IL12B基因中与冠心病相关SNP位点及其应用

本发明属于基因工程，尤其涉及il12b基因中与冠心病相关snp位点及其应用。

背景技术：

1、冠心病(coronary artery disease，cad)是一种由遗传和环境因素共同作用而导致的复杂性心血管疾病(cardiovascular disease，cvd)。冠心病是一种缺血性心脏病，冠状动脉是向心脏提供血液的动脉，当其由于各种原因出现管腔狭窄或闭塞时，会引起心肌缺血、缺氧或坏死进而出现胸痛、胸闷等不适。

2、目前，冠心病主要通过临床表现、心电图检查、冠状动脉造影检查等进行诊断：1.临床表现，冠心病患者根据典型的心绞痛症状，结合患者年龄及冠心病危险因素，并排除其他引起心绞痛的病因，可初步诊断是冠心病，当心绞痛的典型症状主要有情绪激动或劳累等诱因刺激，出现心前区压榨性疼痛，可放射至左肩甚至整条手臂，一般休息或舌下含服硝酸甘油后症状可在数分钟内缓解；2.心电图检查，冠心病的患者在心电图上，可出现心肌缺血的表现，为心电图st段下移或者短时间抬高，通常在症状出现时会出现相应的心电图改变；3.冠状动脉造影检查，冠脉造影是一项有创操作，是诊断冠心病的金标准，在心脏介入中心或者导管室进行，能够在x线下清楚看到冠状动脉的走形、结构，明确有无动脉硬化病变，同时观察病变的狭窄程度以及累及范围，因此冠脉造影能够诊断或者排除冠心病。但是，前述诊断都无法实现患病风险的预诊断，也因此无法实现提前干预。

3、目前国内cvd患病人数已高达2.9亿，其中cad患者达到1100万。framinghamoffspring研究发现在矫正传统的危险因素之后，具有早发冠心病家族史的个体患冠心病的风险增加2倍。另外瑞典研究者通过家系双生子研究对大约21000个双胞胎个体在长达35年的随访中评估致病性cad事件，估算出cad的遗传度在40-60％之间，其中男性和女性的cad遗传率分别为0.57和0.38，并且有遗传倾向的患者往往发病年龄比较早。

4、第三代遗传标记是单核苷酸多态性(snp)，它常指基因组中dna序列上的单个碱基改变。snp遍布于整个人类基因组中，人类基因组中每1000个核苷酸就有一个snp，人类30亿碱基中共有300万以上的snp。snp是目前进行疾病研究最为普遍且有效的遗传标记。近年来利用snp预测疾病的发生发展已经成为临床和科研工作者的热点，且在肿瘤和心脑血管等重大疾病预测上的应用价值已初见端倪。虽然通过遗传学研究已经发现了大量的冠心病易感基因，但是这些易感基因仅能解释冠心病28％左右的遗传度，而且目前发现的冠心病易感基因还有相当一部分并未阐明其具体致病机制，研究者仍需要通过多种研究策略找到冠心病全部的遗传基础，并明确其在疾病中的分子作用机制，为今后的精准医疗提供理论依据。

技术实现思路

1、针对上述问题，本发明提供il12b基因中与冠心病相关snp位点及其应用，主要为了解决现有的冠心病风险筛查手段还不完善，部分筛查手段不够精准等问题。

2、为了解决上述问题，本发明采用如下技术方案：

3、本发明第一方面涉及检测il12b基因的rs2853694位点等位基因类型的试剂在制备评估冠心病患病风险的产品中的应用，所述rs2853694位点等位基因为g与t。

4、其中，当所述rs2853694位点处为tt基因型时，较gt基因型、gg基因型易感冠心病风险高；当所述rs2853694位点处为gg型时，较tt基因型、gt基因型易感冠心病风险低。本部分所涉及的检测试剂不局限于液体形式，也包括部分检测芯片等，还包括一些应用特定方法实现等位基因定型检测的设备组合等，在进行检测时的检测目的为对rs2853694位点进行基因型定型，其中较常使用的就是一代sanger测序。tt基因型一般为冠心病高患病风险的标志。

5、所述可进行风险预警的冠心病表现为1)冠脉造影结果证实至少一支主干血管(左主干、前降支、回旋支、右冠)狭窄超过70％；2)曾经做过pci术或cabg；3)存在心肌梗塞病史，心肌梗死标准是胸痛半个小时以上、有动态心电图变化、有肌酸激酶同工酶(ckmb)和肌钙蛋白(tni)酶学变化三者中至少一种。该类冠心病可被认定为心肌梗死型冠心病。

6、检测试剂包括扩增引物等，所述试剂为引物，所述引物的序列为正向引物：aaattgcctggccatgcttc、反向引物：ccctaagatctacgccctgg。

7、在实际检测时，可对待检样本进行pcr扩增及hrm分型预实验，将样本pcr扩增产物放入rotor-gene 6000荧光定量pcr仪上进行分型检测，读取结果。为确保检测准确性，可分别选取每个snp的3种基因型的pcr产物进行一代测序验证，检测hrm分型准确性，若hrm分型结果与一代测序结果一致说明hrm分型准确，并将snp的3种基因型样本作为阳性对照样本应用于后续大批量pcr扩增以及基因分型实验。

8、本发明第二方面涉及冠心病风险人群的评估试剂，可根据检测结果将冠心病风险人群分为高风险人群、中风险人群、低风险人群。

9、冠心病中高风险人群的筛查试剂，所述筛查试剂含有il12b基因的rs2853694位点等位基因的检测物，所述检测物为检测il12b基因的rs2853694位点为gt或tt基因型的检测剂。其中，冠心病中高风险人群的筛查试剂为冠心病高风险人群的筛查试剂，所述检测物为检测il12b基因的rs2853694位点为tt基因型的检测剂。

10、冠心病低风险人群的筛查试剂，所述筛查试剂含有il12b基因的rs2853694位点等位基因的检测物，所述检测物为检测il12b基因的rs2853694位点gg基因型的检测剂。

11、本部分涉及的中风险是相对于低风险和高风险而言，也就是gt基因型的患病风险低于tt基因型、高于gg基因型。所述冠心病为心肌梗死型冠心病；所述试剂为引物，所述引物为正向引物：aaattgcctggccatgcttc、反向引物：ccctaagatctacgccctgg。

12、本发明第三方面涉及冠心病风险人群分析系统，包括

13、待检样品获取模块，用于获取目标人群的基因检测样本，该模块可为取样组件也可为检测设备的样品覆在组件；

14、snp位点检测模块，包括snp检测物，所述snp检测物对基因检测样本中的il12b基因的rs2853694位点等位基因类型进行检测，其中具体的分析原理与检测方式均可采用现有技术，其目的在于对相应的位点进行基因类型的定型；

15、snp分析模块，用于获取snp检测模组的检测数据，并判断基因检测样本中il12b基因的rs2853694位点是否为gt基因型、gg基因型、tt基因型中任一，并给出相应的配对结果：

16、当基因型为tt基因型时，则给出冠心病高患病风险的结论，

17、当基因型为gt基因型时，则给出冠心病中患病风险的结论，

18、当基因型为gg基因型时，则给出冠心病低患病风险的结论。

19、其中，所述snp检测物为扩增引物、探针、测序芯片中任一；冠心病高、中、低患病风险的结论可以采用多种表达方式，其目的在于给检测人员以参考依据，也不限定必须直接给出高风险的结论，可以采用评分等其他形式。

20、本发明的有益效果是：

21、通过研究发现了新的冠心病的遗传基础，确认了il12b基因的rs2853694位点遗传多态性对于冠心病患病风险的影响。并给出了通过鉴定rs2853694位点不同的基因型实现判断检测对象是否为冠心病高患病风险的产品和方法，利于提前干预治疗。