一种突变型Taq酶及其制备方法与流程

本发明涉及生物，具体地涉及一种突变型taq酶及其制备方法。

背景技术：

1、1969年，美国印第安那大学的微生物学家thomas brock和他的研究生hudsonfreeze从黄石国家森林公园火山温泉中发现了一种嗜热型海栖热袍菌t.aquaticus(taq)。1976年trela和他的华裔研究生钱嘉韵alice chien分离纯化得到了taq dna聚合酶。后来测得它的分子量65kd，全长2496个碱基,编码832个氨基酸。1986年6月，mullis的同事saiki首次将纯化的taq酶应用在pcr中，从此，开始了pcr质的飞跃，taq dna聚合酶大放异彩是在pcr反应中的应用。

2、随着pcr应用越来越多样化，实验要求的提升和生物样本复杂性的提高，“野生型”taq酶的缺点也逐渐凸显出来，如扩增效率低、特异性差、高at或gc含量样本扩增结果差、样本中或pcr系统中的有些抑制剂对反应有干扰等等，导致酶活性低、耐热性差的问题，远远不能满足人们的需求。因此需要对现有taq进行进一步的改造来改善taq dna聚合酶的酶活性和耐热性等。科研人员利用大肠杆菌可以任意突变，改造，然后通过扩增、酶切、连接、表达、提纯等步骤进行一次又一次的改造和筛选来生产要求更高的taq酶来适应更为广泛的工业生产以及科研应用。

技术实现思路

1、发明目的：

2、鉴于现有技术的上述缺点、不足，本发明提供一种突变型taq酶及其制备方法。

3、技术方案：

4、本发明的第一方面，提供了一种突变型taq酶，所述突变型taq酶的氨基酸序列如seq id no.1所示。

5、本发明的第二方面，提供了一种核酸，所述核酸编码本发明的第一方面所述的突变型taq酶，所述的核酸具有如seq id no.2所示的核苷酸序列。

6、本发明的第三方面，提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞含有第二方面所述的核酸。

7、进一步的，所述的宿主细胞选自大肠杆菌dh5α感受态细胞。

8、本发明的第四方面，提供了如第一方面所述突变型taq酶的制备方法，其特征在于，将市售taq酶基因的质粒定点突变，市售taq酶基因的氨基酸序列为seq id no.3，核苷酸序列为seq id no.4，得到如第二方面中核苷酸序列为seq id no.2的taq酶质粒，将taq酶质粒转化到感受态细胞中，从培养的细胞中分离纯化获得突变型taq酶。

9、本发明的第五方面，提供了所述突变型taq酶在扩增dna样本中的应用。

10、本发明的第六方面，提供了一种pcr扩增试剂盒，含有如第一方面所述突变型taq酶。

11、有益效果：

12、本发明通过突变氨基酸位点q592k、s612r、a643l、v649l、a689i、f697i、和v720i，得到突变型taq酶，在相同条件下的检测中突变型taq酶的活性较市售taq酶的活性有明显的提高，同时在热稳定性方面，突变型taq酶较市售taq酶有明显改善。

技术特征：

1.一种突变型taq酶，其特征在于：所述突变型taq酶的氨基酸序列如seq id no.1所示。

2.一种核酸，其特征在于：所述核酸编码如权利要求1所述的突变型taq酶，所述的核酸具有如seq id no.2所示的核苷酸序列。

3.一种宿主细胞，其特征在于：所述宿主细胞含有如权利要求2所述的核酸。

4.根据权利要求3所述的宿主细胞，其特征在于：所述的宿主细胞选自大肠杆菌dh5α感受态细胞。

5.如权利要求1所述突变型taq酶的制备方法，其特征在于：

6.如权利要求1所述突变型taq酶在扩增dna样本中的应用。

7.一种pcr扩增试剂盒，其特征在于：含有如权利要求1所述突变型taq酶。

技术总结
本发明涉及一种突变型Taq酶及其制备方法，所述突变型Taq酶的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明通过氨基酸突变位点Q592K、S612R、A643L、V649L、A689I、F697I、和V720I，得到突变型Taq酶，在相同条件下的检测中突变型Taq酶的活性较市售Taq酶的活性有明显的提高,同时在热稳定性方面，突变型Taq酶较市售Taq酶有明显改善。

技术研发人员：张胜有,任加庆
受保护的技术使用者：苏州赛普生物科技股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15