一种表达荧光素酶基因的发热伴血小板综合征病毒及其应用

本发明涉及生物领域，具体而言，涉及一种表达荧光素酶基因的发热伴血小板综合征病毒及其应用。

背景技术：

1、发热伴血小板综合征病毒(severe fever with thrombocytopeniasyndrome，sftsv)，主要以发热，胃肠道症状、血小板减少为主要临床表现的感染性病例，少数患者因多器官衰竭死亡的情况。sftsv的主要宿主是蜱虫，该病毒在中国中东部湖北、河南、浙江、山东等地以及日本和韩国流行。主要感染中老年人，感染后会出现高热、厌食、肌肉痛、寒战、淋巴结肿大、血小板减少等症状。

2、目前缺乏针对sftsv的特异性治疗药物，只能进行广谱抗病毒治疗和对症下药，这为sfts的预防和控制带来极大的困难。由于平常的药物筛选是通过sftsv的活病毒进行药物筛选，耗时长，成本大。

3、鉴于此，特提出本发明。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供了一种表达荧光素酶基因的发热伴血小板综合征病毒及其应用。

2、本发明是这样实现的：

3、第一方面，本发明实施例提供了一种dna片段，其包括：插入有荧光素酶基因的发热伴血小板综合征重组病毒的s片段的cdna，所述荧光素酶基因的插入位点为：所述s片段的cdna中nss蛋白编码序列的n端与3’utr之间。

4、第二方面，本发明实施例提供了一种重组载体，其含前述实施例所述的dna片段。

5、第三方面，本发明实施例提供了一种质粒组合，其包括：前述实施例所述的重组载体。

6、第四方面，本发明实施例提供了一种宿主细胞，其含有如前述实施例所述的dna片段或前述实施例所述的重组载体或前述实施例所述的质粒组合。

7、第五方面，本发明实施例提供了一种表达荧光素酶基因的发热伴血小板综合征重组病毒的构建方法，其包括：将前述实施例所述的重组载体或前述实施例所述的质粒组合转染宿主细胞，培养后，筛选获得表达荧光素酶基因的发热伴血小板综合征重组病毒。

8、第六方面，本发明实施例提供了一种表达荧光素酶基因的发热伴血小板综合征重组病毒，其由如前述实施例所述的构建方法构建获得。

9、第七方面，本发明实施例提供了如前述实施例所述的dna片段或如前述实施例所述的重组载体或如前述实施例所述的质粒组合或如前述实施例所述的表达荧光素酶基因的发热伴血小板综合征重组病毒在筛选发热伴血小板综合征的抗病毒药物中的应用，所述应用不以疾病的诊断或治疗为直接目的。

10、本发明具有以下有益效果：

11、本发明提供一种新的表达荧光素酶基因的sftsv重组病毒，可以优化sftsv药物筛选的时间，并在体外与体能展示抗病毒药物的作用效果。为抗sftsv的药物研发提供便利。

技术特征：

1.一种dna片段，其特征在于，其包括：插入有荧光素酶基因的发热伴血小板综合征重组病毒的s片段的cdna，所述荧光素酶基因的插入位点为：所述s片段的cdna中nss蛋白编码序列的n端与3’utr之间。

2.根据权利要求1所述的dna片段，其特征在于，所述荧光素酶基因为nluc基因、gfp基因、rfp基因、rluc基因和fluc基因中的任意一种或多种；

3.根据权利要求1或2所述的dna片段，其特征在于，所述dna片段还包括连接序列，所述荧光素酶基因通过所述连接序列与nps蛋白序列的n端相连；

4.根据权利要求3所述的dna片段，其特征在于，所述插入有荧光素酶基因的发热伴血小板综合征重组病毒的s片段的cdna的核苷酸序列如seq id no:3所示。

5.一种重组载体，其特征在于，其含权利要求1～4任一项所述的dna片段；

6.一种质粒组合，其特征在于，其包括：权利要求5所述的重组载体；

7.一种宿主细胞，其特征在于，其含有如权利要求1～4任一项所述的dna片段或权利要求5所述的重组载体或如权利要求6所述的质粒组合。

8.一种表达荧光素酶基因的发热伴血小板综合征重组病毒的构建方法，其特征在于，其包括：将权利要求5所述的重组载体或权利要求6所述的质粒组合转染宿主细胞，培养后，筛选获得表达荧光素酶基因的发热伴血小板综合征重组病毒。

9.一种表达荧光素酶基因的发热伴血小板综合征重组病毒，其特征在于，其由如权利要求8所述的构建方法构建获得。

10.如权利要求1～4任一项所述的dna片段或如权利要求5所述的重组载体或如权利要求6所述的质粒组合或权利要求7所述的宿主细胞或如权利要求9所述的表达荧光素酶基因的发热伴血小板综合征重组病毒在筛选发热伴血小板综合征的抗病毒药物中的应用，所述应用不以疾病的诊断或治疗为直接目的。

技术总结
本发明公开了一种表达荧光素酶基因的发热伴血小板综合征病毒及其应用，涉及生物领域，本发明将Nluc报告基因连入与SFTSV基因组NSs蛋白编码N端，构成Nluc报告基因标记的病毒基因组，该报告基因的插入不影响病毒翻译后的蛋白加工修饰，产生的Nluc蛋白也不影响子代病毒颗粒的组装。转染宿主细胞拯救出表达Nluc的重组SFTSV，该病毒可以高效表达Nluc基因，生长曲线与野生型病毒株相似，插入的Nluc基因在连续传代中较为稳定，可用于小鼠酶活成像系统建立快速高通量的抗病毒药物筛选技术或平台，为活体动物成像、药物筛选、药物作用机制及疫苗评价等提供广泛的应用价值。

技术研发人员：张磊砢,曹浚垣,徐欢,尚卫娟,肖庚富,温宇稀
受保护的技术使用者：中国科学院武汉病毒研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15