一种几丁质酶突变体ChiM-BL及其应用的制作方法

本发明涉及一种几丁质酶突变体chim-bl及其应用，属于酶工程。

背景技术：

1、几丁质寡糖是几丁质水解产物，相比于几丁质其具有良好的水溶性，因此展现出更多的生物活性，在农业种植、食品以及医药等领域具有广泛的应用价值。目前几丁质寡糖的制备方式以化学法为主，通过强酸进行溶解从而制备不同类型产品。化学法由于加工过程中应用大量强酸(如浓盐酸、硫酸、磷酸)，从而带来一系列问题如环境污染、产物结构不完整等。因此急需开发绿色、环保、可持续的加工方法，随着国内外对于几丁质寡糖制备研究的深入，发现酶法能够很好的规避化学法的缺陷，酶法能够特异性制备不同聚合度和活性的几丁质寡糖。几丁质酶在酶法制备几丁质寡糖工艺中扮演重要角色，其能够定向切割几丁质内部糖苷键，从而形成不同分子量几丁质寡糖。目前限制酶法工艺推广的主要因素是几丁质酶生产成本高，催化效率低，因此需要研发高效几丁质酶。在我们前期研究中通过突变和筛选获得几丁质酶chim(专利申请号cn202110762467.x)，几丁质酶chim能够分解胶体几丁质生成几丁质寡糖，但是其水解效率仍有不足，需要进一步提升。

2、有鉴于此特提出本发明。

技术实现思路

1、本发明的目的就在于为了解决上述问题而提供一种几丁质酶突变体chim-bl及其应用，提高了水解效率，为其产业化应用奠定基础

2、本发明通过以下技术方案来实现上述目的，一种几丁质酶突变体chim-bl及其应用，其核苷酸序列如seqidno.1所示，氨基酸序列如seqidno.2所示，在应用时，含有上述编码基因的重组表达载体ppiczαa-chimbl，和含有权利上述编码基因的重组毕赤酵母工程菌株。

3、并在进行实现时，包括以下步骤：

4、(1)分析几丁质酶chim蛋白内部不同功能域，确定几丁质结合区域和linker肽段区域；

5、(2)优化几丁质酶chim几丁质结合区域，获得最佳融合突变体chim-chbd6；

6、(3)在最佳融合突变体chim-chbd6的基础上对linker肽段进行突变优化，获得突变体chim-bl；

7、(4)测定了重组突变体chim-bl的酶学特性；

8、(5)突变体chim-bl酶法制备几丁质寡糖。

9、本发明的技术效果和优点：通过理性设计获得酶催化效率提升的几丁质酶突变体chim-bl并对其进行特性表征，为其产业化应用奠定基础。

技术特征：

1.一种几丁质酶突变体chim-bl，其特征在于：其核苷酸序列如seq id no.1所示，氨基酸序列如seq id no.2所示。

2.一种几丁质酶突变体chim-bl的应用，其特征在于：含有权利要求1所述编码基因的重组表达载体ppiczαa-chimbl。

3.根据权利要求2所述的一种几丁质酶突变体chim-bl的应用，其特征在于：含有权利要求1或2所述编码基因的重组毕赤酵母工程菌株。

技术总结
本发明涉及酶工程技术领域，具体的说是一种几丁质酶突变体ChiM‑BL及其应用，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，以前期获得的几丁质酶ChiM为模板，通过优化几丁质酶结合区域和linker肽段获得催化活性提升的突变体ChiM‑BL。突变体ChiM‑BL可根据反应时间高效定向制备不同聚合度几丁质寡糖，表明其在几丁质寡糖酶法制备领域具有良好的应用价值，通过理性设计获得酶催化效率提升的几丁质酶突变体ChiM‑BL并对其进行特性表征，为其产业化应用奠定基础。

技术研发人员：王建荣,祝木金,陈微,王平,陈孟林,钟斌,高美芳,曹革
受保护的技术使用者：深圳润康生态环境股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15