用于检测HLA-B*15:11等位基因的探针引物组、试剂盒及应用的制作方法

本发明属于基因诊断，具体涉及用于检测hla-b*15:11等位基因的探针引物组、试剂盒及应用。

背景技术：

1、人类白细胞抗原(human leukocyte antigen，hla)，是编码人类的主要组织相容性复合体(mhc)的基因，hla基因位于6号染色体的短臂上(6p21.31)，包括一系列紧密连锁的基因座，由360万个碱基对组成，是目前已知的人类染色体中基因密度最高，也是多态性最为丰富的区域，hla基因包含i类、ii类和ⅲ类hla基因，其中i类hla基因包括hla-a，hla-b和hla-c，与多种药物的药效和毒副作用相关，对hla基因进行分型可以让医生根据基因型选择治疗药物，提高药物的有效性，避免不良反应的发生。

2、卡马西平是一种常见的精神类药物，临床适应症为癫痫和三叉神经痛。较其他抗癫痫药物而言，卡马西平耐受性良好，常见嗜睡、疲劳、低钠血症等药物不良反应，这些不良反应一般与药物的药理作用相关，成剂量相关性；目前已有多项研究表明卡马西平所致的皮肤不良反应sjs/ten与hla-b基因型密切相关。cpic指南指出，除常见的携带hla-b*15:02等位基因患者之外，在东亚、东南亚人群中携带hla-b*15:08、hla-b*15:11和hlab*15:21等位基因的患者发生危及生命的皮肤不良事件sjs/ten的风险显著增加，建议仔细权衡服用卡马西平所带来的sjs/ten的风险和治疗收益，选择替代治疗方案。根据中华骨髓库统计的中国人群常见及确认hla等位基因表(cwd表，2.2版本)的统计结果显示，hla-b*15:11在中国人中的人群频率为1.83％，cwd等位基因分类为c(common alleles)，即常见等位基因，在中国人群与卡马西平所致的皮肤严重不良反应sjs/ten相关的hla-b基因多态性中，仅次于hla-b*15:02等位基因(中国人群频率3.58％)，因此对中国人群进行hla-b*15:11基因检测对指导卡马西平的合理用药具有重要意义。

3、目前，常用的hla-b基因分型方法有限制性片段长度多态性分析pcr-rfp、序列特异性寡核苷酸探针pcr-sso、序列特异性引物pcr技术pcr-ssp等。对于复杂的hla等位基因来说，pcr-rfp技术尚不能检出所有的hla等位基因；pcr-sso不具有集成化的优点，而且洗脱条件比较繁琐，耗时较长，难以标准化和自动化；pcr-ssp也具有操作耗时长和特异性较差的缺点。世界卫生组织推荐的hla-b基因分型方法是以pcr为基础的直接测序法pcr-sbt方法，此方法是最准确可靠hla-b基因分型方法，具有分辨率高，可大规模进行，精确度高的优势，并且能直接发现新的等位基因，但是，直接测序法存在操作繁琐、耗时长、成本高昂的缺点，另外，测序结果容易出现重叠峰，不利于结果的判读，这与现代医学检验所要求的“快速、简便”的理念相悖。

技术实现思路

1、有鉴于此，一方面，一些实施例公开了用于检测hla-b*15:11等位基因的探针引物组，包括：特异性引物组及特异性探针，和内标基因引物组及内标探针；

2、其中，特异性引物组及特异性探针包括：

3、hla-b*15:11-f上游引物，其碱基序列如seq id no：001所示；

4、hla-b*15:11-r下游引物，其碱基序列如seq id no：002所示；

5、hla-b*15:11-probe特异性探针，其碱基序列如seq id no：003所示；

6、内标基因引物组及内标探针包括：

7、tubb-f上游引物，其碱基序列如seq id no：004所示；

8、tubb-r下游引物，其碱基序列如seq id no：005所示；

9、tubb-probe内标探针，其碱基序列如seq id no：006所示。

10、另一方面，一些实施例公开了用于检测hla-b*15:11等位基因的试剂，包括用于检测hla-b*15:11等位基因的探针引物组。

11、再一方面，一些实施例公开了用于检测hla-b*15:11等位基因的试剂盒，包括用于检测hla-b*15:11等位基因的探针引物组，或用于检测hla-b*15:11等位基因的试剂。

12、一些实施例公开的用于检测hla-b*15:11等位基因的试剂盒，还包括扩增试剂。

13、再一方面，一些实施例公开了用于检测hla-b*15:11等位基因的探针引物组在检测hla-b*15:11等位基因中应用。

14、一些实施例公开的用于检测hla-b*15:11等位基因的探针引物组在检测hla-b*15:11等位基因中的应用，利用探针引物组对待测样品进行pcr扩增。

15、一些实施例公开了用于检测hla-b*15:11等位基因的试剂在检测hla-b*15:11等位基因中的应用。

16、一些实施例公开的用于检测hla-b*15:11等位基因的试剂在检测hla-b*15:11等位基因中的应用，利用试剂对待测样品进行pcr扩增。

17、一些实施例公开了用于检测hla-b*15:11等位基因的试剂盒在检测hla-b*15:11等位基因中的应用。

18、一些实施例公开的用于检测hla-b*15:11等位基因的试剂盒在检测hla-b*15:11等位基因中的应用，利用试剂盒对待测样品进行pcr扩增。

19、一些实施例公开的用于检测hla-b*15:11等位基因的试剂盒在检测hla-b*15:11等位基因中的应用，待测样品为血液、血斑或口腔黏膜。

20、本发明实施例公开的用于检测hla-b*15:11等位基因的探针引物组、试剂、试剂盒能够用于对hla-b*15:11等位基因进行快速、简单、可靠、高精度、高灵敏度的检测特异性检测，对hla-b*15:11的阳性检出率为100％，且非hla-b*15:11基因型的样本均无明显指数扩增，特异性符合率为100％。

技术特征：

1.用于检测hla-b*15:11等位基因的探针引物组，其特征在于，包括：特异性引物组及特异性探针，和内标基因引物组及内标探针；

2.用于检测hla-b*15:11等位基因的试剂，其特征在于，包括权利要求1所述的探针引物组。

3.用于检测hla-b*15:11等位基因的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的探针引物组，或权利要求2所述的试剂。

4.根据权利要求3所述的用于检测hla-b*15:11等位基因的试剂盒，其特征在于，还包括扩增试剂。

5.权利要求1所述的用于检测hla-b*15:11等位基因的探针引物组在检测hla-b*15:11等位基因中应用。

6.根据权利要求5所述的用于检测hla-b*15:11等位基因的探针引物组在检测hla-b*15:11等位基因中应用，其特征在于，利用所述探针引物组对待测样品进行pcr扩增。

7.权利要求2所述的用于检测hla-b*15:11等位基因的试剂在检测hla-b*15:11等位基因中的应用，其特征在于，利用所述试剂对待测样品进行pcr扩增。

8.权利要求3或4所述的用于检测hla-b*15:11等位基因的试剂盒在检测hla-b*15:11等位基因中的应用。

9.根据权利要求8所述的用于检测hla-b*15:11等位基因的试剂盒在检测hla-b*15:11等位基因中的应用，其特征在于，利用所述试剂盒对待测样品进行pcr扩增。

10.根据权利要求8所述的用于检测hla-b*15:11等位基因的试剂盒在检测hla-b*15:11等位基因中的应用，其中在于，所述待测样品为血液、血斑或口腔黏膜。

技术总结
本发明实施例公开了用于检测HLA‑B*15:11等位基因的探针引物组、试剂盒及应用；探针引物组包括：特异性引物组及特异性探针和内标基因引物组及内标探针；特异性引物组及特异性探针包括：HLA‑B*15:11‑F，其碱基序列为SEQ ID NO：001；HLA‑B*15:11‑R，其碱基序列为SEQ ID NO：002；HLA‑B*15:11‑Probe，其碱基序列为SEQ ID NO：003；内标基因引物组及内标探针包括：TUBB‑F，其碱基序列为SEQ ID NO：004；TUBB‑R，其碱基序列为SEQ ID NO：005；TUBB‑probe，其碱基序列为SEQ ID NO：006。

技术研发人员：郭建成,占闽宁,史健翔,尚文俊,冯帅升,朱丹丹,王丙顺,张静,李英英,薛滨雨
受保护的技术使用者：河南申友医学检验所有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15