一种具有抗痤疮作用的冠突散囊菌发酵制剂及其应用的制作方法

本发明涉及化妆品及护肤品领域，具体涉及一种具有抗痤疮作用的冠突散囊菌发酵制剂及其在化妆品、护肤品中的应用。

背景技术：

1、痤疮是毛囊皮脂腺单位的一种慢性炎症性皮肤病，主要好发于青少年，对青少年的心理和社交影响很大，但青春期后往往能自然减轻或痊愈。临床表现以好发于面部的粉刺、丘疹、脓疱、结节等多形性皮损为特点。

2、痤疮的发生主要与皮脂分泌过多、毛囊皮脂腺导管堵塞、细菌感染和炎症反应等因素密切相关。进入青春期后人体内雄激素特别是睾酮的水平迅速升高，促进皮脂腺发育并产生大量皮脂。同时毛囊皮脂腺导管的角化异常造成导管堵塞，皮脂排出障碍，形成角质栓即微粉刺。毛囊中多种微生物尤其是痤疮丙酸杆菌大量繁殖，痤疮丙酸杆菌产生的脂肪酶分解皮脂生成游离脂肪酸，同时趋化炎症细胞和介质，最终诱导并加重炎症反应。

3、另一方面，冠突散囊菌是从黑茶中分离的一种益生菌，其在茶叶中形成大量金黄色闭囊壳，因此又名“金花菌”。冠突散囊菌分泌的多糖等代谢产物对人体微生物菌群的稳定及减肥降脂、抗氧化方面有明显的功效。李佳莲等研究表明，冠突散囊菌发酵液对细菌、特别是革兰氏阴性菌有明显抑制作用(李佳莲,胡博涵,赵勇彪,刘素纯,姜越君,刘仲华.冠突散囊菌发酵液的抑菌作用[j].食品科学,2011,32(11):157-160)。

4、目前，对于冠突散囊菌的研究主要集中在普通食品、功能饮品及保健食品领域，而关于冠突散囊菌在化妆品或护肤品中的应用研究较为少见。

技术实现思路

1、鉴于现有技术中上述情况，本发明的目的在于提供一种具有抗痤疮作用的冠突散囊菌发酵制剂及其在化妆品、护肤品中的应用。

2、本发明经过深入研究发现：1.冠突散囊菌具有治疗痤疮的效果；2.对痤疮丙酸杆菌生长抑制作用更强的冠突散囊菌发酵液并非治疗痤疮的效果更好；3.冠突散囊菌治疗痤疮的机制还包括通过抑制脂肪酶分解甘油三酯的活性减少脂肪酸的产生，从而减轻或消除炎症反应。

3、基于上述发现，发明人筛选出了对痤疮丙酸杆菌生长抑制作用强且对脂肪酶分解甘油三酯的活性抑制作用也强的冠突散囊菌菌株，并验证了该冠突散囊菌菌株的制剂具有良好的治疗痤疮的效果，从而完成了本发明。

4、即，本发明包括：

5、1.一种冠突散囊菌菌株，其保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号是cgmcc no.40472。

6、2.将项1所述的冠突散囊菌菌株发酵制备的制剂。

7、3.项2所述的制剂，其为固态发酵孢子制剂、液态发酵菌丝制剂或液态发酵上清制剂。

8、上述冠突散囊菌的液态发酵菌丝制剂可以通过如下制备方法进行制备，包括：

9、(1)菌种活化：将-20℃保存的冠突散囊菌菌种接种至pda固体培养基上，28-30℃条件下培养培养120-144h得到活化后冠突散囊菌单菌落。

10、(2)冠突散囊菌种子液：将步骤(1)得到的冠突散囊菌单菌落，在超净工作台中转接于液体种子培养基中，进行冠突散囊菌的液体种子培养，其中，培养基按质量体积比为：蔗糖15g/l、蛋白胨2g/l、酵母提取物10g/l、kh2po4 2g/l，ph5.0-5.5，转接过程主要是利用灭菌的竹签从装有活化后的冠突散囊菌试管中，接种于装有200ml培养基的500ml摇瓶中，置于28-30℃的摇床中培养96-120h，获得冠突散囊菌液体种子。

11、(3)冠突散囊菌发酵：将步骤(2)得到的冠突散囊菌液体种子按照8％-10％的接种量接种于10l含有液体发酵培养基(蔗糖或葡萄糖浓度为10-80g/l，优选20-30g/l；玉米浆干粉浓度为2-15g/l，优选3-5g/l；蛋白胨浓度为2-10g/l，优选3-6g/l；酵母提取物浓度为2-10g/l，优选3.0-5.5g/l；kh2po4浓度为1-8g/l，优选1.2-2.5g/l；mgso4·7h2o浓度为2.0-7.5g/l，优选1.5-2.2g/l；(nh4)2so4浓度为2.5-8.0g/l，优选4.0-5.5g/l，植物提取液10-100ml/l，优选34.2-85ml/l，可以是例如黑茶提取液、绿茶提取液、葡萄籽提取液、青蒿提取物液中的至少一种)，培养温度为28-30℃，ph5.0-5.5，转速为100-500rpm，通气量为5-20l/min，溶氧控制在20-40％，培养65-72h，当发酵液变红，菌丝量不再增加时停止发酵。

12、(4)发酵产物收集：将步骤(3)得到发酵液通过8层纱布进行过滤处理，分别收集发酵产物中的菌丝和上清液。将菌丝利用蒸馏水清洗3-5次后尽可能多的除掉水分，然后，将菌丝置于60-65℃干燥培养箱中进行干燥处理24h-48h，获得干燥处理后的冠突散囊菌菌丝。将分离后的上清液经过滤后进行收集。

13、(5)菌丝胞内物质提取：将步骤(4)得到的烘干菌丝进行粉碎，过100目筛后，通过高压均质机进行破壁，将胞内有效成分释放。添加一定量的纯化水，按照料液比(g:ml)为1:18-25提取，提取温度为95℃，提取时间为2h，两次提取。

14、(6)粗纯：将步骤(5)得到的提取物进行除色素(例如可采用硅藻土吸附、活性炭吸附、葡聚糖凝胶吸附中的至少一种)，再将除色后的提取液经0.45μm过滤膜过滤后得到冠突散囊菌液态发酵制剂。

15、4.一种化妆品或护肤品或药物，其包含项1所述的冠突散囊菌菌株或项2所述的制剂。

16、5.根据项4所述的化妆品或护肤品或药物，其用于预防或治疗痤疮。

17、6.一种预防或治疗痤疮的方法，其包括给受试者施用项4所述的化妆品或护肤品或药物。所述受试者可以是例如猫、犬或人。

18、7.项1所述的冠突散囊菌或项2所述的制剂在制备化妆品或护肤品或药物中的用途。

19、8.根据项7所述的用途，其中，所述化妆品或护肤品或药物用于预防或治疗痤疮。

20、9.根据项7所述的用途，其中，所述化妆品或护肤品或药物被制备成适合施用于皮肤的形式。例如，喷雾剂、搽剂、膏剂、敷料、乳剂等。

21、发明的效果

22、本发明的冠突散囊菌菌株的痤疮丙酸杆菌生长抑制作用、以及脂肪酶分解甘油三酯活性抑制作用均强，将该冠突散囊菌菌株发酵制备的制剂具有良好的治疗痤疮的效果。

技术特征：

1.一种冠突散囊菌菌株，其保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号是cgmcc no.40472。

2.将权利要求1所述的冠突散囊菌菌株发酵制备的制剂。

3.权利要求2所述的制剂，其为固态发酵孢子制剂、液态发酵菌丝制剂或液态发酵上清制剂。

4.一种化妆品或护肤品或药物，其包含权利要求1所述的冠突散囊菌菌株或权利要求2所述的制剂。

5.根据权利要求4所述的化妆品或护肤品或药物，其用于预防或治疗痤疮。

6.权利要求1所述的冠突散囊菌或权利要求2所述的制剂在制备化妆品或护肤品或药物中的用途。

7.根据权利要求6所述的用途，其中，所述化妆品或护肤品或药物用于预防或治疗痤疮。

8.根据权利要求6所述的用途，其中，所述化妆品或护肤品或药物被制备成适合施用于皮肤的形式。

技术总结
本专利申请公开了一种具有抗痤疮作用的冠突散囊菌发酵制剂及其应用。所述散囊菌发酵制剂是将保藏编号为CGMCC No.40472的冠突散囊菌菌株发酵而制备的制剂。冠突散囊菌菌株CGMCC No.40472的痤疮丙酸杆菌生长抑制作用、以及脂肪酶分解甘油三酯活性抑制作用均强，将该冠突散囊菌菌株发酵制备的制剂具有良好的治疗痤疮的效果。

技术研发人员：范代娣,徐茹,宇文伟刚,段志广,严建亚,常海燕
受保护的技术使用者：西安巨子生物基因技术股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13