一种固载在BSA蛋白上的改性磷脂及其制备方法与应用

本发明属于医学治疗诊断，尤其涉及一种固载在bsa蛋白上的改性磷脂及其制备方法与应用。

背景技术：

1、在医学治疗诊断中，抗磷脂抗体包括多种特异性不同的自身抗体，靶抗原为带负电荷的阴离子磷脂，如心磷脂、卵磷脂。抗磷脂抗体临床上主要存在于各种自身免疫性疾病和梅毒感染者体内。抗磷脂抗体可以导致梅毒试验假阳性反应，而正常人抗磷脂抗体为阴性。因此，医学上可利用抗磷脂抗体检测试验以进行梅毒鉴定。该检测具有廉价、快速和方便对于大量样本执行的优点。

2、传统检测抗磷脂抗体的方法是利用物理吸附的方式将磷脂固定在酶标板上面，然后利用附着在酶标板上面的磷脂与待检测样本中的抗磷脂抗体结合，实现对样本中的抗磷脂抗体的捕获，通过捕获的抗磷脂抗体显色并测定发光浓度，就能间接的读取样本中抗磷脂抗体浓度。但是，由于用物理吸附方式固定的磷脂在溶剂、加热等外部条件影响下容易从固体板上解脱和脱落，因此通过该方法制备的检验产品的稳定性较差。

技术实现思路

1、为解决上述背景技术中现有技术所存在的问题，本发明的目的在于提供一种固载在bsa蛋白上的改性磷脂及其制备方法与应用。

2、本发明是这样实现的，一种固载在bsa蛋白上的改性磷脂的制备方法，该方法包括以下步骤：

3、(1)将质量体积比为1～40mg：1000ul的磷脂、加成试剂在四氯化碳中混合充分反应，经过萃取、洗涤、干燥后得到改性的磷脂；其中，所述加成试剂包括质量体积比为13±0.2mg：9.3±0.2mg：1000ul的tmsn3、icl以及乙腈；

4、(2)将改性的磷脂溶于二甲基亚砜中得到溶液1，将修饰的牛血清血蛋白溶于pbs缓冲溶液中得到溶液2，将溶液1、溶液2混合充分反应，经过透析纯化和冷冻干燥，得到固载在bsa蛋白上的改性磷脂；其中，所述改性的磷脂、被修饰的牛血清血蛋白的质量比2～5：10。

5、优选地，在步骤(1)中，所述磷脂为心磷脂或卵磷脂。

6、优选地，在步骤(1)中，所述加成试剂与四氯化碳的体积比为1000ul：100～500ul。

7、优选地，在步骤(2)中，被修饰的牛血清血蛋白为带氟二苯并环辛炔fdibo修饰的牛血清血蛋白fdibo-bsa。

8、本发明进一步公开了上述制备方法所得到的固载在bsa蛋白上的改性磷脂。

9、本发明进一步公开了上述固载在bsa蛋白上的改性磷脂在制备抗磷脂抗体检测试剂中的应用。

10、本发明克服现有技术的不足，提供一种固载在bsa蛋白上的改性磷脂及其制备方法与应用。本发明通过将所需的磷脂和加成试剂在四氯化碳中混合充分反应，经过萃取洗涤干燥之后得到改性的磷脂，再将该改性的磷脂溶于二甲基亚砜中得到溶液1，将修饰的牛血清血蛋白溶于pbs缓冲溶液中得到溶液2，将溶液1、溶液2混合充分反应，经过透析纯化和冷冻干燥，得到固载在bsa蛋白上的改性磷脂。

11、在本发明中，所需的磷脂可以选择为心磷脂或卵磷脂，在进行改性处理后，所得改性的磷脂的疏水性脂肪酸侧链中双键发生加成反应，并且改性的磷脂中均含-n3取代基。其中，改性的心磷脂含有8个-n3，其具体结构式如下所示：

12、

13、改性的卵磷脂含有2个-n3，其具体结构式如下所示：

14、

15、在本发明中，被修饰的牛血清血蛋白优先选择为被修饰上带氟二苯并环辛炔(fdibo)的牛血清血蛋白(fdibo-bsa，按照文献chem.eur.j.2019,25,10328制备)；其中，牛血清血蛋白bsa为实验室一种常用的牛血清血蛋白，由8个左右带有活性氨基的氨基酸残基构成，被修饰的牛血清血蛋白fdibo-bsa的结构式具体如下：

16、

17、被修饰的牛血清血蛋白可以和改性的磷脂中的-n3发生加成反应，通过生成稳定的结构实现化学交联，从而达到实现蛋白固载的目的。

18、相比于现有技术的缺点和不足，本发明具有以下有益效果：

19、(1)本发明通过化学键直接将改性的磷脂牢固的与牛血清血蛋白进行交联，相对于物理吸附的方式，更加易于保留改性的磷脂量和抗磷脂抗体结合的空间，同时还可以根据需要利用化学合成的方法修饰上具有特异性、生物活性的官能团；

20、(2)所得到的固载在bsa蛋白上的改性磷脂可以直接用于抗磷脂抗体的检测，并且相对于传统的物理吸附磷脂的方法制备的检测产品，具有较高的稳定性。

技术特征：

1.一种固载在bsa蛋白上的改性磷脂的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述磷脂为心磷脂或卵磷脂。

3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述加成试剂与四氯化碳的体积比为1000ul：100～500ul。

4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤(2)中，被修饰的牛血清血蛋白为带氟二苯并环辛炔fdibo修饰的牛血清血蛋白fdibo-bsa。

5.权利要求1～4任一项制备方法所得到的固载在bsa蛋白上的改性磷脂。

6.权利要求5所述的固载在bsa蛋白上的改性磷脂在制备抗磷脂抗体检测试剂中的应用。

技术总结
本发明公开了一种固载在BSA蛋白上的改性磷脂及其制备方法与应用。本发明通过将所需的磷脂和加成试剂在四氯化碳中混合充分反应，经过萃取洗涤干燥之后得到改性的磷脂，再将改性的磷脂溶于二甲基亚砜中得到溶液1，将修饰的牛血清血蛋白溶于PBS缓冲溶液中得到溶液2，将溶液1、溶液2混合充分反应，经过透析纯化和冷冻干燥，得到固载在BSA蛋白上的改性磷脂。本发明通过化学键直接将改性的磷脂牢固的与牛血清血蛋白进行交联，更加易于保留改性的磷脂量和抗磷脂抗体结合的空间，同时还可以根据需要利用化学合成的方法修饰上具有特异性、生物活性的官能团，该固载在BSA蛋白上的改性磷脂可以直接用于抗磷脂抗体的检测，具有较高的稳定性。

技术研发人员：王晓剑,李月阳,毛贤贤,李迅,李炀洋,张树文,刘光明
受保护的技术使用者：南京工业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/14