用于捕获靶核酸的组合物和方法与流程

本公开涉及分子生物学领域，更特别地，涉及用于通过使用捕获混合物从混合物(诸如样品)中分离核酸的方法和组合物，该捕获混合物包括与一种或多种靶核酸以及与固定于固体载体上的特异性结合配偶体杂化的探针群体、包括特异性结合配偶体的固体载体、月桂基硫酸锂、氢氧化锂以及两性离子磺酸缓冲剂，以允许与混合物的其他组分分离。序列表本技术与电子格式的序列表一同提交。序列表以创建于2020年10月27日的标题为“2020-10-27_01159-0041-00pct_seq_list_st25.txt”的文件的形式提供，大小为12,288字节。序列表的电子格式的信息通过援引以其整体并入本文。

背景技术：

技术实现思路

1、许多分子生物学程序，诸如核酸的体外扩增和体外杂交，包括从其他样品组分中分离(例如，捕获)核酸以促进后续步骤。核酸分离的方法可以分离样品中存在的所有核酸，基于物理特征分离不同类型的核酸或从样品中分离特定核酸。许多方法涉及复杂的程序、使用苛刻的化学品或条件，或者需要很长时间才能完成该核酸分离。一些方法涉及使用专门的寡核苷酸，每个寡核苷酸对预期的靶核酸都具有特异性，这增加了方法的设计、优化和性能的复杂性，特别是如果期望分离多于一种靶核酸或期望的靶核酸的序列未知时。一些方法不需要特定的靶序列就可以分离靶核酸，但是不能高效地分离所有序列。因此，对于将感兴趣的核酸与其他样品组分分离，仍然需要具有改进的简单性、捕获效率和速度的捕获混合物。本公开旨在满足这些需求，和/或提供其他益处，或至少向公众提供有用的选择。

2、因此，以下实施方式在本公开提供的实施方式中。

3、实施方式1是一种用于从样品中分离靶核酸的捕获混合物，所述捕获混合物包括：

4、(a)月桂基硫酸锂；

5、(b)氢氧化锂；以及

6、(c)两性离子磺酸缓冲剂；

7、其中：

8、(i)所述月桂基硫酸锂以相对于所述混合物中的总固体的按重量计约5％-35％的浓度或约35-120g/l的浓度存在；和/或

9、(ii)所述氢氧化锂以相对于所述混合物中的总固体的按重量计约6％-15％的浓度或约14-50g/l的浓度存在；和/或

10、(iii)所述捕获混合物包括c2-6二羧酸；和/或

11、(iv)所述捕获混合物包括蛋白酶k；和/或

12、(v)所述捕获混合物包括(1)第一捕获探针群体，所述第一捕获探针群体包括第一区域和第二区域，所述第一区域的长度为至少约12个残基并且包括至少一个聚(k)序列，所述聚(k)序列包括包含g和u/t核苷酸的随机序列，或非随机重复(g和u/t)序列，或其组合；所述第二区域包括第一特异性结合配偶体(sbp)，其中所述sbp能够特异性结合第二特异性结合配偶体(sbp2)；和(2)第二捕获探针群体，所述第二捕获探针群体包括第一区域和第二区域，所述第一区域的长度为至少约12个残基并包括聚(r)序列，所述聚(r)序列包括包含g和a核苷酸的随机序列、非随机重复(a和g)序列，或其组合；所述第二区域包括第三特异性结合配偶体(sbp3)，其中所述sbp3能够特异性结合所述sbp2；和/或

13、(vi)(1)所述第一捕获探针群体；

14、(vii)(2)任选地，所述第二捕获探针群体；以及

15、(viii)(3)包括固定于其上的所述sbp2的固体载体；

16、其中所述捕获探针的总浓度为约1-10mg/l，和/或固体载体是珠粒，并且所述珠粒以相对于所述混合物中的总固体的按重量计约0.15％-1％或约300-2200mg/l的浓度存在；和/或

17、(ix)所述捕获混合物不包括磷酸盐缓冲液诸如nah2po4/na2hpo4缓冲液，螯合剂诸如edta或egta，或licl中的一种或多种。

18、实施方式2是根据实施方式1所述的捕获混合物，其中，所述捕获混合物包括水。

19、实施方式3是根据实施方式1或实施方式2所述的捕获混合物，其中所述月桂基硫酸锂以相对于所述混合物中的总固体的按重量计约5％-35％的浓度或约20-120g/l的浓度存在。

20、实施方式4是根据实施方式1或实施方式2所述的捕获混合物，其中所述月桂基硫酸锂以相对于所述混合物中的总固体的按重量计约8％-15％，或约9％-12％，或约11％的浓度或约20-45g/l，或约25-40g/l，或约25-35g/l，或约30g/l，或约39g/l的浓度存在。

21、实施方式5是根据实施方式3所述的捕获混合物，其中所述月桂基硫酸锂以相对于所述混合物中的总固体的按重量计约5％-35％的浓度或约35-120g/l的浓度存在。

22、实施方式6是根据实施方式5所述的捕获混合物，其中所述月桂基硫酸锂以相对于所述混合物中的总固体的按重量计9％-30％，或约9％-14％，或约10％-13％，或约25％-30％，或约11％的浓度或约35-40g/l，或约100g/l的浓度存在。

23、实施方式7是根据实施方式1至4中的任一项所述的捕获混合物，其中所述氢氧化锂以相对于所述混合物中的总固体的按重量计约6％-15％的浓度或约14-40g/l的浓度存在。

24、实施方式8是根据实施方式7所述的捕获混合物，其中所述氢氧化锂以相对于所述混合物中的总固体的按重量计约8％-13％，或约10％-12.5％，或约10％-11％，或约10.4％的浓度或约17-40g/l，或约18-20g/l，或约27-30g/l，或约37g/l，或约19g/l，或约28.5g/l的浓度存在。

25、实施方式9是根据前述实施方式中任一项所述的捕获混合物，其中所述捕获混合物包括c2-6二羧酸。

26、实施方式10是根据实施方式9所述的捕获混合物，其中c2-6二羧酸是琥珀酸。

27、实施方式11是根据实施方式9或实施方式10所述的捕获混合物，其中所述二羧酸以相对于混合物中的总固体的按重量计约7％-12％，或约7.5％-11％，或约10％，或约9.9％的浓度或约25-40g/l，或约25-30g/l，或约33-38g/l，或约35g/l，或约27g/l，或约27.2g/l的浓度存在。

28、实施方式12是根据前述实施方式中任一项所述的捕获混合物，其中所述捕获混合物包括蛋白酶k。

29、实施方式13是根据实施方式12所述的捕获混合物，其中所述捕获混合物中的所述蛋白酶k具有的比活性在约2.5-12u/ml，或约3-10u/ml，或约5u/ml的范围内(任选地，在例如用染色酶测定法，罗氏(roche)测量比活性的情况下)。

30、实施方式14是根据实施方式12或实施方式13所述的捕获混合物，其中所述蛋白酶k以约1-20mg/ml，或约1-10mg/ml，或约1-5mg或约1-4mg/ml，或约1.5-3mg/ml，或约2mg/ml，或约3mg/ml，或约4mg/ml的浓度存在于所述捕获混合物中。

31、实施方式15是根据前述实施方式中任一项所述的捕获混合物，其中所述捕获混合物包括：

32、(1)第一捕获探针群体，所述第一捕获探针群体包括第一区域和第二区域，所述第一区域的长度为至少约12个残基并且包括至少一个聚(k)序列，所述聚(k)序列包括包含g和u/t核苷酸的随机序列，或非随机重复(g和u/t)序列，或其组合；所述第二区域包括第一特异性结合配偶体(sbp)，其中所述sbp能够特异性结合第二特异性结合配偶体(sbp2)；和

33、(2)任选地，第二捕获探针群体，所述第二捕获探针群体包括第一区域和第二区域，所述第一区域的长度为至少约12个残基并包括聚(r)序列，所述聚(r)序列包括包含g和a核苷酸的随机序列、非随机重复(a和g)序列，或其组合；所述第二区域包括第三特异性结合配偶体(sbp3)，其中所述sbp3能够特异性结合所述sbp2；和

34、(3)包括固定于其上的所述sbp2的固体载体；

35、其中所述捕获探针的总浓度为约1-10mg/l，和/或固体载体是珠粒，并且所述珠粒以相对于所述混合物中的总固体的按重量计约0.15％-1％或约300-2800mg/l的浓度存在。

36、实施方式16是根据前述实施方式中任一项所述的捕获混合物，其中所述捕获混合物包括：

37、(1)第一捕获探针群体，所述第一捕获探针群体包括第一区域和第二区域，所述第一区域的长度为至少约12个残基并且包括至少一个聚(k)序列，所述聚(k)序列包括包含g和u/t核苷酸的随机序列，或非随机重复(g和u/t)序列，或其组合；所述第二区域包括第一特异性结合配偶体(sbp)，其中所述sbp能够特异性结合第二特异性结合配偶体(sbp2)；和

38、(2)第二捕获探针群体，所述第二捕获探针群体包括第一区域和第二区域，所述第一区域的长度为至少约12个残基并包括聚(r)序列，所述聚(r)序列包括包含g和a核苷酸的随机序列、非随机重复(a和g)序列，或其组合；所述第二区域包括第三特异性结合配偶体(sbp3)，其中所述sbp3能够特异性结合所述sbp2。

39、实施方式17是根据前述实施方式中任一项所述的捕获混合物，其中所述捕获混合物包括固定至所述固体载体的所述sbp2。

40、实施方式18是根据实施方式17所述的捕获混合物，其中，所述固体载体是珠粒，诸如磁性珠粒或二氧化硅珠粒。

41、实施方式19是根据前述实施方式中任一项所述的捕获混合物，其中其上固定有sbp2的所述固体载体是珠粒，并且所述珠粒以相对于混合物中的总固体的按重量计0.03％-1.0％的浓度或约150-2800mg/l的浓度存在。

42、实施方式20是根据实施方式19所述的捕获混合物，其中所述珠粒以相对于所述混合物中的总固体的按重量计约0.04％-0.8％，或约0.03％-0.1％，或约0.2％-0.3％，或约0.7％-0.8％，或约0.2％的浓度，或150-1200mg/l，或约150-250mg/l，或约500-700mg/l，或约1800-2800mg/l，或约200mg/l，或约260mg/l，或约600mg/l，或约780mg/l，或约2000mg/l，或约2600mg/l的浓度存在。

43、实施方式21是根据前述实施方式中任一项所述的捕获混合物，其中所述捕获探针以约0.5-15mg/l，或约0.5-1mg/l，或约2-10mg/l，或约4-9mg/l，或约7-8mg/l，或约9.5mg/l，或约7.4mg/l的总浓度存在。

44、实施方式22是根据实施方式21所述的捕获混合物，其中所述捕获混合物包括所述第一群体和所述第二群体。

45、实施方式23是根据实施方式22所述的捕获混合物，其中所述第一群体和所述第二群体各自以大约相同的浓度存在。

46、实施方式24是根据实施方式23所述的捕获混合物，其中所述第一群体和所述第二群体各自以约3-4mg/l或约3.7mg/l的浓度存在。

47、实施方式25是根据前述实施方式中任一项所述的捕获混合物，其中所述两性离子磺酸缓冲剂是4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸(hepes)。

48、实施方式26是根据前述实施方式中任一项所述的捕获混合物，其中所述两性离子磺酸缓冲剂以相对于所述混合物中的总固体的约50％-85％，或约52.5％-57.5％，或约64％-70％，或约72％-82％的浓度，或约150-275g/l，或约175-260g/l，或约170-200g/l，或约244g/l，或约188g/l的浓度存在。

49、实施方式27是根据实施方式2至26中任一项所述的捕获混合物，进一步包括消泡剂，任选地其中所述消泡剂为3维硅氧烷脱泡剂，并且所述3维硅氧烷脱泡剂在水中乳化。

50、实施方式28是根据实施方式27所述的捕获混合物，其中所述消泡剂以约0.02％w/v至约0.1％w/v，或约0.03％w/v至约0.08％w/v，或约0.03％w/v至约0.05％w/v，或约0.05％w/v，或约0.04％w/v的浓度存在。

51、实施方式29是根据实施方式2至28中任一项所述的捕获混合物，其中以下中的两种、三种、四种、五种、六种或七种为真：(i)所述第一群体和所述第二群体各自以约3.7mg/l的浓度存在；(ii)所述sbp2以约0.6mg/l的浓度存在，(iii)所述月桂基硫酸锂以约30g/l的浓度存在；(iv)所述氢氧化锂的浓度以约28.5g/l的浓度存在；(v)所述琥珀酸以约27.2g/l的浓度存在；(vi)所述两性离子磺酸缓冲剂是hepes并且以约188g/l的浓度存在；以及(vii)所述消泡剂以约0.04％w/v的浓度存在。

52、实施方式30是根据前述实施方式中任一项所述的捕获混合物，其中所述聚(k)序列包括包含g和u/t核苷酸的随机序列。

53、实施方式31是根据前述实施方式中任一项所述的捕获混合物，其中所述第一群体的所述第一区域包括至少约13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个核苷酸的随机聚(k)序列。

54、实施方式32是根据前述实施方式中任一项所述的捕获混合物，其中所述聚(k)序列包括至少约13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个核苷酸的非随机重复(g和u/t)序列。

55、实施方式33是根据前述实施方式中任一项所述的捕获混合物，其中所述第一群体的所述第一区域的长度为至少13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个核苷酸。

56、实施方式34为根据前述实施方式中任一项所述的捕获混合物，其中所述第一群体的所述第一区域由随机g和u/t核苷酸、非随机重复g和u/t核苷酸或其组合组成。

57、实施方式35是根据实施方式1至33中任一项所述的捕获混合物，其中所述第一群体的所述第一区域进一步包括在所述聚(k)序列和第二聚(k)序列之间的接头序列，并且所述第二聚(k)序列包括(i)包含g和u/t核苷酸的随机序列，或(ii)非随机重复(g和u/t)序列。

58、实施方式36是根据实施方式35所述的捕获混合物，其中所述聚(k)序列的长度为至少约6个残基，并且所述第二聚(k)序列的长度为至少约6个残基。

59、实施方式37是根据前述实施方式中任一项所述的捕获混合物，其中所述第一群体的所述第一区域包括2’-o-甲基修饰的rna残基。

60、实施方式38是根据前述实施方式中任一项所述的捕获混合物，其中所述第一群体的所述第一区域包括聚(k)18、聚(k)24或聚(k)25序列。

61、实施方式39是根据前述实施方式中任一项所述的捕获混合物，其中所述sbp包括均聚序列。

62、实施方式40是根据实施方式39所述的捕获混合物，其中所述sbp包括dt3da30(seqidno:23)或da30(seq id no:24)序列。

63、实施方式41是根据前述实施方式中任一项所述的捕获混合物，其中所述sbp位于所述第一群体的所述第一区域的3’。

64、实施方式42是根据前述实施方式中任一项所述的捕获混合物，其中所述聚(r)序列包括包含g和a核苷酸的随机序列。

65、实施方式43是根据实施方式42所述的捕获混合物，其中所述第二群体的所述第一区域包括至少约2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个核苷酸的随机聚(r)序列。

66、实施方式44是根据前述实施方式中任一项所述的捕获混合物，其中所述聚(r)序列包括至少约4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个核苷酸的非随机重复(a和g)序列。

67、实施方式45是根据前述实施方式中任一项所述的捕获混合物，其中所述第二群体的所述第一区域的长度为至少13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个核苷酸。

68、实施方式46是根据前述实施方式中任一项所述的捕获混合物，其中所述第二群体的所述第一区域由所述随机g和a核苷酸、所述非随机重复(a和g)序列或其组合组成。

69、实施方式47是根据前述实施方式中任一项所述的捕获混合物，其中所述第二群体的所述第一区域进一步包括在所述聚(r)序列和第二聚(r)序列之间的接头序列，并且所述第二聚(r)序列包括(i)包括g和a核苷酸的随机序列，或(ii)非随机重复(a和g)序列。

70、实施方式48是根据实施方式47所述的捕获混合物，其中所述聚(r)序列的长度为至少约6个残基并且所述第二聚(r)序列的长度为至少约6个残基。

71、实施方式49是根据前述实施方式中任一项所述的捕获混合物，其中所述第二群体的所述第一区域包括2’-o-甲基修饰的rna残基。

72、实施方式50是根据前述实施方式中任一项所述的捕获混合物，其中所述第二群体的所述第一区域包括聚(r)18、聚(r)24或聚(r)25序列。

73、实施方式51是根据前述实施方式中任一项所述的捕获混合物，其中所述sbp3包括均聚序列。

74、实施方式52是根据实施方式51所述的捕获混合物，其中所述sbp3包括dt3da30(seqidno:23)或da30(seq id no:24)序列。

75、实施方式53是根据前述实施方式中任一项所述的捕获混合物，其中所述sbp3位于所述第二群体的所述第一区域的3’。

76、实施方式54是根据前述实施方式中任一项所述的捕获混合物，其中所述sbp和所述sbp3之一或两者是与所述sbp2基本上互补的核酸序列。

77、实施方式55是根据前述实施方式中任一项所述的捕获混合物，其中所述sbp2包括聚dt序列。

78、实施方式56是根据实施方式55所述的捕获混合物，其中所述sbp2包括dt14序列。

79、实施方式57是根据实施方式1所述的捕获混合物，包括：

80、(a)月桂基硫酸锂；

81、(b)氢氧化锂；

82、(c)所述两性离子磺酸缓冲剂；

83、(d)所述c2-6二羧酸；以及

84、(e)蛋白酶k。

85、实施方式58是根据实施方式57所述的捕获混合物，其中所述捕获混合物包括：

86、(f)第一捕获探针群体，所述第一捕获探针群体包括第一区域和第二区域，所述第一区域的长度为至少约12个残基并且包括至少一个聚(k)序列，所述聚(k)序列包括包含g和u/t核苷酸的随机序列，或非随机重复(g和u/t)序列，或其组合；所述第二区域包括第一特异性结合配偶体(sbp)，其中所述sbp能够特异性结合第二特异性结合配偶体(sbp2)；

87、(g)第二捕获探针群体，所述第二捕获探针群体包括第一区域和第二区域，所述第一区域的长度为至少约12个残基并包括聚(r)序列，所述聚(r)序列包括包含g和a核苷酸的随机序列、非随机重复(a和g)序列，或其组合；所述第二区域包括第三特异性结合配偶体(sbp3)，其中所述sbp3能够特异性结合所述sbp2；以及

88、(h)包括固定于其上的所述sbp2的固体载体；

89、实施方式59是包括前述实施方式中任一项所述的捕获混合物的预混制剂，其中，所述预混制剂不包括蛋白酶k，并且当所述制剂包括水时，组分以1.3倍的所列溶液浓度存在。

90、实施方式60是根据权利要求59所述的预混制剂，包括约244g/l hepes、约39g/l月桂基硫酸锂、约37g/l氢氧化锂、约35g/l琥珀酸、约0.04％w/v消泡剂、约3.7mg/ml所述第一群体和所述第二群体中的每一种以及约780mg/l的固定于珠粒上的sbp2。

91、实施方式61是包括实施方式1至58中任一项所述的活化的捕获混合物，其中所述捕获混合物包括蛋白酶k。

92、实施方式62是通过将实施方式59或实施方式60所述的预混制剂与蛋白酶k组合而制备的活化的捕获混合物。

93、实施方式63是根据实施方式61或实施方式62所述的捕获混合物，其中所述蛋白酶k以约1-20mg/ml，或约1-5mg，或约1-4mg/ml，或约1.5-3mg/ml，或约2mg/ml，或约3mg/ml，或约4mg/ml的浓度存在于所述活化的捕获混合物中。

94、实施方式64是根据实施方式62所述的活化的捕获混合物，其中所述活化的捕获混合物通过以下来制备：将预混制剂与蛋白酶k溶液以约3:1至6:1，或约3:1至4:1，或约3.475:1(诸如139ml:40ml)的体积比组合，其中所述溶液中蛋白酶k的浓度为约5-20mg/ml，或约4.5-18mg/ml，或约5-15mg/ml，或约8-10mg/ml，或约9mg/ml，并且所述蛋白酶k具有约12.5-50u/ml，或约20-30u/ml，或约25u/ml的比活性。

95、实施方式65是包括实施方式1至58中任一项所述的捕获混合物或实施方式61-64中任一项所述的活化的捕获混合物和靶核酸的反应混合物，其中当蛋白酶k存在时，其任选地以约0.4-2mg/ml，或约1mg/ml的浓度，和/或任选地以约1-6u/ml或约2.5u/ml的比活性存在。

96、实施方式66是根据实施方式65所述的反应混合物，进一步包括内部对照和包含氢氧化锂的增强剂。

97、实施方式67是通过组合实施方式59或实施方式60所述的预混制剂、蛋白酶k和靶核酸制备的反应混合物，其中所述蛋白酶k任选地以约0.4-2mg/ml，或约1mg/ml的浓度，和/或任选地以约1-6u/ml或约2.5u/ml的比活性存在。

98、实施方式68是根据实施方式67所述的反应混合物，通过将实施方式59或实施方式60所述的预混制剂、蛋白酶k、内部对照、靶核酸和包含氢氧化锂的增强剂混合而制备。

99、实施方式69是根据实施方式66或实施方式68所述的反应混合物，其中所述增强剂中氢氧化锂的浓度为约0.8m-3.5m，或约1.0m-2.75m，或约1.25m-2.5m，或约1.5m-2.0m，或约1.6m-1.8m，或约1.68m。

100、实施方式70是根据实施方式65至69中任一项所述的反应混合物，其中所述靶核酸处于溶液相中和/或与捕获探针缔合。

101、实施方式71是根据实施方式70所述的反应混合物，其中所述溶液相包括来自动物、环境、食物或工业来源的样品。

102、实施方式72是根据实施方式70或实施方式71所述的反应混合物，其中所述溶液相包括样品，所述样品包括外周血、血清、血浆、脑脊髓液、痰、尿液或拭子标本。

103、实施方式73是根据实施方式65至72中任一项所述的反应混合物，其中所述靶核酸来源于外周血、血清或血浆。

104、实施方式74是根据实施方式70至72中任一项所述的反应混合物，其中所述靶核酸源自经过处理以将细胞内组分释放到所述溶液相中的细胞。

105、实施方式75是一种用于从样品中分离靶核酸的方法，所述方法包括：

106、a.使权利要求1-58中任一项所述的捕获混合物或权利要求61至64中任一项所述的活化的捕获混合物(其包括所述第一捕获探针群体)与包括靶核酸的溶液接触以形成反应混合物；

107、b.在允许所述第一群体的所述第一区域与所述靶核酸杂交的条件下温育所述反应混合物；

108、c.在步骤(b)的同时或之后，在允许所述sbp(和所述sbp3，如果存在的话)与固定于所述载体上的所述sbp2缔合的条件下，将所述反应混合物与包括固定于其上的所述sbp2的固体载体一起温育，从而形成与溶液相接触的杂交复合物；以及

109、d.从所述溶液相中分离出所述载体，从而将所述靶核酸与所述样品中的其他组分分离。

110、实施方式76是根据实施方式75所述的方法，其中步骤(a)包括将实施方式61至64中任一项所述的活化的捕获混合物与内部对照、包括靶核酸的溶液和包含氢氧化锂的增强剂组合。

111、实施方式77是根据实施方式76所述的方法，其中所述增强剂中氢氧化锂的浓度为0.8m-3.5m，或约1.0m-2.75m，或约1.25m-2.5m，或约1.5m-2.0m，或约1.6m-1.8m，或约1.68m。

112、实施方式78是根据实施方式75至77中任一项所述的方法，其中所述捕获混合物或活化的捕获混合物不包括所述固体载体，并且步骤(a)包括将所述捕获混合物或活化的捕获混合物与所述固体载体组合。

113、实施方式79是根据实施方式75至78中任一项所述的方法，其中所述靶核酸来源于包含细胞的样品，并且所述方法包括在所述接触步骤之前处理所述细胞以将细胞内组分释放到所述溶液中。

114、实施方式80是根据实施方式79所述的方法，其中处理包括用洗涤剂处理所述样品。

115、实施方式81是根据实施方式79或实施方式80所述的方法，其中所述样品来自动物、环境、食物或工业来源。

116、实施方式82是根据实施方式79到81中任一项所述的方法，其中所述样品包括外周血、血清、血浆、脑脊髓液、痰、尿液或拭子标本。

117、实施方式83是根据实施方式79至82中任一项所述的方法，其中所述样品包括细胞裂解物。

118、实施方式84是根据实施方式65至74中任一项所述的反应混合物，或根据实施方式75至83中任一项所述的方法，其中所述靶核酸包括dna和/或rna。

119、实施方式85是根据实施方式65至74中任一项所述的反应混合物，或根据实施方式75至83中任一项所述的方法，其中所述靶核酸包括病毒核酸、原核核酸、真核核酸、合成核酸或其组合。

120、实施方式86是一种试剂盒，包括：

121、(a)包括前述实施方式中任一项所述的捕获混合物的第一组分；和

122、(b)包括氢氧化锂的第二组分。

123、实施方式87是一种试剂盒，包括：

124、(a)包括预混制剂的第一组分，其中所述预混制剂包括前述实施方式中任一项所述的捕获混合物，所述预混制剂不包括蛋白酶k，并且当所述制剂包括水时，组分以1.3倍的所列溶液浓度存在；

125、(b)包括氢氧化锂的第二组分；以及

126、(c)包括蛋白酶k的第三组分。

127、实施方式88是根据实施方式85或实施方式87所述的试剂盒，其中所述第二组分包括浓度为约0.8m-3.5m，或约1.0m-2.75m，或约1.25m-2.5m，或约1.5m-2.0m，或约1.6m-1.8m，或约1.68m的氢氧化锂。

128、实施方式89是根据实施方式87或实施方式88所述的试剂盒，其中所述第三组分包括浓度为约4.5-20mg/ml，或约4.5-18mg/ml，或约5-15mg/ml，或约8-10mg/ml，或约9mg/ml的蛋白酶k，并且所述蛋白酶k具有约12.5-50u/ml，或约20-30u/ml，或约25u/ml的比活性。