一种用于皮肤修复的药物组合物的制作方法

本技术涉及生物领域，具体的涉及一种用于皮肤修复的药物组合物。

背景技术：

1、肿瘤细胞增殖失控是恶性肿瘤的特征，而细胞周期调控的紊乱是其增殖失控的生物学基础。细胞周期是真核生物在进化中所保留的一个基本生命过程，它调控从包括酵母在内的简单单细胞生物到高等多细胞生物(人类)的细胞分裂。细胞周期分为4个不同的阶段，包括两个细胞分裂间期(g1和g2)，s期(dna合成期)以及m期(有丝分裂期)。在s期，遗传物质被复制，然后在m期之后分离成为两个相同的子细胞。s期和m期由g1和g2两个间期分隔开，细胞在两个间期进行准备，而后进入s期和m期。细胞周期是通过细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependentkinases,cdks)家族与特异性的细胞周期蛋白(cyclins)结合形成cyclins-cdk激酶复合体而协同调节的。其中cdk为催化亚基，cyclin为激活亚基。基于cdks在细胞周期调控中的重要角色，其调控失衡会诱发细胞癌变，因而，cdks在临床诊疗上具有一定的的生物学意义。例如，可由cdk1在细胞核与细胞浆中的表达量之比偏高推测结直肠癌患者的预后较差。此外，p57/kip2作为多种cyclin-cdk复合物的抑制剂，已被证实可作为一种肿瘤抑制物。对cdk2的研究发现其可通过内质网应激介导顺铂诱导的细胞凋亡。同时，一系列用于胃肠癌、乳腺癌和白血病并针对cdks的靶向药物在进行临床试验。

2、在人类基因组中，cdks由21个基因所编码，而另有5个基因编码一组远源蛋白，这组蛋白被称为细胞周期蛋白依赖性激酶样激酶(cdkl)，作为cdk家族的一个独立分支。cdkl家族由5个成员组成(cdkl1～cdkl5)，如图1-2所示，其中cdkl1主要在人的脑，肺，肾和卵巢中表达。cdkl1基因定位于染色体14q21.3上，也被称为p42或kkialre，其所编码的蛋白激酶具有和cdk1相近的丝氨酸/苏氨酸结构域。

3、已有研究表明cdkl1的表达水平与癌症有关联，在2012-2015期间先后有文献报道cdkl1在乳腺癌组织、胃癌组织以及黑色素瘤中表达上调。其中，唐金海课题组的研究表明，对乳腺癌mcf-7细胞中cdkl1的功能进行抑制，可使细胞在g2/m期明显累积，同时细胞对化疗药物的敏感性也会增加。孙威课题组的研究指出，对胃癌细胞sgc7901和mgc-803中的cdkl1进行抑制，会减缓癌细胞增殖并促使其凋亡。与此同时，抑制cdkl1后会刺激促凋亡蛋白bik的活化,并使增殖细胞核抗原(pcna)的表达降低。此外，对于黑色素瘤的研究中也有报道通过cdkl1进行rna介导的下调，进而抑制细胞生长并促使细胞凋亡的结果。cdkl1可能在乳腺癌紫杉醇耐药中发挥作用。与正常组织相比，cdkl1蛋白在结直肠癌组织中高表达。敲减结肠癌细胞hct116和caco2细胞中cdkl1蛋白的表达量，可显著抑制结肠癌细胞的增殖、侵袭以及由g1期向s期过渡。但是cdkl1在肿瘤细胞周期调控中的功能和其相关信号通路依然不明确。

4、目前研究表明，采用sirna cdkl1转染至黑色素瘤a375和mv3细胞，经细胞增殖和克隆形成实验等检测发现，敲除cdkl1基因后黑色素瘤细胞的生长和集落形成能力受到抑制，细胞阻滞于g1期，复制能力下降，凋亡明显增加。利用rnai技术构建sirna cdkl1慢病毒载体感染结肠癌细胞dld-1和sw480，可显著抑制cdkl1 mrna及蛋白的表达，上述细胞株内cdkl1受到敲减和沉默后，dld-1和sw480细胞增殖受到明显抑制，克隆形成率明显下降，细胞周期阻滞于gl期，侵袭能力减弱。本研究结果提示cdkl1基因具有促使结直肠癌肿瘤细胞增殖和侵袭的功能，可作为结肠癌治疗的潜在作用靶点。但是目前，针对cdkl1抑制的药物种类还不够多，可供选择的品种也不够丰富，有待进一步的研究。

技术实现思路

1、本发明针对cdkl1提供了一种特异性的具有抑制活性的单克隆抗体。

2、具体的，本发明的单克隆抗体通过委托普健生物进行测序，所述的单克隆抗体的轻链可变区序列如seq id no：1所示，重链可变区序列如seq id no：2所示。

3、具体的，本发明的单克隆抗体具有较好的抑制cdkl1蛋白表达的活性，优选的，抑制cdkl1蛋白99％的表达活性，抑制cdkl1蛋白98％的表达活性，抑制cdkl1蛋白97％的表达活性，抑制cdkl1蛋白96％的表达活性，抑制cdkl1蛋白95％的表达活性，抑制cdkl1蛋白94％的表达活性，抑制cdkl1蛋白93％的表达活性，抑制cdkl1蛋白92％的表达活性，抑制cdkl1蛋白91％的表达活性，抑制cdkl1蛋白90％的表达活性，抑制cdkl1蛋白89％的表达活性，抑制cdkl1蛋白88％的表达活性，抑制cdkl1蛋白87％的表达活性，抑制cdkl1蛋白86％的表达活性，抑制cdkl1蛋白85％的表达活性，抑制cdkl1蛋白84％的表达活性，抑制cdkl1蛋白83％的表达活性，抑制cdkl1蛋白82％的表达活性，抑制cdkl1蛋白81％的表达活性，抑制cdkl1蛋白80％的表达活性，抑制cdkl1蛋白79％的表达活性，抑制cdkl1蛋白78％的表达活性，抑制cdkl1蛋白77％的表达活性，抑制cdkl1蛋白76％的表达活性，抑制cdkl1蛋白75％的表达活性，抑制cdkl1蛋白74％的表达活性，抑制cdkl1蛋白73％的表达活性，抑制cdkl1蛋白72％的表达活性，抑制cdkl1蛋白71％的表达活性，抑制cdkl1蛋白70％的表达活性，抑制cdkl1蛋白69％的表达活性，抑制cdkl1蛋白68％的表达活性，抑制cdkl1蛋白67％的表达活性，抑制cdkl1蛋白66％的表达活性，抑制cdkl1蛋白65％的表达活性，抑制cdkl1蛋白64％的表达活性，抑制cdkl1蛋白63％的表达活性，抑制cdkl1蛋白62％的表达活性，抑制cdkl1蛋白61％的表达活性，抑制cdkl1蛋白60％的表达活性，抑制cdkl1蛋白59％的表达活性，抑制cdkl1蛋白58％的表达活性，抑制cdkl1蛋白57％的表达活性，抑制cdkl1蛋白56％的表达活性，抑制cdkl1蛋白55％的表达活性，抑制cdkl1蛋白54％的表达活性，抑制cdkl1蛋白53％的表达活性，抑制cdkl1蛋白52％的表达活性，抑制cdkl1蛋白51％的表达活性，抑制cdkl1蛋白50％的表达活性，抑制cdkl1蛋白49％的表达活性，抑制cdkl1蛋白48％的表达活性，抑制cdkl1蛋白47％的表达活性，抑制cdkl1蛋白46％的表达活性，抑制cdkl1蛋白45％的表达活性。

4、具体的，本技术提供了治疗癌症的药物组合物，所述药物组合物含有本发明的cdkl1单克隆抗体。

5、具体的，所述的药物组合物还含有药学上可接受的载体。

6、本发明的组合物还可以与常用赋形剂混合而使用，所述的常用赋形剂即药物上可接受的适合于非肠道、肠道(例如口服或吸入)或局部施用的有机或无机载体物质，它们不与活性组合物发生有害反应。合适的药物上可接受的载体包括但不限于：水；盐溶液；醇类；阿拉伯树胶；植物油；苄醇类；聚乙二醇类；明胶；碳水化合物，诸如乳糖、直链淀粉或淀粉；硬脂酸镁；滑石；硅酸；粘性石蜡；芳香油；脂肪酸酯类；羟甲基纤维素；聚乙烯吡咯烷酮等。可以对药物制剂灭菌且如果需要，将其与助剂混合，例如润滑剂、防腐剂、稳定剂、湿润剂、乳化剂、影响渗透压的盐、缓冲剂、着色剂、调味剂和/或芳香物质等，它们不与活性组合物发生有害反应。如果需要，还可以将它们与其它活性剂合并，例如维生素。在具体的实施方案中，所述的液体载体还可以含有增稠剂，例如蜂蜡、硬石蜡或鲸蜡醇。作为可选的添加剂注意到的还有苄醇类、聚乙二醇类、粘性石蜡、芳香油和脂肪酸酯类。

7、本发明的组合物中所使用的赋形剂是现有技术中常见的并且药学领域技术人员已知的那些赋形剂。非限制性实例包括抗氧化剂、甜味剂、防腐剂、遮色剂(opacifier)、润滑剂、崩解剂、稀释剂及其组合。

8、防腐剂可以选自苯甲酸钠、山梨酸钾、苄醇、对羟基苯甲酸酯(羟基苯甲酸)，例如对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯等，及其组合。

9、抗氧化剂可以选自乙酰半胱氨酸生育酚、α-生育酚、d-α-生育酚、dl-α-生育酚、抗坏血酸棕榈酸酯、丁基羟基茴香醚(bha)、丁基羟基甲苯(bht)、卵磷脂、半胱氨酸、半胱氨酸盐酸盐、没食子酸丙酯、抗坏血酸、异抗坏血酸、硫代甘油、柠檬酸、酒石酸、edta及其盐、羟基喹啉硫酸盐、磷酸、焦亚硫酸钠和柠檬酸钠、叔丁基氢醌(tbhq)及其组合。

10、甜味剂可以选自三氯蔗糖、糖精、糖精钠、甜蜜素、山梨醇、木糖醇、蔗糖、甘油、新橙皮苷、阿斯巴甜及其组合。

11、崩解剂可以选自交联聚维酮、交联羧甲基纤维素、羧甲基淀粉、聚丙烯酸钾(polyacrylinpotassium)、羟丙基纤维素、微晶纤维素或其组合。

12、润滑剂可以选自硬脂酸镁、硬脂富马酸钠、硬脂酸、柠檬酸钠或其组合。

13、进一步的，本发明还提供了抑制cdkl1活性的单克隆抗体在制备用于治疗癌症的药物组合物中的用途。

14、进一步的，所述的癌症为高表达cdkl1的癌症。

15、具体的，其中所述癌为黑色素瘤或其他实体或血液肿瘤，如黑色素瘤、急性骨髓性白血病、乳腺癌、胆管癌、脑癌、慢性淋巴细胞性白血病、结直肠癌、食管癌、胆囊癌、胃癌、肝细胞癌、非霍奇金淋巴瘤、非小细胞肺癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肾细胞癌、小细胞肺癌、膀胱癌和子宫癌。

16、有益效果

17、本技术依据cdkl1的生物学功能特性，针对该靶点设计并获得了相应的单克隆抗体，该单克隆抗体具有较好的抑制癌细胞克隆生成以及抑制细胞周期和细胞中cdkl1蛋白的活性，可以用于制备治疗癌症的药物。