一种线粒体病ECHS1基因突变标志位点及其应用的制作方法

本发明涉及生物，特别是涉及一种线粒体病echs1基因突变标志位点及其应用。

背景技术：

1、线粒体是细胞的“能量工厂”，其主要功能是利用氧化磷酸化产生能量。当线粒体功能紊乱导致机体能量供应不足时，会导致线粒体病(mitochondrial disease)的发生。线粒体病是迄今为止发病率最高的先天性代谢病，总体发病率约为1/5000，绝大部分发生于儿童。儿童线粒体病的临床表型十分复杂，不同的临床表型可由同样的致病基因突变导致，而同样的临床表型也可因不同的致病基因突变所致，这给儿童线粒体病的相关研究造成了一定的困难。绝大部分儿童线粒体病是遗传性的，可由线粒体dna和核dna突变导致。

2、迄今为止，约400个基因被报道可导致儿童线粒体病，其中底物代谢(脂肪酸氧化、丙酮酸代谢和三羧酸循环等)相关基因约占23％。

3、线粒体短链烯酰辅酶a水合酶1(echs1)是echs1基因编码的代谢酶，主要参与脂肪酸β氧化和支链氨基酸代谢等过程，其缺陷可导致线粒体短链烯酰辅酶a水合酶1缺乏症(echs1d)，是线粒体病的一类亚型。该病临床表型异质性高，实验室检查中部分患者会表现出线粒体氧化磷酸化功能紊乱和丙酮酸脱氢酶缺陷，其潜在的致病机制包括支链氨基酸代谢过程中的毒性中间代谢产物累积，以及线粒体氧化磷酸化功能障碍和线粒体稳态失调所致的器官和组织损伤，但具体的致病机制不清，尚需进一步的探究。目前世界范围内约发现了60个echs1的致病性突变位点，而echs1相关的致病突变还在不断被发现，因此挖掘新的突变位点并验证突变的致病性对于儿童线粒体病的诊断和治疗十分重要。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种线粒体病echs1基因突变标志位点及其应用，以解决上述现有技术存在的问题，本发明发现了echs1缺陷相关儿童线粒体病的7个新变异位点，通过功能分析验证了位点的致病性，本发明拓展了echs1的基因突变谱，为echs1缺陷相关儿童线粒体病的临床诊断和治疗提供重要参考。

2、为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

3、本发明提供一种线粒体病echs1基因突变的标志位点，所述标志位点为c.292g>a、c.334t>c、c.514g>a、c.656delt、c.712g>c、c.724g>a和c.739g>a突变位点中的一种或多种；

4、所述c.292g>a、c.334t>c、c.514g>a、c.656delt、c.712g>c、c.724g>a和c.739g>a突变位点依次位于echs1参考基因组序列的第2780、3350、4411、7275、7331、7343和7358位碱基处；其中，所述c.292g>a、c.334t>c、c.514g>a、c.712g>c、c.724g>a和c.739g>a突变位点碱基依次突变为a、c、a、c、a和a，所述c.656delt突变位点缺失碱基t；

5、所述echs1参考基因组序列的登录号为ng_042077.1。

6、本发明还提供用于检测所述的标志位点的试剂在制备echs1基因缺陷相关线粒体病辅助诊断或预测试剂盒中的应用。

7、进一步地，所述试剂包含检测所述标志位点的引物组。

8、进一步地，所述引物组包括：

9、检测c.292g>a突变位点的如seq id no：5-6所示的引物；检测c.334t>c突变位点的如seq id no：7-8所示的引物；检测c.514g>a突变位点的如seq id no：9-10所示的引物；检测c.656delt突变位点的如seq id no：13-14所示的引物；检测c.712g>c突变位点、c.724g>a突变位点和c.739g>a突变位点的如seq id no：15-16所示的引物。

10、进一步地，若所述c.292g>a、c.334t>c、c.514g>a、c.712g>c、c.724g>a和c.739g>a突变位点的碱基突变为a、c、a、c、a和/或a，或所述c.656delt突变位点缺失碱基t时，判断患者罹患echs1基因缺陷相关线粒体病。

11、本发明还提供一种辅助诊断和预测echs1基因缺陷相关线粒体病的试剂盒，包含所述的引物组。

12、本发明公开了以下技术效果：

13、本发明发现了echs1缺陷相关儿童线粒体病的7个新变异位点(c.292g>a、c.334t>c、c.514g>a、c.656delt、c.712g>a、c.724g>a和c.739g>a)，通过功能分析验证了位点的致病性。本发明拓展了echs1的基因突变谱，为echs1缺陷相关儿童线粒体病的临床诊断和预测提供重要参考。

技术特征：

1.一种线粒体病echs1基因突变的标志位点，其特征在于，所述标志位点为c.292g>a、c.334t>c、c.514g>a、c.656delt、c.712g>c、c.724g>a和c.739g>a突变位点中的一种或多种；

2.用于检测权利要求1所述的标志位点的试剂在制备echs1基因缺陷相关线粒体病辅助诊断或预测试剂盒中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述试剂包含检测所述标志位点的引物组。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述引物组包括：

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，若所述c.292g>a、c.334t>c、c.514g>a、c.712g>c、c.724g>a和c.739g>a突变位点的碱基突变为a、c、a、c、a和/或a，或所述c.656delt突变位点缺失碱基t时，判断患者罹患echs1基因缺陷相关线粒体病。

6.一种辅助诊断和预测echs1基因缺陷相关线粒体病的试剂盒，其特征在于，包含权利要求4中所述的引物组。

技术总结
本发明公开了一种线粒体病ECHS1基因突变标志位点及其应用，属于生物技术领域。所述标志位点为c.292G>A、c.334T>C、c.514G>A、c.656delT、c.712G>C、c.724G>A和c.739G>A突变位点中的一种或多种。本发明发现了ECHS1缺陷相关儿童线粒体病的7个新变异位点，通过功能分析验证了位点的致病性；本发明拓展了ECHS1的基因突变谱，为ECHS1缺陷相关儿童线粒体病的临床诊断提供重要参考。

技术研发人员：王茂峰,方合志,强建玲,王娅
受保护的技术使用者：东阳市人民医院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/14