一种人CHI3L1单克隆抗体1D7、重组载体、重组质粒及方法和应用与流程

本发明属于抗体制备，具体涉及一种人chi3l1单克隆抗体1d7、重组载体、重组质粒及方法和应用。

背景技术：

1、几丁质酶-3样蛋白1(chitinase-3-likeprotein 1，chi3l1)是几丁质酶糖苷水解酶18家族成员之一。chi3l1是一种分泌糖蛋白，大小约为40kda，在巨噬细胞、软骨细胞、成纤维细胞样滑膜细胞、血管平滑肌细胞和肝星状细胞等多种细胞中表达和分泌。chi3l1有2种亚型：一种为全长亚型包含所有10个外显子，另一种短变体的外显子8被选择性剪接删除。人体中存在8个几丁质酶的糖苷水解酶18家族成员，chi3l1作为人体糖基水解酶18家族的糖蛋白成员之一，具有几丁质结合活性，但缺乏几丁质酶活性。该蛋白由1个(β/α)8桶状结构域和1个由6条反平行β链构成的第二结构域组成，链β7后插入1个α螺旋(α+β)结构域，同时(β/α)8桶状结构中β链的c端具有1个含43个残基的碳水化合物结合位点，侧边的堆叠可以控制蛋白质-碳水化合物的相互作用。该结构决定了chi3l1可以作为传感器激活先天防御同时调节感染引起的炎症反应，也可能有助于肿瘤的发生。目前研究表明该蛋白的表达与炎症、细胞外组织重塑、纤维化、实体癌及哮喘相关疾病的发生发展过程密切相关。

2、研究发现chi3l1在神经系统疾病发展进程中发挥重要作用。chi3l1的表达受nfi-x3、stat3和ap-1的控制，能够促进原代星形胶质细胞的迁移。它的缺失可以改变胶质细胞炎症反应，促进星形胶质细胞和小胶质细胞aβ吞噬，减轻淀粉样斑块形成，并影响阿尔兹海默症(ad)的疾病进展；chi3l1对创伤性脑损伤(tbi)相关的神经炎症反应有调节作用，它的缺失导致更严重的神经病理学现象和更显著的胶质细胞病变进程；此外，chi3l1的高表达可促使主动脉粥样硬化斑块含量显著升高，颈动脉斑块新生血管高度增加，颈动脉斑块中的胶原蛋白含量显著降低。在早期人颈动脉斑块和小鼠模型斑块中，chi3l1表达促进病变面积显著增加，同时明显抑制巨噬细胞凋亡。chi3l1表现出医学应用中的巨大发展潜力，随着研究的进一步深入，chi3l1可能成为中枢神经系统相关病的诊断标志和治疗的新靶标。chi3l1检测用抗体可用于chi3l1抗原检测等其它科学研究，但当前用于chi3l1检测的抗体大部分来自于杂交瘤细胞，传统的杂交瘤细胞不易保存，使用时间过长会出现细胞状态变差，难以复苏等情况。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种人chi3l1单克隆抗体1d7、重组载体、重组质粒及方法和应用。本发明所述单克隆抗体效价良好，并且用于制备所述单克隆抗体的表达载体和重组细胞，易于保存和改造。

2、本发明提供了一种可特异性识别chi3l1的单克隆抗体1d7，所述单克隆抗体1d7包括重链和轻链；所述重链的可变区包括3个重链互补决定区，所述3个重链互补决定区的氨基酸序列如seq id no.1～seq id no.3所示，或如seq id no.11～seq id no.13所示；所述单克隆抗体1d7的轻链可变区包括3个轻链互补决定区，氨基酸序列如seq id no.4～seqid no.6所示。

3、优选的是，所述单克隆抗体1d7的重链可变区的氨基酸序列如seq id no.7所示或如seq id no.14所示；所述单克隆抗体1d7的轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.9所示。

4、优选的是，编码所述单克隆抗体1d7的重链可变区的核苷酸序列如seq id no.8所示或如seq id no.15所示；编码所述单克隆抗体1d7轻链可变区的核苷酸序列如seq idno.10所示。

5、本发明还提供了一种表达单克隆抗体1d7的重组载体，所述重组载体包括携带编码单克隆抗体1d7重链可变区的核苷酸序列的载体和携带编码单克隆抗体1d7轻链可变区核苷酸序列的载体；所述携带编码单克隆抗体1d7重链可变区的核苷酸序列的载体的基础载体包括pfuse-chig-m2a，所述携带编码单克隆抗体1d7轻链可变区核苷酸序列的载体的基础载体包括pfuse2ss-clig-mk；编码所述单克隆抗体1d7的重链可变区的核苷酸序列如seq id no.8所示；编码所述单克隆抗体1d7的轻链可变区的核苷酸序列如seq id no.10所示。

6、优选的是，所述单克隆抗体1d7的重链可变区的核苷酸序列连接到pfuse-chig-m2a的ecori和nhei之间；所述单克隆抗体1d7的轻链可变区连接到pfuse2ss-clig-mk的ecori和nhei之间。

7、本发明还提供了一种表达单克隆抗体1d7的重组细胞，所述重组细胞含上述技术方案所述重组载体，所述重组细胞的基础细胞包括哺乳动物细胞。

8、本发明还提供了上述技术方案所述重组细胞的构建方法，包括以下步骤：将上述技术方案所述重组载体混合后转染所述基础细胞，得重组细胞。

9、本发明还提供了一种制备上述技术方案所述单克隆抗体1d7的方法，包括以下步骤：对上述技术方案所述重组细胞培养48h，离心，收集上清液。

10、本发明还提供了上述技术方案所述单克隆抗体1d7或上述技术方案所述的重组载体或上述技术方案所述的重组细胞或上述技术方案所述构建方法构建得到的重组细胞或上述技术方案所述方法制备得到的单克隆抗体1d7在制备检测chi3l1的试剂中的应用。

11、本发明还提供了上述技术方案所述单克隆抗体1d7或上述技术方案所述的重组载体或上述技术方案所述的重组细胞或上述技术方案所述构建方法构建得到的重组细胞或上述技术方案所述方法制备得到的单克隆抗体1d7在制备神经系统疾病诊断和/或预后判断的试剂中的应用。

12、本发明提供了一种人chi3l1单克隆抗体1d7。本发明所述单克隆抗体1d7效价良好，基于本发明重链和轻链的可变区的互补决定区序列，构架表达载体，转染细胞，能够实现本发明所述单克隆抗体1d7的表达。本发明所述单克隆抗体1d7载体易于保存，易于抗体生产过程质量控制；也方便对抗体做一系列的改造，更深入的研究，更广泛的应用。经实施例验证，本发明所述的单克隆抗体1d7或利用重组细胞生产得到的单克隆抗体1d7，可以识别chi3l1蛋白，具有生物学活性。所述单克隆抗体均可用于chi3l1抗原检测等其它科学研究，具有非常好的应用价值和非常重要科研指导意义。

技术特征：

1.一种可特异性识别chi3l1的单克隆抗体1d7，其特征在于，所述单克隆抗体1d7包括重链和轻链；所述重链的可变区包括3个重链互补决定区，所述3个重链互补决定区的氨基酸序列如seq id no.1～seq id no.3所示，或如seq id no.11～seq id no.13所示；所述单克隆抗体1d7的轻链可变区包括3个轻链互补决定区，氨基酸序列如seq id no.4～seqid no.6所示。

2.根据权利要求1所述的单克隆抗体1d7，其特征在于，所述单克隆抗体1d7的重链可变区的氨基酸序列如seq id no.7所示或如seq id no.14所示；所述单克隆抗体1d7的轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.9所示。

3.根据权利要求1所述的单克隆抗体1d7，其特征在于，编码所述单克隆抗体1d7的重链可变区的核苷酸序列如seq id no.8所示或如seq id no.15所示；编码所述单克隆抗体1d7轻链可变区的核苷酸序列如seq id no.10所示。

4.一种表达单克隆抗体1d7的重组载体，其特征在于，所述重组载体包括携带编码单克隆抗体1d7重链可变区的核苷酸序列的载体和携带编码单克隆抗体1d7轻链可变区核苷酸序列的载体；所述携带编码单克隆抗体1d7重链可变区的核苷酸序列的载体的基础载体包括pfuse-chig-m2a，所述携带编码单克隆抗体1d7轻链可变区核苷酸序列的载体的基础载体包括pfuse2ss-clig-mk；编码所述单克隆抗体1d7的重链可变区的核苷酸序列如seq idno.8所示；编码所述单克隆抗体1d7的轻链可变区的核苷酸序列如seq id no.10所示。

5.根据权利要求4所述的重组载体，其特征在于，所述单克隆抗体1d7的重链可变区的核苷酸序列连接到pfuse-chig-m2a的ecori和nhei之间；所述单克隆抗体1d7的轻链可变区连接到pfuse2ss-clig-mk的ecori和nhei之间。

6.一种表达单克隆抗体1d7的重组细胞，其特征在于，所述重组细胞含权利要求4或5所述重组载体，所述重组细胞的基础细胞包括哺乳动物细胞。

7.权利要求6所述重组细胞的构建方法，包括以下步骤：将权利要求4或5所述重组载体混合后转染所述基础细胞，得重组细胞。

8.一种制备权利要求1～3任一项所述单克隆抗体1d7的方法，包括以下步骤：对权利要求6所述重组细胞培养48h，离心，收集上清液。

9.权利要求1～3任一项所述单克隆抗体1d7或权利要求4或5所述的重组载体或权利要求6所述的重组细胞或权利要求7所述构建方法构建得到的重组细胞或权利要求8所述方法制备得到的单克隆抗体1d7在制备检测chi3l1的试剂中的应用。

10.权利要求1～3任一项所述单克隆抗体1d7或权利要求4或5所述的重组载体或权利要求6所述的重组细胞或权利要求7所述构建方法构建得到的重组细胞或权利要求8所述方法制备得到的单克隆抗体1d7在制备神经系统疾病诊断和/或预后判断的试剂中的应用。

技术总结
本发明属于抗体制备技术领域，属于一种人CHI3L1单克隆抗体1D7、重组载体、重组质粒及方法和应用。本发明提供了一种可特异性识别CHI3L1的单克隆抗体1D7，所述单克隆抗体1D7包括重链和轻链；所述重链的可变区包括3个重链互补决定区，所述3个重链互补决定区的氨基酸序列如SEQ IDNO.1～SEQ ID NO.3所示，或如SEQ ID NO.11～SEQ ID NO.13所示；所述单克隆抗体1D7的轻链可变区包括3个轻链互补决定区，氨基酸序列如SEQ IDNO.4～SEQ ID NO.6所示。本发明所述单克隆抗体效价良好，并且用于制备所述单克隆抗体的表达载体和重组细胞，易于保存和改造。

技术研发人员：闫亚平,李科,郝文斌,张亚剑,刘瑞曼,王洁
受保护的技术使用者：陕西脉元生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12