一种抗凝血肽及其在抗凝血产品上的应用的制作方法

本申请涉及枯草芽孢杆菌，尤其涉及枯草芽孢杆菌纳豆亚种r3及其在发酵抗凝血肽中的应用。

背景技术：

1、纳豆芽孢杆菌(bacillus natto)属芽孢杆菌科、纳豆芽孢杆菌属，是纳豆的生产菌种，目前已有2000多年的食用历史。纳豆菌在发酵过程中能够分解蛋白质、碳水化合物、脂肪等大分子物质，因而纳豆菌发酵的产品中含有大量的氨基酸、寡聚糖、有机酸等容易被人体消化吸收的营养成分。纳豆菌(bacillus natto)是“公认安全”(gras)的微生物，发展和研究纳豆菌发酵制品在抗肿瘤、降血压、抗氧化、溶血栓的保健作用具有非常现实的意义。

技术实现思路

1、有鉴于此，本申请的目的在于提供一种枯草芽孢杆菌纳豆亚种，以开放其实际的应用场景和领域。

2、第一方面，本申请实施例公开了一种枯草芽孢杆菌纳豆亚种，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc no.21709，命名为枯草芽孢杆菌bacillus subtilis subsp.natto r3，保藏日期为2021年01月25，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

3、第二方面，本申请实施例公开了所述的枯草芽孢杆菌纳豆亚种在发酵水蛭低温干燥品中的应用。

4、第三方面，本申请实施例公开了所述的枯草芽孢杆菌纳豆亚种在制备抗凝血制品中的应用。

5、第四方面，本申请实施例公开了所述的枯草芽孢杆菌纳豆亚种在制备降血压制品中的应用。

6、第五方面，本申请实施例公开了所述的枯草芽孢杆菌纳豆亚种发酵水蛭低温干燥品的方法，包括以下步骤：

7、配制种子培养液和发酵培养液，所述种子培养液包含1～8wt％水蛭低温干燥品，所述发酵培养液包含1～5wt％水蛭低温干燥品；

8、制备种子悬液，所述种子悬液由保藏的枯草芽孢杆菌纳豆亚种进行菌种活化后，接种于所述种子培养液中进行培养得到；

9、获得发酵液，所述发酵液是将所述种子悬液转接至所述发酵培养液中，于34～45℃、150～180rpm搅拌条件下通气发酵，空气量与罐容积之比为1：0.5～1(v/v.m)，发酵36～72h得到；

10、得到干燥制品，所述干燥制品由所述发酵液进行纯化得到。

11、本申请实施例中，所述种子培养液还包含0.5～2g/l纳豆、1.5～3g/l脱脂奶粉、0.5g/l牛肉膏、15g/l蛋白胨和5g/l nacl，所述种子培养液的ph为7.0～7.2；

12、所述发酵培养液还包含0.5～1.5g/l纳豆、10g/l葡萄糖、1.5～3g/l脱脂奶粉、0.5g/l牛肉膏、15g/l蛋白胨和5g/l nacl，所述发酵培养液的ph为7.0～7.2。

13、在本申请实施例中，所述纯化处理包括：

14、浸提：将向发酵液中加入5倍体积的水，于85℃以上条件下充分浸提6～8h，离心取上清液；

15、超滤：先用5kd中空纤维柱处理后，收集浓缩液，低温干燥(或冻干)，即可得到干燥制品，-20℃保存。

16、本申请实施例中，所述干燥制品包括抗凝血肽和降血压肽。

17、与现有技术相比，本申请至少具有以下有益效果：

18、本申请实施例通过的由纳豆作为筛选来源，经由初筛、复筛和终筛，并在复筛中使用了脉冲光辐射处理，经过鉴定，最终筛选得到一种枯草芽孢杆菌纳豆亚种r3，通过溶酶实验和ace活性检测，发现其同时具有抗凝血和抑制ace酶活性，而常规的枯草芽孢杆菌纳豆亚种并不同时具有此两种活性。

19、进一步的，本申请还通过r3菌株发酵水蛭低温干燥品，得到一种干燥制品，经过鉴定发现其中包含两种活性多肽，分别对应产生抗凝血和抑制ace酶活性的作用，并经过动物实验验证了利用r3发酵水蛭低温干燥品得到的干燥制品同时具有对缺血再灌注脑损伤大鼠具有保护作用，和降低sihr大鼠的血压水平。由此，说明本申请实施例还提供了将r3菌株应用在制备抗凝血制品、或者制备降血压制品的应用前景。

技术特征：

1.一种抗凝血肽，其特征在于，其氨基酸序列如seq id no.4所示。

2.权利要求1所述的抗凝血肽的生产方法。

3.权利要求2所述的抗凝血肽的生产方法，其特征在于，使用枯草芽孢杆菌纳豆亚种(bacillus subtilis subsp.natto)r3进行发酵制备，枯草芽孢杆菌纳豆亚种r3保藏日期为2021年01月25，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

4.权利要求3所述的抗凝血肽的生产方法，其特征在于，包括以下步骤：

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述种子培养液还包含0.5～2g/l纳豆、1.5～3g/l脱脂奶粉、0.5g/l牛肉膏、15g/l蛋白胨和5g/l nacl，所述种子培养液的ph为7.0～7.2；

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述纯化处理包括：

7.权利要求1所述的抗凝血肽在抗凝血制品上的应用。

技术总结
本申请公开了一种抗凝血肽及其在抗凝血产品上的应用。一株菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.21709，分类命名为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis subsp.natto R3，保藏日期为2021年01月25，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。该菌株R3同时具有抗凝血和抑制ACE酶活性，并能发酵水蛭低温干燥品产生两种活性多肽，通过动物实验证实了其对缺血再灌注脑损伤大鼠具有保护作用和降低SIHR大鼠血压的作用，具有制备抗凝血制品、或者制备降血压制品的广泛应用前景。

技术研发人员：吴清
受保护的技术使用者：江西康之康中药科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/2/19