黑毛石斛的检测试剂盒和检测方法

本发明涉及一种黑毛石斛的检测试剂盒和检测方法。

背景技术：

1、石斛是兰科草本植物，为中国传统名贵中药材，又称“千年润、千年草”，为古代文献中记载的九大仙草之一，被国际药用植物界称为“药界大熊猫”。主要分布于中国安徽、浙江、福建等地。其茎入药，属补益药中的补阴药：益胃生津，滋阴清热。石斛品种繁多，有黑毛石斛、金钗石斛、铁皮石斛、蜂腰石斛、球花石斛、长苏石斛、玫瑰石斛、铜皮石斛、翅梗石斛等。黑毛石斛(dendrobium williamsonii day&rchb.f.)是兰科石斛属的多年生草本植物。茎圆柱形，有时肿大呈纺锤形，干后金黄色；叶互生；总状花序，花苞片纸质，萼片和花瓣淡黄色或白色，狭卵状长圆形，花期4-5月。黑毛石斛始载于《中国高等植物图鉴》据《新华本草纲要》记载黑毛石斛：“全草可用于风湿，基同石斛，其商品药材称圆石斛。”味甘、淡，性寒，有生津益胃，清热养阴等功效，主治热病伤津，口干烦渴，病后虚热，阴伤目暗等症状。

2、各种石斛形态相似，入药的石斛因晒干切片，形态差异更小，因此常出现用便宜石斛冒充黑毛石斛的情况。目前石斛常用鉴定方法有基源鉴定(dna指纹图谱)、显微鉴别和理化鉴定。这些实验方法繁杂，且对实验技术水平要求高。而dna标记技术，是非常准确和简易的方法。只需要提取植物的dna，即可鉴定。但现还没有关于通过dna标记技术成功鉴别黑毛石斛的报道。

技术实现思路

1、为了克服现有鉴别技术的缺陷，本发明提供了一种黑毛石斛的基因片段，其核苷酸序列如seq id no.1所示。

2、本发明还提供了一种检测前述基因片段的试剂在鉴别黑毛石斛中的用途。

3、进一步地，所述试剂包括扩增seq id no.1所示核苷酸序列的试剂。

4、更进一步地，所述扩增的试剂包括seq id no.2～3所示的引物对。

5、本发明还提供了一种鉴别黑毛石斛的试剂盒，所述试剂盒包括检测seq id no.1所示核苷酸序列的试剂。

6、进一步地，所述试剂包括扩增seq id no.1所示核苷酸序列的试剂。

7、更进一步地，所述扩增的试剂包括seq id no.2～3所示的引物对。

8、本发明还提供了一种鉴别黑毛石斛的方法，它包括如下步骤：

9、a、提取待检样本中的dna；

10、b、用前述的试剂盒检测步骤a所得dna。

11、进一步，所述dna经扩增后含有seq id no.1所示核苷酸序列，判断待检样本是黑毛石斛。

12、本发明黑毛石斛基因片段的核苷酸序列为黑毛石斛特异性序列，通过检测该序列可以准确区分黑毛石斛与以及其他品种石斛植物，从而有效鉴定待检样本是否为黑毛石斛，为药材的真假鉴定提供指导，本发明方法操作简便，具有良好的应用前景。

13、下面通过具体实施方式对本发明做进一步详细说明，但是并不是对本发明的限制，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更，都是本发明保护的内容。

技术特征：

1.一种黑毛石斛的基因片段，其特征在于：其核苷酸序列如seq id no.1所示。

2.检测权利要求1所述基因片段的试剂在鉴别黑毛石斛中的用途。

3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于：所述试剂包括扩增seq id no.1所示核苷酸序列的试剂。

4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于：所述扩增的试剂包括seq id no.2～3所示的引物对。

5.一种鉴别黑毛石斛的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括检测seq id no.1所示核苷酸序列的试剂。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂包括扩增seq id no.1所示核苷酸序列的试剂。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于：所述扩增的试剂包括seq id no.2～3所示的引物对。

8.一种鉴别黑毛石斛的方法，其特征在于：它包括如下步骤：

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述dna经扩增后含有seq id no.1所示核苷酸序列，判断待检样本是黑毛石斛。

技术总结
本发明公开了一种黑毛石斛基因片段，还公开了检测黑毛石斛基因片段的试剂在鉴别黑毛石斛中的用途，以及鉴别黑毛石斛的试剂盒和方法。本发明检测试剂盒和检测方法可以准确、有效的鉴别黑毛石斛，特异性强，耗时短，应用前景良好。

技术研发人员：梅志强,吕朝相,王恺,郭侃,何嘉悦,付俊江
受保护的技术使用者：西南医科大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13