G基因型嵌合腮腺炎病毒减毒株和制备方法及用途与流程

本发明涉及病毒基因工程，具体涉及一种g基因型嵌合腮腺炎病毒减毒株和制备方法及用途。

背景技术：

1、流行性腮腺炎是由腮腺炎病毒(mumps virus，muv)引起的一种急性呼吸道传染病。其主要临床症状为发热、腮腺非化脓性肿痛；部分病理还会继发无菌性脑膜炎、胰腺炎、睾丸炎等；症状严重者可导致伤残或者死亡。当前，疫苗的预防接种仍然是该病的重要有效的预防和控制手段。

2、muv属于副粘病毒科腮腺炎病毒属，包膜rna病毒。其病毒粒子是由其核心的基因组rna与各结构蛋白直接或间接的相互作用形成不规则的球状；病毒粒子的直径因毒株的不同或者培养条件的差异而有显著区别，直径大约100～600nm。其基因组共编码n，p，m，f，hn，sh和l蛋白等结构蛋白。

3、尽管muv只有一个血清性，但是根据其sh基因的不同，muv被分为众多的基因型，包括a、b、c、d、e、f、g、h、i、j、k、l、m和n在内的共计12个。现有的研究发现，全球各地流行的muv具有显著的地域性特点；同时各种不同基因型之间的交叉保护能力不完全一致。

4、每个新的流行型的出现，均会考验对现有疫苗的有效性，为了能够快速获得既能对当前的流行株进行保护，又能对即将来临的流行株进行保护，为此，本发明提供了g基因型嵌合腮腺炎病毒减毒株和制备方法及用途，对g基因型腮腺炎病毒有更优的保护效果。

技术实现思路

1、因此，本发明要解决的第一个技术问题在于提供一种g基因型嵌合腮腺炎病毒减毒株和制备方法及用途，对g基因型腮腺炎病毒有更优的保护效果。

2、为此，本发明提供了如下的技术方案：

3、本发明提供了一种g基因型嵌合腮腺炎病毒减毒株，以腮腺炎病毒减毒株为骨架，将所述腮腺炎病毒减毒株中的血凝素-神经氨酸酶蛋白编码基因hn替换为包含g基因型腮腺炎病毒的血凝素-神经氨酸酶蛋白编码基因hn的核苷酸序列，包含g基因型血凝素-神经氨酸酶蛋白编码基因hn的cdna核苷酸序列具有如下(a)-(c)中的任意一种：

4、(a)具有如seq id no.1所示的核苷酸序列或其互补链；或

5、(b)在(a)中的如seq id no.1所示的核苷酸序列经过取代、缺失或添加至少一个或几个的核苷酸得到的g基因型嵌合腮腺炎病毒减毒株，且可诱发哺乳动物对g基因型腮腺炎病毒的免疫反应；或

6、(c)具有与(a)中的如seq id no.1所示的核苷酸序列同源性≥85％(较佳地≥90％，更佳地≥95％，例如，≥85％、≥86％、≥87％、≥88％、≥89％、≥90％、≥91％、≥92％、≥93％、≥94％、≥95％、≥96％、≥97％、≥98％或≥99％)的核苷酸序列，得到的g基因型嵌合腮腺炎病毒减毒株，且可诱发哺乳动物对g基因型腮腺炎病毒的免疫反应。

7、可选的，所述腮腺炎病毒减毒株为腮腺炎疫苗减毒株qs-f-sh2、qs-f、jeryllyhn、s79、hoshino等腮腺炎疫苗株。

8、可选的，所述g基因型嵌合腮腺炎病毒减毒株的基因组中缺失sh基因。

9、可选的，所述g基因型嵌合腮腺炎病毒减毒株命名为腮腺炎病毒qs-f-sh2-hn[g]，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctccno.v202285，保藏地址为中国.武汉.武汉大学，邮编:430072，保藏日期为2022年12月17日。

10、生物材料，包括如下1)-7)中的任意一种：

11、1)编码所述的g基因型嵌合腮腺炎病毒减毒株的重组dna分子；或

12、2)含有所述的g基因型嵌合腮腺炎病毒减毒株或1)中所述的重组dna分子的表达盒、重组载体、重组微生物或转基因细胞系；或

13、3)含有所述的g基因型嵌合腮腺炎病毒减毒株的重组病毒；或

14、4)含有所述的g基因型嵌合腮腺炎病毒减毒株或其传代培养病毒或3)中所述的重组病毒或其传代培养病毒的疫苗；或

15、5)含有所述的g基因型嵌合腮腺炎病毒减毒株或其传代培养病毒或3)中所述的重组病毒或其传代培养病毒的疫苗组合物；或

16、6)含有所述的g基因型嵌合腮腺炎病毒减毒株或其传代培养病毒或3)中所述的重组病毒或其传代培养病毒的联合疫苗；或

17、7)含有所述的g基因型嵌合腮腺炎病毒减毒株或其传代培养病毒或3)中所述的重组病毒或其传代培养病毒的免疫原性制剂。

18、可选的，所述疫苗为减毒活疫苗或病毒样颗粒。

19、可选的，所述疫苗组合物还包括药学上可接受的载体。

20、一种所述的g基因型嵌合腮腺炎病毒减毒株的制备方法，包括如下步骤：

21、构建所述的g基因型嵌合腮腺炎病毒减毒株的全长cdna的质粒；

22、所述g基因型嵌合腮腺炎病毒减毒株的拯救。

23、可选的，所述g基因型嵌合腮腺炎病毒减毒株的拯救步骤包括如下步骤：

24、将所述的g基因型嵌合腮腺炎病毒减毒株的全长cdna的质粒与腮腺炎相关辅助质粒共转染至宿主细胞中；

25、培养所述宿主细胞，然后洗涤，换液，继续培养，将细胞进行传代的同时加入新的细胞，继续培养，直至细胞出现融合病变，收集细胞培养上清。

26、可选的，所述腮腺炎相关辅助质粒为分别包含腮腺炎病毒中的n基因、p基因和l基因的质粒；

27、可选的，所述腮腺炎相关辅助质粒为pcdna3.1-n、pcdna3.1-p和pcdna3.1-l。

28、可选的，所述宿主细胞为哺乳动物细胞，所述新的细胞为哺乳动物细胞。

29、可选的，所述宿主细胞为bsr-t7/5细胞，所述新的细胞为vero细胞。

30、一种腮腺炎减毒活疫苗，包括：

31、所述的g基因型嵌合腮腺炎病毒减毒株；或

32、所述的生物材料；或

33、所述的制备方法制备得到的g基因型嵌合腮腺炎病毒减毒株。

34、可选的，还包括疫苗上可接受的载体或佐剂。

35、如下(1)-(4)任一项在制备疫苗制剂中的用途。

36、(1)所述的g基因型嵌合腮腺炎病毒减毒株；或

37、(2)所述的生物材料；或

38、(3)所述的制备方法制备得到的g基因型嵌合腮腺炎病毒减毒株；或

39、(4)所述的腮腺炎减毒活疫苗。

40、可选的，所述用途为制备预防腮腺炎病毒的疫苗制剂中的用途。

41、可选的，所述腮腺炎病毒包括g基因型腮腺炎病毒和/或f基因型腮腺炎病毒。

42、可选的，所述用途为制备经肌肉、腹腔、皮下、鼻喷等施用的疫苗制剂。

43、本发明技术方案，具有如下优点：

44、1.本发明提供的一种g基因型嵌合腮腺炎病毒减毒株，以腮腺炎病毒减毒株为骨架，将所述腮腺炎病毒减毒株中的血凝素-神经氨酸酶蛋白编码基因hn替换为包含g基因型腮腺炎病毒的血凝素-神经氨酸酶蛋白编码基因hn的核苷酸序列；本发明通过以现有的腮腺炎疫苗减毒株(如qs-f-sh2)为骨架，分别将其免疫原性蛋白hn替换为g基因型相关蛋白hn，构建的g基因型嵌合腮腺炎病毒减毒株，对g基因型腮腺炎病毒有更优的保护效果，可同时对其他基因型病毒提供有效的保护，进一步的，所述g基因型嵌合腮腺炎病毒减毒株脑积水程度低，使用安全性高。

45、本发明的g基因型嵌合腮腺炎病毒减毒株命名为腮腺炎病毒qs-f-sh2-hn[g]，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国.武汉.武汉大学，邮编:430072，保藏编号为cctcc no.v202285，保藏日期为2022年12月17日。