体基因组的剂量施用至受试者。

18、在一些方面，本公开内容的raav病毒载体或药物组合物可以静脉内、鞘内、小脑延髓池内(intracisterna-magna)、脑内、心室内、鼻内、气管内、耳内、眼内或眼周、口服、直肠、经粘膜、吸入、经皮、肠胃外、皮下、皮内、肌内、脑池内、神经内(intranervally)、胸膜内、局部、淋巴内、脑池内或神经内(intranerve)施用。

19、在一些方面，本公开内容的raav病毒载体或药物组合物可以鞘内施用。

20、在一些方面，本公开内容的raav病毒载体或药物组合物可以小脑延髓池内施用。

21、在另一个方面，本文提供了重组腺相关病毒(raav)载体，其在5'至3'方向上包含：(a)包含seq id no：7的序列的第一aav itr序列；(b)启动子序列；(c)编码slc13a5多肽的核酸序列，其中所述slc13a5多肽包含seq id no：1所示的氨基酸序列；(d)多聚腺苷酸序列；和(e)包含seq id no：8的序列的第二aav itr序列。

22、在一些实施方案中，编码slc13a5多肽的核酸序列是密码子优化的核酸序列。在一些实施方案中，编码slc13a5多肽的密码子优化的核酸序列包含seq id no：3所示的核酸序列。

23、在一些实施方案中，启动子序列包含seq id no：21所示的核酸序列。

24、在一些实施方案中，多聚腺苷酸序列包含seq id no：36所示的核酸序列。

25、在一些实施方案中，raav载体包含seq id no：38所示的核酸序列。

26、在另一个方面，本文提供了一种raav病毒载体，其包含：(i)aav衣壳蛋白；和(ii)本文提供的raav载体。在一些实施方案中，aav衣壳蛋白是aav9衣壳蛋白。

27、在另一个方面，本文提供了药物组合物，其包含本文提供的raav病毒载体和至少一种药学上可接受的赋形剂和/或添加剂。

28、在另一个方面，本文提供了治疗患有涉及slc13a5基因的疾病和/或病症的受试者的方法，该方法包括向受试者施用至少一种治疗有效量的本文提供的raav病毒载体或药物组合物。在一些实施方案中，涉及slc13a5基因的疾病和/或病症是新生儿癫痫性脑病。在一些实施方案中，raav病毒载体或药物组合物鞘内施用。在一些实施方案中，raav病毒载体或药物组合物小脑延髓池内施用。