针对TIGIT的抗体的制作方法

发明领域本发明尤其提供的是特异性结合于免疫检查点分子从而导致免疫细胞的大量激活的单克隆抗体及其用途，其中包括在其他应用中，用于治疗癌症和传染病等。

背景技术：

1、抗原特异性免疫应答是一种复杂的生物过程，受到多层的正负调节因子的控制。t细胞最初通过t细胞受体(tcr)，经由t细胞受体识别由抗原呈递细胞上的主要组织相容性复合物(mhc)分子所呈递的同源肽抗原而被刺激。最佳t细胞活化需要由例如cd28之类的共刺激分子所提供的“第二信号”。免疫应答进一步受到共刺激分子的正调节(例如属于tnf受体超家族的ox40、gitr和4-1bb)，并且受到免疫应答受检查点分子(如pd-1和ctla-4)的负调节。检查点分子的功能是防止体内免疫系统的不利的反应过度；然而，它们也限制了免疫系统有效对抗癌症和传染病的能力。据报道，用拮抗性的单克隆igg抗体阻断pd-1或ctla-4的功能，对于人类癌症的免疫治疗是有效的(对于评论，见pardoll,nat.rev.cancer,12:252-264,2012；mahoney等,nat.rev.drug discov.14:561-584,2015；shin等,curr.opin.immunol.33:23-35,2015；marquez-rodas等ann.transl.med.3:267,2015)。

2、其他检查点分子已经被报道，例如tim-3、lag-3、tigit、btla和vista(mercier等，front.immunol.6:418,2015)。tigit(具有ig和itim结构域的t细胞免疫受体)是免疫球蛋白超家族的成员，其在细胞质尾部具有基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(itim)，tigit在活化的t细胞和自然杀伤(nk)细胞的亚群上表达(yu等，nat.immunol.10:48–57,2009)。已知tigit与cd155(也称为pvr和necl-5)、cd112(也称为pvrl2和粘连蛋白-2)以及可能与cd113(也称为pvrl3和粘连蛋白-3)相互作用(mercier等，supra；martinet等，nat.rev.immunol.15:243-254,2015)。已报道，tigit与在抗原呈递细胞上表达的高亲和力配体cd155的结合会抑制t细胞和nk细胞的功能(mercier等，同上；joller等，j.immunol.186：1338–1342,2011；stanietsky等,eur.j.immunol.43:2138-2150,2013；li等,j.biol.chem.289:17647-17657,2014；zhang等cancer immunol.immunother.发表于2016年2月3日)。tigit还被报道通过调节树突细胞的细胞因子产生来间接抑制t细胞(yu等，同上)。

3、肿瘤构成高度抑制性的微环境，在微环境中浸润的t细胞被耗尽并且nk细胞被例如pd-1和tigit的检查点分子沉默，从而逃避免疫应答(johnston等,cancer cell.26:926-937,2014；chauvin等,j.clin.invest.125:2046-2058,2015；inozume等,j.invest.dermatol.发表于2015年10月12日)。据报道，cd8+t细胞上tigit的高水平表达与aml受试者的不良临床结果相关(kong等,clin.cancer res.发表于2016年1月13日)。据报道，来自aml受试者的耗尽的tigit+cd8+t细胞的功能缺陷，被sirna介导的tigit表达降低所逆转(kong等，同上)。据报道，在hiv感染期间的血液中和在siv感染期间的淋巴组织中，效应子cd8+t细胞表现出更高水平的tigit(chew等,plos pathogens,12:e1005349,2016)。此外，据报道，用离体抗体阻断tigit，可恢复病毒特异性的cd8+t细胞效应子响应。

技术实现思路

0、概述

1、本发明尤其提供了与tig1、tig2或tig3中的任何一种竞争结合人tigit的抗体。抗体tig1的特征在于具有序列为seq id no：14的成熟轻链可变区和序列为seq id no：10的成熟重链可变区，抗体tig2的特征在于具有序列为seq id no：22的成熟轻链可变区和序列为seq id no：18的成熟重链可变区，抗体tig3的特征在于具有序列为seq id no：30的成熟轻链可变区和序列为seq id no：26的成熟重链可变区，以用于特异性结合tigit。一些抗体结合于人tigit上的与tig1、tig2或tig3结合的相同的表位。一些抗体抑制人tigit与cd155的结合。一些抗体包含三个轻链cdr和三个重链cdr，这些cdr基本上来自tig1相应的三个轻链cdr和三个重链cdr。一些抗体包含tig1、tig2或tig3的三个轻链cdr和三个重链cdr。一些抗体包含tig1(轻链中cdr为seq id no:15-17，重链中cdr为seq id no:11-13)、tig2(轻链中cdr为seq id no:23-25,重链中cdr为seq id no:19-21)或tig3(轻链中cdr为seq idno:31-33，重链中cdr为seq id nos:27-29)中任一抗体中的如kabat所定义的三个重链cdr和如kabat所定义的三个轻链cdr。

2、一些单克隆抗体与人tigit的表位结合，所述表位包含seq id no：1的残基35和37和/或seq id no：1的残基49和51。一些单克隆抗体与人tigit的表位结合，所述表位包含seq id no：1的残基35、37、49和51。一些单克隆抗体结合于一肽，该肽由seq id no：1中残基35-51和seq id no：1中在任一侧不超过5个侧翼氨基酸构成。一些单克隆抗体与由seqid no：1的残基35-51所构成的肽结合。所述一些单克隆抗体结合于由seq id no：1的3至20个连续残基所构成的表位。

3、一些抗体是嵌合的、人源化的、经饰面的(veneered)或人的。一些抗体具有人igg1kappa同种型。一些抗体具有人igg4 kappa同种型。抗体可以是完整抗体或单链抗体、fab或f(ab')2片段。

4、本发明还提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含任一上述抗体和药学上可接受的载体。

5、本发明还提供了在受试者中对肿瘤进行治疗或实现的方法，包括：向患有癌症或有患癌风险的受试者施用有效方案(或有效量)的任一上述抗体。在一些方法中，所述受试者患有急性髓性白血病或成人t细胞白血病。

6、在一些其他实施方案中，本发明包括将本文所述的抗体与免疫检查点抑制剂的组合使用。免疫检查点的阻断导致抗原特异性t细胞应答的放大，已被证明是人类癌症治疗中的有前途的方法。免疫检查点(配体和受体)的一些例子，其中一些在各种不同类型的肿瘤细胞中被选择性上调，是进行阻断的候选者，包括pd-1(程序性细胞死亡蛋白1)；pd-l1(程序性死亡配体-1)；btla(b和t淋巴细胞衰减因子)；ctla-4(细胞毒性t淋巴细胞相关抗原4)；tim-3(t细胞膜蛋白3)；lag-3(淋巴细胞活化基因3)；t细胞活化的v结构域免疫球蛋白抑制因子(vista)；cd96；a2ar(腺苷a2a受体)；a2br(腺苷a2b受体)；cd73(胞外-5'-核苷酸酶)；cd39(entpd1、ntpd酶1)；精氨酸酶；吲哚胺-吡咯2,3-双加氧酶(ido)；色氨酸2,3-双加氧酶(tdo)和杀手抑制受体。免疫检查点抑制剂及其组合疗法，在本文其他地方会详细讨论。

7、本发明进一步提供了治疗受病原体感染的受试者的方法，包括给受试者施用有效方案的任何上述抗体。在一些方法中，所述病原体是hiv或siv。在一些其他方法中，病原体是病毒、细菌、真菌或原生动物。

8、在一些另外的方面，本文提供了抗tigit抗体，其在包含d51的一个或多个氨基酸残基上与tigit多肽结合，其中tigit多肽具有对应于seq id no：1的氨基酸序列。在一些实施方式中，所述抗体是单克隆抗体。在本文公开的任何实施方案的一些实施方式中，所述抗体是嵌合的、人源化的或饰面的。在一些实施方案中，所述抗体是人抗体。在本文公开的任何实施方案的一些实施方式中，所述抗体不结合包含l44、i47或h55的一个或多个氨基酸残基。在本文公开的任何实施方案的一些实施方式中，所述抗体包含seq id no：14的成熟轻链可变区和seq id no：10的成熟重链可变区。在本文公开的任何实施方案的一些实施方式中，所述抗体在对应于seq id no：1的氨基酸序列上与tig1结合于相同的表位。在本文公开的任何实施方案的一些实施方式中，所述抗体包含三个轻链cdr，其包含seq id no：15-17，和三个重链cdr，其包含seq id no：11-13。在本文公开的任何实施方案的一些实施方式中，所述抗体包含与seq id no：35具有至少90％序列同一性的成熟重链可变区和与seq idno：37具有至少90％序列同一性的成熟轻链可变区。在一些实施方式中，所述成熟重链可变区包含seq id no：35的氨基酸序列，并且所述成熟轻链可变区包含seq id no：37的氨基酸序列。在本文公开的任何实施方案的一些实施方式中，当c-末端赖氨酸存在或不存在时，所述成熟重链可变区与包含seq id no：40的重链恒定区连接，并且所述成熟轻链可变区与包含seq id no：41的轻链恒定区连接。

9、在另一方面，本发明提供了一种单克隆抗体，所述单克隆抗体与tig1、tig2或tig3中的任一个竞争结合人tigit，其中，抗体tig1的特征在于具有序列为seq id no：14的成熟轻链可变区和序列为seq id no：10的成熟重链可变区，抗体tig2的特征在于具有序列为seq id no：22的成熟轻链可变区和序列为seq id no：18的成熟重链可变区，抗体tig3的特征在于具有序列为seq id no：30的成熟轻链可变区和序列为seq id no：26的成熟重链可变区，以便特异性结合于cd155。在一些实施方式中，所述抗体与tig1、tig2或tig3中任一个结合于人tigit上的相同表位。在本文公开的任何实施方案的一些实施方式中，所述抗体抑制cd155与人tigit的结合。在一些实施方式中，所述抗体包含三个轻链cdr和三个重链cdr，这些cdr对应于tig1、tig2或tig3中任一个的三个轻链cdr和三个重链cdr。在一些实施方式中，所述抗体包含tig1、tig2或tig3中任一个的三个重链cdr和三个轻链cdr。在一些实施方式中，所述抗体包含tig1、tig2和tig3中任意一个中的如kabat所定义的三个重链cdr和如kabat所定义的三个轻链cdr，即tig1(轻链中的序列为seq id no:15-17，重链中的序列为seq id no:11-13)、tig2(轻链中的序列为seq id no:23-25,重链中的序列为seq id no:19-21)或tig3(轻链中的序列为seq id no:31-33，重链中的序列为seq id no:27-29)。在本文公开的任何实施方案的一些实施方式中，所述抗体是嵌合的、人源化的或饰面的。在一些实施方案中，所述抗体是人抗体。在本文公开的任何实施方案的一些实施方式中，所述抗体具有人igg1 kappa同种型。在本文公开的任何实施方案的一些实施方式中，所述抗体是完整抗体。在本文公开的任何实施方案的一些实施方式中，所述抗体是单链抗体、fab或f(ab')2片段。在本文公开的任何实施方案的一些实施方式中，所述抗体包含与seq id no：35具有至少90％序列同一性的成熟重链可变区和与seq id no：37具有至少90％序列同一性的成熟轻链可变区。在一些实施方式中，所述成熟重链可变区与seq id no：35具有至少95或99％的序列同一性，并且所述成熟轻链可变区与seq id no：37具有至少95或99％的序列同一性。在一些实施方式中，所述成熟重链可变区具有seq id no：35的氨基酸序列，并且所述成熟轻链可变区具有seq id no：37的氨基酸序列。在一些实施方式中，当c-末端赖氨酸存在或不存在时，所述成熟重链可变区与包含seq id no：40的重链恒定区连接，并且所述成熟轻链可变区与包含seq id no：41的轻链恒定区连接。在一些实施方式中，当c-末端赖氨酸存在或不存在时，所述成熟重链可变区与包含seq id no：60的重链恒定区连接，并且所述成熟轻链可变区与包含seq id no：64的轻链恒定区连接。在一些实施方式中，当c-末端赖氨酸存在或不存在时，所述成熟重链可变区与包含seq id no：61的重链恒定区连接，并且所述成熟轻链可变区与包含seq id no：64的轻链恒定区连接。在本文公开的任何实施方案的一些实施方式中，所述抗体包含与seq id no：43具有至少90％序列同一性的成熟重链可变区和与seq id no：45具有至少90％序列同一性的成熟轻链可变区。在一些实施方式中，所述成熟重链可变区与seq id no：43具有至少95或99％的序列同一性，并且所述成熟轻链可变区与seq id no：45具有至少95或99％的序列同一性。在一些实施方式中，所述成熟重链可变区具有seq id no：43的氨基酸序列，并且所述成熟轻链可变区具有seq idno：45的氨基酸序列。在一些实施方式中，当c-末端赖氨酸存在或不存在时，所述成熟重链可变区与包含seq id no：48的重链恒定区连接，并且所述成熟轻链可变区与包含seq idno：49的轻链恒定区连接。在一些实施方式中，当c-末端赖氨酸存在或不存在时，所述成熟重链可变区与包含seq id no：62的重链恒定区连接，并且所述成熟轻链可变区与包含seqid no：65的轻链恒定区连接。在一些实施方式中，当c-末端赖氨酸存在或不存在时，所述成熟重链可变区与包含seq id no：63的重链恒定区连接，并且所述成熟轻链可变区与包含seq id no：65的轻链恒定区连接。在一些其他方面，本文提供了一种单克隆抗体，所述单克隆抗体结合于包含seq id no：1的残基35和37和/或seq id no：1的残基49和51的表位。在一些实施方式中，所述抗体结合于包含seq id no：1的残基35、37、49和51的表位。在一些实施方式中，所述抗体结合于由seq id no：1的残基35-51和任一侧上seq id no：1的不超过五个侧翼氨基酸所组成的肽。在一些实施方式中，所述抗体结合于由seq id no：1的残基35-51所构成的肽。在一些实施方式中，所述表位包含seq id no：1的3至20个连续残基。在本文公开的任何实施方案的一些实施方式中，所述抗体具有以下一种或多种特性：(a)抑制tigit与cd155的结合，任选地ic50为15-100ng/ml，(b)在表达cd155的抗原呈递细胞存在时，增加内在t细胞的活化，这可通过il-2的产量进行测量，任选地1.5-3倍，(c)增加抗原特异性t细胞的活化，这可通过il-12的产量进行测量，任选地1.5-3倍，(d)增加自然杀伤细胞的活化，这可通过il-2、il-6、tnfα或ifnγ中的任意一个的产量进行测量，任选地1.5-3倍，(e)增加t细胞产生至少一种促炎细胞因子的产量，任选地1.5-3倍，和(f)减少t细胞产生至少一种抗炎细胞因子的产量，任选地1.5-3倍。

10、在另一方面，本文提供了药物组合物，包含本文所述的任何抗体和药学上可接受的载体。

11、在一些其他方面，本文提供了用于治疗癌症或实现癌症预防的方法，包括：向患有癌症或处于患癌风险的对象施用有效方案或治疗有效量的本文公开的任何抗体。在一些实施方案中，所述癌症是急性髓性白血病或成人t细胞白血病。在本文公开的任何实施方案的一些实施方式中，向所述对象施用被所述抗体激活的肿瘤浸润性t细胞。在本文公开的任何实施方案的一些实施方式中，向所述对象施用诱导针对癌症的免疫应答的疫苗，所述免疫应答被所述抗体增强。在一些实施方式中，所述疫苗包含在癌细胞表面上表达的抗原或其片段。在本文公开的任何实施方案的一些实施方式中，向所述对象施用天然杀伤细胞，所述天然杀伤细胞针对癌症的细胞毒性被所述抗体增强。在本文公开的任何实施方案的一些实施方式中，还向所述对象施用针对在癌细胞表面上表达的抗原的第二抗体，从而使得所述第二抗体的效应子介导的针对癌症的细胞毒性被所述抗体增强。在本文公开的任何实施方案的一些实施方式中，还向对象施用针对在免疫细胞表面上表达的抗原的第二抗体。在一些实施方式中，所述免疫细胞是t细胞或天然杀伤细胞。在本文公开的任何实施方案的一些实施方式中，所述抗原是ctla-4、pd-1或pd-l1。在本文公开的任何实施方案的一些实施方式中，还向所述对象施用一种或多种选自下组的疗法：化学疗法、放射疗法、基于细胞的疗法和外科手术。在本文公开的任何实施方案的一些实施方式中，还向对象施用一种或多种免疫检查点受体或配体的抑制剂。在一些实施方式中，所述抑制剂选自下组：伊匹木单抗(ipilimumab)、纳武单抗(nivolumab)、派姆单抗(pembrolizumab)(也称为兰姆伯单抗(lambrolizumab))和阿妥佐单抗(atezolizumab)。

12、在一些另外的方面，本文提供了用于治疗被病原体感染的对象的方法，包括向对象施用有效方案或治疗有效量的本文公开的任何抗体。在一些实施方式中，所述病原体是病毒、细菌、真菌或原生动物。在一些实施方式中，所述病原体是hiv、siv、肝炎病毒、疱疹病毒、腺病毒、流感病毒、黄病毒、埃可病毒、鼻病毒、柯萨奇病毒、冠状病毒、呼吸道合胞体病毒、腮腺炎病毒、轮状病毒、麻疹病毒、风疹病毒、细小病毒、牛痘病毒、htlv病毒、登革热病毒、乳头瘤病毒、软疣病毒、脊髓灰质炎病毒、狂犬病病毒、jc病毒、虫媒病毒性脑炎病毒、衣原体、立克次体细菌、分枝杆菌、葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌、脑膜炎球菌、淋球菌、克雷白氏杆菌、变形杆菌、沙雷菌、假单胞菌、军团菌、白喉杆菌、沙门氏菌、杆菌、霍乱孤菌、破伤风梭菌、肉毒杆菌、炭疽杆菌、瘟疫、钩端螺旋体和莱姆病细菌。在本文公开的任何实施方案的一些实施方式中，用诱导针对病原体的免疫应答的疫苗治疗对象，所述免疫应答被所述抗体增强。在一些实施方式中，所述疫苗包含病原体蛋白或其片段。在本文公开的任何实施方案的一些实施方式中，进一步向对象施用针对病原体的第二抗体，其中第二抗体的效应子介导的针对病原体的细胞毒性被所述抗体增强。在本文公开的任何实施方案的一些实施方式中，进一步向对象施用抗病毒剂、抗寄生虫剂、抗细菌剂或抗真菌剂中的一种或多种。

13、在另一方面，本文提供了用于辅助治疗癌症的方法，包括向患有癌症的对象施用治疗有效量的本文公开的任何抗体。在一些实施方式中，所述癌症是急性髓性白血病或成人t细胞白血病。在本文公开的任何实施方案的一些实施方式中，向所述对象施用被抗体激活的肿瘤浸润性t细胞。在本文公开的任何实施方案的一些实施方式中，向所述对象施用诱导针对癌症的免疫应答的疫苗，所述免疫应答被所述抗体增强。在一些实施方式中，所述疫苗包括在癌细胞表面上表达的抗原或其片段。在本文公开的任何实施方案的一些实施方式中，向所述对象施用天然杀伤细胞，所述天然杀伤细胞针对癌症的细胞毒性被所述抗体增强。在本文公开的任何实施方案的一些实施方式中，向所述对象施用针对在癌细胞表面上表达的抗原的第二抗体，从而使得所述第二抗体的效应子介导的针对癌症的细胞毒性被所述抗体增强。在本文公开的任何实施方案的一些实施方式中，还向对象施用针对在免疫细胞表面上表达的抗原的第二抗体。在一些实施方式中，所述免疫细胞是t细胞或天然杀伤细胞。在本文公开的任何实施方案的一些实施方式中，所述抗原是ctla-4、pd-1或pd-l1。在本文公开的任何实施方案的一些实施方式中，还向所述对象施用一种或多种选自下组的疗法：化学疗法、放射疗法、基于细胞的疗法和外科手术。在本文公开的任何实施方案的一些实施方式中，还向对象施用一种或多种免疫检查点受体或配体的抑制剂。在一些实施方案中，所述一种或多种免疫检查点受体或配体选自下组：ctla-4、pd-1和pd-l1。在一些实施方式中，所述抑制剂选自下组：伊匹木单抗(ipilimumab)、纳武单抗(nivolumab)、派姆单抗(pembrolizumab)(兰姆伯单抗(lambrolizumab))和阿妥佐单抗(atezolizumab)。

14、除非明确地或清楚地从实施例或方面的上下文中排除，否则本文描述的每个方面和实施例能够一起使用。