一种检测G3型猪博卡病毒检测试剂盒

本发明涉及一种用于检测某种病毒的检测试剂盒，确切讲本发明是一种用于检测g3型猪博卡病毒的试剂盒。

背景技术：

1、博卡病毒（ bocavirus）属于细小病毒科（ parvoviridae）细小病毒亚科（ parvovirinae）博卡病毒属（ bocavirus），分为两个亚种：牛细小病毒（ bovine  parvovirus）与犬微小病毒（ canine minutevirus）。2009年，瑞典科学家首次运用随机多重置换扩增方法在pmws(断奶仔猪多系统衰竭综合征)的患病猪淋巴结中扩增出了一段长为1879bp的基因序列，并经过高通量测序技术发现其完整的np1基因及部分vp基因并将其命名为猪博卡病毒（blomstrom al, et al.2009）。猪博卡病毒是单链线性无囊膜dna病毒，基因组大小为4786～5905bp。基因组编码3个开放阅读( orf )，orf1阅读框在5’末端，编码非结构蛋白ns1，该蛋白在病毒基因组的复制过程中起到重要作用（乔涵等，2015）。orf2阅读框位于3’末端编码2个衣壳蛋白vp1和vp2，他们是病毒主要的抗原蛋白（lupescu a,etal.2006）。orf3阅读框位于病毒基因组的中间，编码磷酸化的非结构蛋白np1（sun y,etal.2009）。

2、2012年，yang等将所发现的pbov毒株划分为了3个基因群pbovg1、pbovg2和pbovg3，该方法弥补了之前分型方法的不足，可将所有的pbov毒株划分在内，且同种群毒株之间相似度高。2013 年国际病毒分类委员会（ictv）将猪博卡病毒分为pbov2、pbov3、pbov4、pbov5，共4个种群。2015年，国内学者陈如敬等基于vp1基因将猪博卡病毒分为g1、g2、g3，3个基因群。目前将猪博卡病毒划分为 3个大的种群（g1、g2、g3）的分型研究被国内外学者所接受，应用较为广泛的。

3、根据相关研究报道，pbov感染猪后可引起仔猪发生腹泻，同时也会引起其发生呼吸道系统疾病，并具有高发病率和死亡率。其发病特点与感染猪的年龄密切相关，日龄较小的猪群更容易感染。研究表明，目前我国流行的猪博卡病毒基因型主要为pbov g3。

4、猪博卡病毒在全基因扩增、流行病学等方面已经取得了较大进展，但是在病毒分离、致病性等方面的研究还比较薄弱。针对猪博卡病毒的病原学检测方法主要有常规pcr、nanopcr、实时荧光定量pcr（sybrgreenⅰ和

5、 taq

6、man探针）和lamp等。中国专利申请cn105219887a、cn105803114a 、cn105755176a分别公开了猪博卡病毒检测技术。但是它们都是针对g3基因型几条毒株的基因序列，不具有检测g3基因型毒株的广谱性。因此有必要开发出一种具有广谱性检测猪博卡病毒g3基因型毒株的实时荧光定量pcr快速检测试剂盒，在准确检测和疾病防控等方面具有重要的应用前景。

技术实现思路

1、本发明提供一种操作简单快速、特异性强、敏感性高的检测猪博卡病毒g3基因群的检测试剂盒。

2、本发明的一种检测g3型猪博卡病毒的检测试剂盒是一种taqman荧光定量pcr检测试剂盒，试剂盒内至少有序列为seq id no.1、seq id no.2的引物对和序列为seq id no.3的探针。

3、本发明检测试剂盒具有使用简便快捷、检测特异性强、敏感性高、结果判断容易，可以用于猪博卡病毒的诊断、流行病学和分子生物学研究等多个领域的优点。

技术特征：

1.一种检测g3型猪博卡病毒taqman荧光定量pcr检测试剂盒，其特征在于试剂盒内至少有序列为seq id no.1、seq id no.2的引物对和序列为seq id no.3的探针。

2.根据权利要求1所述的检测g3型猪博卡病毒taqman荧光定量pcr检测试剂盒，其特征在于试剂盒内还有pcr缓冲液、dntp、taq酶和双蒸水。

技术总结
本发明公开一种检测G3型猪博卡病毒的TaqMan荧光定量PCR检测试剂盒，试剂盒内至少有序列为SEQ ID No.1、SEQ ID No.2的引物对和序列为SEQ ID No.3的探针。本发明检测试剂盒具有使用简便快捷、检测特异性强、敏感性高、结果判断容易，可以用于猪博卡病毒的诊断、流行病学和分子生物学研究等多个领域的优点。

技术研发人员：付钰广,刘光亮,弓超,李宝玉
受保护的技术使用者：中国农业科学院兰州兽医研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13