甘蔗叶片DNA的提取方法

本发明属于生物，更具体地，本发明涉及一种甘蔗叶片dna的提取方法。

背景技术：

1、在甘蔗dna的提取过程中，通常采用的方法为：取甘蔗幼嫩叶片0.5cm2左右剪碎，放入1.5mleppendorf管中，加入100μl0.25mol/l的naoh，将此离心管插入沸水中煮30s，取出加入100μl0.25mol/l的hcl和50μl1mol/ltris-hcl(ph8.0)；再将该管放入沸水中孵育2min，室温条件下10000r/min离心2min，取上清2μl直接作为模板进行pcr反应。

2、该方法的不足之处在于：1、衰老甘蔗叶片的体内dna会出现了一定程度的降解，由于没有磨碎样品的步骤，dna从细胞中释放的难度加大，老化叶片扩增出来的条带模糊并且非常微弱，因此，该方法只能提取幼嫩叶片的dna；2、该方法步骤繁琐，费时费力，需要加入两次溶液，增加工作量。

3、目前现有的磨样方法有研钵研磨法以及使用植物组织破碎仪。研钵研磨法缺点在于一次只能处理一个样本，费时费力，且植物组织样品在转移过程中损耗较多；植物组织破碎仪的缺点在于成本较高，操作过程中较危险且对植物样品研磨量有一定的要求。

4、因此，研究一种适用于甘蔗嫩叶及老叶磨碎及提取dna的方法非常有必要。

技术实现思路

1、基于此，本发明的目的在于提供一种甘蔗叶片dna的提取方法。

2、实现上述发明目的的技术方案包括如下。

3、本发明的第一方面，提供了一种甘蔗叶片dna的提取方法，包括以下步骤：

4、(1)、在装有甘蔗叶片的离心管中加入不锈钢珠；

5、(2)、取出与步骤(1)所述离心管大小匹配的离心管架的网格，将步骤(1)所述离心管置于所述网格中，再将所述网格置于液氮中；

6、(3)、上下晃动网格，直至离心管中的甘蔗叶片粉碎；

7、(4)、打开离心管，迅速倒出不锈钢珠，再加入粗提溶液后进行金属浴，离心取上清，即得。

8、本发明的第二方面，提供了上述提取方法提取得到的甘蔗叶片dna。

9、在本发明的甘蔗叶片dna的提取方法中，通过在甘蔗叶片中加入不锈钢珠、以及利用离心管架的可拆卸网格，对甘蔗叶片进行液氮及晃动处理，即可实现甘蔗老叶和新叶的大通量磨碎处理，且无需进行样本转移；再通过开盖一次添加一次粗提溶液，使得提取的dna可以直接用于pcr扩增，扩增条带清晰。本发明的方法简单、通量大、省时省力。

技术特征：

1.一种甘蔗叶片dna的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的甘蔗叶片dna的提取方法，其特征在于，步骤(2)中将所述网格盖上盖子，用橡皮筋固定后，再置于液氮中。

3.根据权利要求2所述的甘蔗叶片dna的提取方法，其特征在于，所述网格置于液氮中1～2min。

4.根据权利要求1所述的甘蔗叶片dna的提取方法，其特征在于，所述网格为36格、72格或100格。

5.根据权利要求1所述的甘蔗叶片dna的提取方法，其特征在于，步骤(1)中加入2～4颗不锈钢珠。

6.根据权利要求1所述的甘蔗叶片dna的提取方法，其特征在于，步骤(3)中所述上下晃动时间为20～40s。

7.根据权利要求1所述的甘蔗叶片dna的提取方法，其特征在于，步骤(4)中所述粗提溶液包括以下浓度的成分：45～55mm naoh，0.8～1.2％tween20，45～55mm tris-hcl，0.8～1.2mm edta。

8.根据权利要求1所述的甘蔗叶片dna的提取方法，其特征在于，步骤(4)中所述金属浴的温度为94℃～96℃，时间为10～20min；和/或所述离心速度为120000rpm～130000rpm，所述离心时间为1min～2min。

9.根据权利要求1～8任一项所述的甘蔗叶片dna的提取方法，其特征在于，步骤(1)中所述甘蔗叶片为甘蔗老叶或甘蔗新叶。

10.权利要求1～9任一项所述的提取方法提取得到的甘蔗叶片dna。

技术总结
本发明公开了一种甘蔗叶片DNA的提取方法，其是在装有甘蔗叶片的离心管中加入不锈钢珠；取出与离心管大小匹配的离心管架的网格，将离心管置于所述网格中，再将所述网格置于液氮中处理后，上下晃动直至甘蔗叶片粉碎；再加入粗提溶液后进行金属浴，离心取上清，即得。本发明的甘蔗叶片DNA的提取方法简单、高效、省时省力，且提取的DNA可以直接用于PCR扩增，扩增条带清晰。

技术研发人员：曾璇,张明永,李暄妍,李泽聪,夏快飞,陈建通
受保护的技术使用者：中国科学院华南植物园
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13