一种核酸快速检测试剂盒的制作方法

本发明涉及试剂盒，具体为一种核酸快速检测试剂盒。

背景技术：

1、目前市场上检测核酸及突变的技术主要为荧光定量pcr及高通量测序，存在以下技术问题：

2、一、荧光定量pcr法检测技术虽然灵敏度比较高，但是需要设备比较贵，并且检测环境要求比较严格。

3、二：目前的磁珠法核酸提取试剂目前是比较领先的核酸提取技术，但是，不太适用于恒温检测技术，因为恒温简单技术的目的就是方便快捷，但是目前的一步法虽然比较方便，但是灵敏度还暂时没法达到磁珠法那么好；

4、三：目前的胶体金技术，多采用抗原抗体结合技术来检测，其缺点是灵敏度不高，抗体检测窗口期长，不利于早检测早发现。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种核酸快速检测试剂盒，在常温恒温下，特殊修饰的反转录酶利用特异性引物dna和模板rna合成cdna链，反应体系中的重组酶、单链dna结合蛋白和dna聚合酶以新合成的cdna链为模板进行快速核酸扩增反应。本试剂盒在使用胶体金技术(三明治夹心法)可以对最终结果进行检测。

2、为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种核酸快速检测试剂盒，包括试管，且试管的侧壁上开设有卡槽，所述试剂盒包括以下物质：

3、冻干粉2.0mg*1管；

4、abuffer 1.0ml*1管；

5、b buffer 80μl*1管；

6、试剂条16份；

7、阳性质控品100μl*1管；

8、阴性质控品100μl*1管；

9、所述冻干粉包括酶、探针引物、dntps；

10、探针引物的序列如下：

11、(5’-fam)-ttgctattccctcggtatccattcc；

12、(5’-biotin)-tcatcgtggtggttattgttggtg。

13、所述abuffer主要成分为反应缓冲液，所述b buffer主要成分为mg2+，所述试剂条主要成分为纤维膜，所述阳性质控品主要成分为阳性质粒，所述阴性质控品主要成分为阴性基质。

14、所述反应酶主要成分为5u/ul的ssb、2u/ul的重组酶以及2u/ul的聚合酶。

15、与现有技术相比，本发明的有益效果是：

16、本发明针对技术问题一，提出了恒温扩增技术，所需要设备简单，快速，所需要的酶包括：重组酶、辅助蛋白和单链结合蛋白ssb、dna聚合酶；与引物互补的目的区域，复合体rec/ssdna解体，聚合酶结合到引物的3’末端，开始链的延伸，这个过程迅速高效地循环，从而完成目的片段超快速扩增，通过在特异性比较高的地方设计上下游引物，同时在上游引物5’和下游引物3’端标记生物素，一端生物素与包埋在膜上的抗体结合，固定在t线，另外一端与标记的金颗粒抗体结合，显示颜色，还可以同时检测不同目标基因，达到多通量的效果，只需要标记不同的颜色或者生物素即可。可以取代目前hpv等多靶位点杂交检测方法，相对比操作过程更加简单，灵敏度更高；

17、本发明针对技术问题二，使用一步法核酸提取技术，配套恒温扩增技术，使整个反应过程更简单，可以脱离大设备的限制。一步法核酸提取试剂包括：裂解缓冲液、蛋白酶k、转化剂、dna保护剂、结合液、脱磺基液等，所提及的技术，可以纯化dna或rna，无需大设备，直接加样，恒温裂解后，直接取样扩增；

18、本发明针对技术问题三，通过结合一步法核酸提取技术和恒温扩增技术，产物两端标记荧光素，结合对应抗体，标记在膜上，可以达到更直观地判断结果以及更灵敏的效果。为了防止在分析过程中产物污染，特设计一个防止扩增产物外溢的反应装置，使整个实验过程在密闭环境中进行，无需大型设备和环境，同时可以设置高通量的多重反应，一个样本可以检测多个目的基因。卡槽的设计，避免反应液体粘湿试纸条。管盖设计为底部锥形，有利于富集反应产物，同时管盖底部试纸条外露，使试纸条更好地接触反应产物。

技术特征：

1.一种核酸快速检测试剂盒，包括试管，且试管的侧壁上开设有卡槽，其特征在于：所述试剂盒包括以下物质：

2.根据权利要求1所述的一种核酸快速检测试剂盒，其特征在于：所述abuffer主要成分为反应缓冲液，所述bbuffer主要成分为mg2+，所述试剂条主要成分为纤维膜，所述阳性质控品主要成分为阳性质粒，所述阴性质控品主要成分为阴性基质。

3.根据权利要求2所述的一种核酸快速检测试剂盒，其特征在于：所述反应酶主要成分为5u/ul的ssb、2u/ul的重组酶以及2u/ul的聚合酶。

技术总结
本发明提供了一种核酸快速检测试剂盒，包括试管，且试管的侧壁上开设有卡槽，所述试剂盒包括以下物质：冻干粉2.0mg*1管；Abuffer1.0ml*1管；Bbuffer80μL*1管；试剂条16份；阳性质控品100μL*1管；阴性质控品100μL*1管。本发明提出了恒温扩增技术，所需要设备简单，使用一步法核酸提取技术，配套恒温扩增技术，使整个反应过程更简单，可以脱离大设备的限制，通过结合一步法核酸提取技术和恒温扩增技术，产物两端标记荧光素，结合对应抗体，标记在膜上，可以达到更直观地判断结果以及更灵敏的效果。

技术研发人员：温建新,黎梅连,付雨思,李茹静,庄其山
受保护的技术使用者：百吉泰（厦门）医学科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13